猪口蹄疫快速监控技术与ELISA技术的对比分析

<正>1猪口蹄疫快速检测卡简介1.1监测卡的原理检测卡利用抗体快速金标检测卡法(简称金标法)检测抗体效价。金标法是在酶联免疫吸附法的基础上发展起来的一种固相标记免疫测定新技术。其检测原理是,以微孔滤膜为载体,包被已知抗原,加入待检标本后,经滤膜的毛细管作用,标本中的抗体与胶体金结合的抗原相结合,再通过与膜上包被的抗原结合显色而达到检测目的。金标法的试剂为试纸条形式,即为金标试纸条。判定标准:口蹄疫抗体阳性≥1:     

猪瘟快速监控技术在猪瘟免疫中的应用

<正>1猪口蹄疫快速检测卡简介1.1监测卡的原理检测卡利用抗体快速金标检测卡法(简称金标法)检测抗体效价。金标法是在酶联免疫吸附法的基础上发展起来的一种固相标记免疫测定新技术。其检测原理是,以微孔滤膜为载体,包被已知抗原,加入待检标本后,经滤膜的毛细管作用,标本中的抗体与胶体金结合的抗原相结合,再通过与膜上包被的抗原结合显色而达到检测目的。金标法的试剂为试纸条形式,即为金标试纸条。判定标准:猪瘟抗体阳性≥1:32     

检测犬抗狂犬病毒抗体的胶体金免疫层析法的建立及应用

为建立一种简便快速的胶体金免疫层析方法(GICA)以用于检测犬抗狂犬病毒抗体,本研究运用间接反应一步法原理,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒用以标记抗犬IgG抗体形成金-抗犬IgG抗体复合物,制成金标结合垫,加上包被有狂犬病毒糖蛋白的硝酸纤维膜,即制成胶体金免疫层析试纸条.样品中狂犬病?　 毒抗体与金标记抗体结合后沿硝酸纤维素膜移动,与膜上的糖蛋白特异结合形成肉眼可见的红色线条.试验结果显示,GICA试纸条与抗狂犬病毒抗体有特异性反应,与犬瘟热病毒、犬细小病毒等的抗体无交叉反应;GICA与标准ELISA法比较的总符合率为99.4%.结果表明,GICA试纸条检测抗狂犬病毒抗体特异性强、成本低,操作简便,不需任何仪器,特别适用于野外以及现场使用.     

猪链球菌重组GDH蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立一种简便快速的胶体金免疫层析方法（GICA）以用于检测犬抗狂犬病毒抗体,本研究运用间接反应一步法原理．采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒用以标记抗犬IgG抗体形成金一抗犬IgG抗体复合物,制成金标结合垫,加上包被有狂犬病毒糖蛋白的硝酸纤维膜,即制成胶体金免疫层析试纸条。样品中狂犬病毒抗体与金标记抗体结合后沿硝酸纤维素膜移动,     

克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制

本试验旨在研制同时检测克伦特罗(CL)和莱克多巴胺(RAC)的多残留胶体金免疫层析试纸条(Multistrip).用细胞融合技术筛选CL和RAC杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,金标抗体竞争性膜层析技术研制Multistrip.该试纸条由样品垫、偶联垫、双检测线和质控线标记的NC膜、吸收垫等几部分构成,其中偶联垫上灌注有CL和RAC两种金标单克隆抗体,双检测线由检测抗原CL-OVA和RAC-BSA喷膜构成,间距2 mm.结果表明:多残留试纸条的CL和RAC目测检测限分别为1和2 ng·mL-1,检测时间5～8 min.基质呈阳性的真实样品用单残留试纸条、ELISA和GC-MS检测,结果一致,无假阳性或假阴性案例.该试纸条具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于现场检测和筛选.     

猪伪狂犬病病毒野毒抗体胶体金免疫层析试纸条的初步应用

为建立一种简单、快速、敏感、特异的猪伪狂犬病病毒野毒抗体血清学检测方法,本研究利用胶体金标记SPA蛋白作为金标垫,以重组g E蛋白和猪Ig G分别作为检测线和质控线,组装检测猪伪狂犬病病毒g E抗体的胶体金免疫层析试纸条。该试纸条肉眼于15 min内即可判定结果,检测PCV-2、PRRSV、PEDV、CSFV、PPV、PRV疫苗毒的阳性血清均为阴性,检测PRV野毒阳性血清的灵敏度达1∶1 280,与IDEXX g E-ELISA抗体检测试剂盒的符合率为95.31%,室温条件下可稳定保存6个月以上。本研究研制的PRV野毒抗体胶体金免疫层析试纸条操作简单、检测快速、敏感性高、特异性强,可用于PRV野毒感染的快速诊断,特别适合于现场检测。     

