基本培养基对尾巨桉愈伤组织诱导及再生的影响

为建立尾巨桉高效再生体系,研究基本培养基对尾巨桉再生的影响,以尾巨桉优良无性系无菌苗茎段为外植体,探讨MS、SDM和SPM 3种基本培养对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化以及增殖的影响。结果表明,在添加了2 mg/L PBU和0.05 mg/LIAA的MS培养基上,茎段外植体5 d后愈伤组织诱导率达96.3%以上;将愈伤组织接种在添加1 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA的MS培养基上,诱芽率达91.8%,不同基本培养基对不定芽的增殖及伸长的影响差异达到极显著水平。     

易感线虫番茄品种Rutgers遗传转化体系的建立

【目的】旨在建立Rutgers番茄品种的遗传转化体系。【方法】以易感线虫番茄品种Rutgers为实验材料,采用农杆菌介导法,对无菌苗的苗龄、筛选培养基中Hyg的浓度大小、不定芽诱导培养基的激素配比和生根培养基4个方面进行优化,从而建立Rutgers品种的遗传转化体系。【结果】选择9～11 d的无菌苗的叶片分化愈伤组织的效果最好,筛选培养基中Hyg的浓度为10 mg/L时可以有效的筛选转基因的抗性芽,愈伤组织诱导不定芽培养基中最佳激素配比为6-BA 2 mg/L+IAA 0.1 mg/L。以1/2MS添加不同浓度IBA(0.05、0.1、0.15、0.20 mg/L)进行生根比较,再生芽在1/2 MS+IBA 0.1 mg/L生根培养基上生根最好。【结论】首次建立了Rutgers番茄品种的遗传转化体系,为番茄的抗根结线虫转基因育种打下基础。     

尾叶桉的组织培养与快速繁殖

[目的]为尾叶桉资源开发及其转基因研究奠定基础。[方法]以尾叶桉无菌苗的下胚轴为外植体,研究不同激素种类及配比对其愈伤组织诱导、芽分化和增殖的影响,并分析不同浓度IBA对其生根的影响。[结果]不同激素组合对愈伤组织的诱导形成均有显著影响,诱导率为35.0%~95.0%。诱导尾叶桉愈伤组织形成的最适培养基为MS+6-BA0.60 mg/L+2,4-D0.10 mg/L,诱导芽分化的最适培养基为MS+NAA0.10 mg/L+TDZ2μmol/L,诱导芽增殖的最适培养基为MS+6-BA0.40 mg/L+NAA0.05 mg/L。尾叶桉再生苗的最适生根培养基为1/4 MS+0.50 mg/LIBA。生根苗在自然环境中炼苗9 d后再移栽,其成活率在90%以上。[结论]接种初期暗培养5 d再转入光照培养和添加50.00~100.00 mg/L Vc,均可有效防止尾叶桉愈伤组织的褐化,提高诱芽率。     

3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

马铃薯再生体系的建立

马铃薯再生体系的建立是进行马铃薯遗传转化的前提条件.本研究以马铃薯克新1号为植物材料,对马铃薯愈伤组织的诱导、不定芽的分化进行了最佳培养基优化.结果表明,马铃薯诱导愈伤组织的最佳培养基激素浓度是2.5mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA,且茎段的诱导率要高于叶片的诱导率.不定芽分化的最佳培养基激素浓度为2.0mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA、5.0 mg/L GA3,诱导率为30％,诱导的不定芽在0.2 mg/L NAA生根培养基中可以正常生根.本研究初步建立了马铃薯再生体系,为后续的金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎转基因马铃薯疫苗的制备奠定了基础.     

抗生素与除草剂对尾巨桉离体植株再生的影响

为研究不同抗生素和除草剂对尾巨桉无性系SP7再生体系建立过程中叶片诱导植株再生的影响,在尾巨桉无性系SP7不定芽诱导和生根诱导培养基中添加不同浓度的卡那霉素、潮霉素、草甘膦和草胺膦。结果表明:卡那霉素、潮霉素、草甘膦和草胺膦对桉树无性系SP7叶片不定芽诱导和生根诱导过程中的影响显著。潮霉素、卡那霉素、草甘膦、草胺膦浓度分别为10、40、40、2.5 mg/L时不定芽的产生完全受到抑制;在生根诱导培养基中分别添加8 mg/L潮霉素、50 mg/L卡那霉素、30 mg/L草甘膦、7.5 mg/L草胺膦时,不定芽的生根完全受到抑制。     

“全明星”草莓叶片诱导不定芽发生的研究

以"全明星"草莓脱病毒试管苗叶片为试验材料,诱导不定芽发生,为草莓再生体系建立及遗传转化奠定基础。在MS基本培养基中添加不同浓度的6-BA和IAA,调控叶片分化不定芽,筛选出适宜叶片分化不定芽的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA+3%蔗糖+0.65%琼脂,不定芽分化率达53%。     

川芎的组织培养技术研究

探索川芎的不同组培条件,优化其诱导和分化培养基。以川芎根、茎段和叶片作外植体进行组织培养,获得了大量的组培苗,建立了相应的植株再生系统。川芎根诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 1.2 mg/L;茎段及叶片诱导愈伤组织的最佳培养基均为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L;根愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 2.2 mg/L+IAA 0.3 mg/L;茎段及叶片愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+KT 2.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L。根外植体在愈伤组织、分化不定芽和生根方面的诱导率分别为84%、86%和87%;茎段和叶片愈伤组织的诱导率达到92%和96%,其不定芽分化率为98%,生根率为93%。经炼苗后,获得的组培苗的移栽成活率达98%。提出了优化激素搭配的培养基,得到了高效的诱导率、分化率和生根率。     

欧美杨108离体叶片和茎段再生体系的优化(英文)

[目的]优化欧美杨108的无性繁殖再生体系的培养条件。[方法]以欧美杨108无菌苗为材料,采用正交试验优化叶片直接分化和茎段愈伤组织分化再生体系的培养条件。[结果]欧美杨108的叶片适宜在光照下进行直接再生分化,茎段适宜在光照下进行愈伤组织诱导再生分化。叶片不定芽分化的培养基为MS基本培养基(琼脂7.0 g/L、pH 6.0、蔗糖20 g/L)附加0.6 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA;茎段愈伤组织诱导培养基为WPM固体培养基附加0.75 mg/L KT和1.5 mg/L 2,4-D。不定芽诱导生根培养基为WPM固体培养(蔗糖30 g/L)附加2.0 mg/L IBA。[结论]该研究优化了欧美杨108叶片的直接分化再生体系和茎段愈伤组织再生体系的培养条件,为其组织培养及遗传转化体系的构建提供了基础支持。     

欧美杨108离体叶片和茎段再生体系的优化

[目的]优化欧美杨108的无性繁殖再生体系的培养条件。[方法]以欧美杨108无菌苗为材料,采用正交试验优化叶片直接分化和茎段愈伤组织分化再生体系的培养条件。[结果]欧美杨108的叶片适宜在光照下进行直接再生分化,茎段适宜在光照下进行愈伤组织诱导再生分化。叶片不定芽分化的培养基为MS基本培养基(琼脂7.00 g/L、pH 6.00、蔗糖20 g/L)附加0.60 mg/L 6-BA和0.20 mg/L NAA;茎段愈伤组织诱导培养基为WPM固体培养基附加0.75 mg/L KT和1.50 mg/L 2,4-D。不定芽诱导生根培养基为WPM固体培养(蔗糖30 g/L)附加2.00 mg/L IBA。[结论]优化了欧美杨108叶片的直接分化再生体系和茎段愈伤组织再生体系的培养条件,为其组织培养及遗传转化体系的构建提供了基础支持。     

普那菊苣再生体系的优化

以普那菊苣叶片、叶柄、茎段为外植体,比较了在含不同激素浓度配比的MS培养基上愈伤组织、芽分化以及根再生的情况,优化普那菊苣组织培养再生体系。结果表明,0.1%Hg Cl2灭菌8 min时,能有效地去除外植体表面上的微生物,而且对外植体的伤害较轻;叶片、叶柄和茎段均能通过组织培养获得再生植株,其中,叶片外植体诱导效果最佳,茎段外植体诱导效果最差;普那菊苣叶片的极性对愈伤组织的形成以及不定芽的产生没有显著影响;外植体类型是影响愈伤组织、芽分化以及根再生的主要因素。优化的普那菊苣再生体系为:使用叶片外植体,愈伤组织和芽分化诱导培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+Ag NO30.5 mg/L+Vc 0.3 mg/L或MS+KT1.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L+CH 100 mg/L,生根培养基为MS+NAA 0.2 mg/L或MS+IBA 0.2 mg/L。     