O型口蹄疫病毒免疫层析试纸条检测方法的建立

为建立一种快速、准确检测O型口蹄疫病毒（FMDV）抗原的胶体金免疫层析方法,将兔、豚鼠抗O型FM-DV多抗用DEAE-Sephose层析柱纯化。胶体金标记O型豚鼠口蹄疫抗体,形成金标探针并将其喷涂于玻璃纤维上。兔抗O型FMDV抗体和羊抗豚鼠IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测带和质控带,各部件按顺序装配形成快速诊断试纸条。如果待检样品中含有O型FMDV,它将与玻璃纤维上的胶体金探针和兔抗O型FMDV抗体形成夹心复合物,并在检测带被固定,沉集反应形成肉眼可见的红色条带。在田间试验中,53份试验样本分别用试纸条和反向间接血凝试验进行检测,2种方法的阳性率分别为95.45%和90.91%。评价试验证实,本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快速,具有良好的特异性和敏感性,非常适于基层兽医实验室诊断时使用。     

猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用

用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA).特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性.与其他方法对比检测证实了其敏感性.生产了一批免疫胶体金试纸条,检测36份临床样本,其中30份经免疫胶体金试纸条及ELISA、免疫荧光检测均为阳性.猪繁殖与呼吸综合征免疫胶体金抗体检测技术的建立为检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体提供了一种快速简便的方法.     

胶体金法与ELISA法检测盐酸克伦特罗的比较试验研究

[目的]本试验通过研究胶体金法与ELISA法在检测猪尿中盐酸克伦特罗的应用，得出两种方法在目前盐酸克伦特罗快速检测中结合使用的可能，从而在保证检测灵敏度和特异性的前提下，大大提高检测速度，并以此为基础建立一个不同于以前的监管模式。[方法]采用胶体金法和酶联免疫法(ELISA)进行比较。[结果]快速检测试纸条的灵敏度为5ng／nd，共检测442份猪尿样品，ELISA阳性7份，阳性率1．6％，胶体金阳性9例，阳性率2％；假阳性率为O．5％，符合率为99．5％；并可应用在宰后猪尿、猪肝检测中。【结论】胶体金法检测盐酸克伦特罗，具有操作简便、观察直观、快速、省时，其特异性、敏感性均达到ELISA水平；可作为饲养场、生猪中转站、屠宰场、菜市场筛查盐酸克伦特罗的重要手段，具有重要意义。     

猪伪狂犬病病毒gE抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg,检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg,血清最佳稀释度为1∶10,作用时间15 min,与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪布鲁菌(Brucella)阳性血清和PRVgE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带,与PRV标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果;试纸条在室温保存6个月,其特异性和敏感性没有明显变化;与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较,1 164份猪血清的符合率均为90.55%。制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。     

柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法

利用柞蚕微孢子虫孢子液直接免疫家兔获得柞蚕微孢子虫多克隆抗体后,分别采用双抗夹心法和竞争法制作胶体金免疫层析试纸条,建立能简便、快捷、准确诊断柞蚕微粒子病的柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法。双抗夹心法和竞争法分别是将柞蚕微孢子虫多克隆抗体与25 nm和17 nm的胶体金颗粒结合并固定在金标垫上,然后均将羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜上作为质控点(C),但是2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的反应模式不同:前者是以柞蚕微孢子虫多克隆抗体作为检测点(T),而后者以柞蚕微孢子虫孢壁蛋白作为检测点(T)。2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的检测时间均为10 min,检测灵敏度为0.8×107个/mL,与柞蚕血淋巴无交叉反应,特异性强,操作简单,其中,以双抗夹心法制作的试纸条显色更清晰,结果更可靠,更具实用价值。     

柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

为建立一种通过胶体金免疫层析技术快速检测柱状黄杆菌的方法,试验采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20 nm的胶体金颗粒,将其标记纯化的抗柱状黄杆菌单克隆抗体(McAb)制备出金标抗体结合垫。纯化的兔抗柱状黄杆菌多克隆抗体(PcAb)和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)上,制备出胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性及稳定性进行测定。结果显示,该试纸条检测灵敏度为1×10³ CFU,检测时间为3.5 min,制备的试纸条与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌均无交叉反应,且稳定性好。本研究首次成功建立了柱状黄杆菌胶体金快速检测方法,所制备的试纸条具有灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于柱状黄杆菌的检测。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金检测试纸卡的研制