尾巨桉 DH32－26组培快繁技术

[目的]探索尾巨桉DH_(32-26)组培快繁技术,为其规模化生产提供参考。[方法]采用组织培养手段,以尾巨桉DH_(32-26)半木质化萌发茎段为材料,对外植体诱导及无菌组织培养体系进行研究。[结果]最佳外植体诱导培养基为改良MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5mg/L,发芽率为92.3%;最佳增殖培养基为改良MS+6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖个数为3.7;最佳生根培养基为改良1/2MS+IBA 0.2 mg/L+ABT 0.3 mg/L,生根率可达98.3%。[结论]该研究获得了尾巨桉初代诱导、增殖和生根适宜培养基和培养条件,初步达到工厂化生产要求。     

根癌农杆菌介导转录因子CBF1基因对菊花的转化

利用根癌农杆菌介导法对菊花品种'小金黄'叶片进行遗传转化,研究影响菊花转化的若干因素,建立一套高效的遗传转化体系.结果表明:2 d的预培养,OD600值约为0.5的农杆菌菌液添加50 mg/L AS,侵染时间3 min,2 d的共培养,从分化培养基获得的抗性芽在生根培养基MS+0.4 mg/L NAA+10 mg/L Km+100 mg/L Cef上进行延迟筛选,有利于获得较高的转化效率.PCR检测表明,CBF1基因已整合到菊花基因组中,共获得18株转基因植株,在抗性株系中PCR阳性率为36.7%.     

优选盆栽小菊高效再生及转化体系的建立

为筛选最适盆栽小菊品种,建立再生转化体系,以11个盆栽小菊品种无菌苗叶片为外植体,比较不同植物生长调节剂配比和抗生素对叶片愈伤组织诱导、不定芽分化及生根等过程的影响。结果表明,11个品种中再生率最高的为微风深红,其最适分化培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,再生率为95.0%;叶片分化对卡那霉素和潮霉素的抗性选择压分别为15、10 mg/L;对植株生根的抗性选择压分别为10、8 mg/L;羧苄青霉素抑菌浓度最适范围为200～400 mg/L。本研究建立了盆栽小菊叶片外植体的高效再生及转化体系,为今后菊花的转基因工作奠定良好的基础。     

光皮桦叶片再生体系的建立

【目的】建立光皮桦叶片高效再生体系,为光皮桦的良种培育及遗传转化研究提供依据。【方法】以光皮桦无菌叶片为外殖体,分别用含0.6 mg/L TDZ 的MS、WPM和1/2MS培养基进行不定芽诱导分化,筛选最佳基本培养基;向筛选出的最佳基本培养基中添加0.05 mg/L NAA及不同质量浓度（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mg/L）TDZ的激素组合组成不定芽分化培养基,用于诱导不定芽分化,筛选最佳不定芽诱导分化培养基;以1/2MS培养基为基本培养基,分别附加0,0.05,0.1,0.5,1.0,2.0 mg/L的IBA或0.5,1.0,2.0,3.0 mg/L的NAA组成生根培养基,用于再生苗生根,筛选最佳生根培养基,建立光皮桦叶片再生体系。【结果】光皮桦无菌叶片诱导不定芽的最适基本培养基为MS培养基,其诱导的不定芽最多,且芽生长状况良好,颜色深绿;最适不定芽诱导分化培养基为：MS+TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上叶片丛生芽诱导率可达到80.00%,平均不定芽数高达12.00个,且芽生长健壮,呈深绿色;最适再生苗生根培养基为：1/2MS+IBA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上再生苗的生根率达100%,平均根数为14.5个,平均根长为11 cm,根较粗壮,基部无愈伤组织,且产生了很多毛细根。【结论】建立了光皮桦无菌苗叶片的高效再生体系。     