为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-3D10株和4H11株分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗原检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与PCR方法对比总符合率为93．3％。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,可为临床诊断提供参考。     

犬狂犬病毒抗体胶体金检测试纸卡的研制

为快速检测犬狂犬病毒IgG抗体,应用狂犬病毒G蛋白作为捕获抗原,鼠抗狂犬病毒G蛋白单克隆抗体和羊抗犬IgG分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗体检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与快速荧光灶抑制实验检测值对比总符合率为82.1%。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测犬狂犬病毒IgG抗体,可为临床诊断和宠物犬狂犬疫苗免疫效果的评价提供参考。     

旋毛虫53kuES重组蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制

为建立一种简易、快速检测动物血清中的旋毛虫排泄分泌(Excretory-secretory,ES)抗原的胶体金免疫层析试纸法,本研究选用旋毛虫53 ku ES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(MAb).利用辛酸-饱和硫酸铵法和亲和层析柱联合法纯化MAb及兔抗旋毛虫53 ku ES多克隆抗体,利用枸橼酸三钠还原法制备的胶体金颗粒标记MAb,制备免疫金标试纸条.结果表明,获得的2株IgG1型杂交瘤细胞系4D10和5A2能够稳定分泌抗体,且效价高;胶体金标记MAb 4D10所制备的试纸条具有重复性好、灵敏性和特异性高的优点;该试纸条4℃条件下可密封保存6个月以上.     

呕吐毒素残留快速检测试纸条的研制

为研制一种用于检测牛奶中呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）残留的快速检测试纸条,试验以人工合成抗原DON-OVA和羊抗鼠二抗为原料,包被硝酸纤维素膜;以抗DON单克隆抗体为原料,制备金标抗体,并冻干保存于反应板微孔中,最终制备出可用于检测牛奶中DON残留的胶体金快速检测试纸条。结果显示,该检测试纸条检测限为100 μg/L,重复性、特异性均较好,可用于检测牛奶中DON残留。     

犬冠状病毒胶体金检测卡制备与评价

为快速检测犬冠状病毒,研究利用胶体金免疫层析技术制备和评价犬冠状病毒抗原检测卡。试验通过将胶体金标记的CCV Ab1和鼠IgG涂布于聚酯纤维膜上作为标记垫,生物素耦联的CCV Ab2处理在样品垫上,链霉亲和素和羊抗鼠IgG包被于NC膜上分别为检测线和质控线,与吸水纸和PVC底板制备犬冠状病毒抗原胶体金检测卡,并对其评价。结果:该检测卡不与其他病毒发生交叉反应,可检测浓度低至2 ng/mL的样本,24月是稳定的。结论:该测试板具有良好的特异性、灵敏度、重复性和稳定性,并且与RT-qPCR的结果较符合。因此,该检测卡能快速、准确地检测犬冠状病毒,为动物临床诊断和治疗提供参考。     

Development of Colloidal Gold Rapid Detection Method of β-lactams and Tetracyclines in Milk

Colloidal gold immunochromatographic was uesd for the determination of β-lactams and tetracyclines in milk. Tetracyclines hapten was obtained by chemical synthesis. Immunogen and envelope antigen were prepared by cephalosporins and tetracyclines hapten coupled to carrier protein. Monoclonal antibodies were obtained by immunogen immunizing mice. A rapid and simple colloidal gold immunochromatographic assay was established for the determination of β-lactams and tetracyclines in milk. 12 kinds of β-lactams and 4 kinds of tetracyclines were detected at the same time by the strip. The milk sample could be used to be detected without dilution. The detection time could be 3 to 5 min. The method could be efficiently used for mass samples screening in primary laboratory.     

新城疫病毒胶体金免疫层析试纸条的制备

为了建立一种简便、快速检测新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）的方法,本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记NDV单克隆抗体6C4制备免疫检测探针。在硝酸纤维素膜上,用微定量喷头喷好1条病毒检测线（T线）和1条羊抗鼠抗体质控线（C线）,制备免疫层析检测试纸条,使用该制备好的检测试纸条可在10 min内检测出新城疫病毒。试纸条检测NDV的灵敏度比HA试验结果提高8倍,与禽流感病毒未出现交叉反应,用缓冲液对照测试,结果为阴性,在密封、干燥、低温的条件下,试纸条的灵敏性与特异性没有明显变化。本研究建立的NDV免疫层析检测法具有特异、灵敏、稳定、操作简单等特点,符合现场快速检测的要求。