秘鲁番茄高效再生体系的研究

以秘鲁番茄的叶片和茎段为外植体,研究不同外植体种类、激素配比对秘鲁番茄愈伤组织诱导、分化和不定芽生根的影响,以期建立秘鲁番茄组织培养高效再生体系。结果表明:秘鲁番茄的叶片较茎段更适宜愈伤组织诱导与分化,以叶片为外植体时,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,愈伤组织诱导率高达100.0%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,不定芽的分化率高达92.4%。以茎段为外植体时,最佳诱导愈伤培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.1 mg/L IAA,愈伤组织诱导率高达95.8%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,不定芽的分化率高达86.5%。不定芽最适宜的生根培养基为MS+1.0 mg/L NAA,生根率达100.0%。采用草炭土+珍珠岩(体积比1∶1)的混合基质作为移栽基质,移栽成活率可达90%以上。     

绿萝组织培养和遗传转化条件优化

为优化绿萝离体再生条件，建立更高效的遗传转化体系，分别以绿萝叶片和叶柄为外植体，比较不同植物生长物质对绿萝不定芽诱导和植株离体再生的影响。并通过PCR技术克隆拟南芥AtFALDH基因，利用农杆菌介导法对绿萝愈伤组织进行遗传转化，比较不同转化条件下绿萝愈伤组织抗性不定芽诱导率。结果表明，绿萝叶柄愈伤组织和不定芽诱导效果均优于叶片。绿萝叶片愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D，该培养基下诱导率大约为61.5%；叶柄愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA，该培养基下诱导率达到97.8%。绿萝叶片不定芽诱导最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，该培养基下诱导率接近100%；叶柄不定芽诱导最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA，该培养基下诱导率约为100%，但叶柄来源的愈伤组织诱导产生的不定芽数量较多，而且生长更旺盛。生根最适培养基为1/2 MS+0.05 mg/L NAA，该培养基下生根...     

激素和硝酸银对芥菜型油菜下胚轴再生植株的影响

为建立芥菜型油菜高效遗传转化体系,以芥菜型油菜品种‘四川黄籽’的下胚轴为外植体,采用农杆菌介导法进行遗传转化,对愈伤诱导、芽分化及生根培养3个阶段的激素、硝酸银及其配比进行优化处理。结果表明:用含1.0 mg/L 2,4?D的预培养基诱导愈伤,愈伤再生率达到100%;用含3.0 mg/L 6-BA+5.0 mg/L AgNO3的分化培养基诱导芽再生,芽再生率达28.33%,平均芽丛数为1.73个;在含2.5 mg/L IBA+0.05mg/L NAA生根培养基中,不定芽生长11 d后开始生根,生根率达到100%;经PCR检测抗卡拉霉素转化苗,阳性率达到23.80%,且GUS染色呈阳性,说明建立的芥菜型油菜遗传转化体系高效可行。     

农大5号钙果叶片芽诱导及其植株再生研究

采集定植于温室中苗木上的叶片和组培瓶中农大5号钙果分化苗、壮苗叶片,进行离体叶片再生芽诱导及其植株再生体系研究。结果表明,温室叶片诱导不定芽的最佳培养基为1/2MS+IAA 0.1 mg/L+NAA0.05 mg/L+6-BA 0.8 mg/L,培养基中全部元素减半;组培分化苗叶片和壮苗叶片诱导不定芽的最佳培养基为1/2MS+IAA 0.05 mg/L+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.8 mg/L,培养基中大量元素减半;辅助因子以培养基中添加AgNO_3 0.2 mg/L、全光照、叶片反放和带叶柄的叶基部等措施配合取得了最高的芽诱导率。     

马铃薯叶片愈伤组织再生体系的建立

以8个马铃薯品种(系)为试材,进行叶片离体再生研究。结果表明,云薯501愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.3 mg/L+GA310 mg/L,愈伤诱导率为100%,诱导不定芽分化的优化培养基为MS+6-BA 3 mg/L+GA310 mg/L,芽的分化率为86.3%;会-2的愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L+GA310 mg/L,愈伤诱导率为95.7%,诱导不定芽分化的优化培养基为MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.02 mg/L+GA310 mg/L,芽的分化率为65.4%。上述2个品种适宜用作马铃薯转基因实验的载体,其他6个马铃薯品种(系)的愈伤诱导率很低,有的品种(系)没有愈伤组织产生,不能作为马铃薯基因转化的载体。