一例查干湖异育银鲫洪湖碘泡虫病原的鉴定与生物信息学分析

为了鉴定东北地区异育银鲫Carassius auratus gibelio感染的病原体是否为洪湖碘泡虫Myxobolus honghuensis,在吉林省查干湖某异育银鲫养殖基地获取病鱼,采用病鱼体外观察、虫体形态学观察与可量形状测定,对该寄生虫进行了初步鉴定,并对该寄生虫的18S r DNA进行克隆、测序与生物信息学分析。结果表明:病鱼症状具有典型的碘泡虫感染特征;可量形状测定结果表明,虫体外观与尺寸均与洪湖碘泡虫接近;生物信息学分析表明,该虫的18S r DNA与Gen Bank中登录号为JF340216的洪湖碘泡虫同源性达到99.3%;系统发育树显示,与已知洪湖碘泡虫为同一进化分支,确定该病为洪湖碘泡虫感染。本研究中,首次报道了东北地区一例早期感染洪湖碘泡虫的异育银鲫病例,研究结果可为碘泡虫的防治提供参考。     

镜鲤野鲤碘泡虫病的诊断与组织病理损伤研究

【目的】明确引起四川省某养殖场镜鲤(Cyprinus carpio L.)鳃出现乳白色赘生物的病原,探讨其对鳃组织的病理损伤,为该病的诊断和防治提供科学依据。【方法】采集发病症状明显的鱼,对其进行剖检、病原学检测(细菌、真菌、寄生虫)和分子生物学鉴定;采集鳃组织,通过病理学观察分析其致病性。【结果】病鱼脾和肾组织均未分离到细菌;鳃丝压片可见真菌菌丝,孢囊压片可见大量寄生虫孢子,孢子内含有2个明显的“八”字形对称极囊,其形态与粘孢子虫类寄生虫形态特征相似。该孢囊的18S rRNA基因扩增序列(GenBank登录号：KT240127)与碘泡虫(Myxobolus)的18S rRNA序列同源性最高,达92%～97%;在系统发育树中,该孢囊与野鲤碘泡虫(Myxobolus koi)(GenBank登录号为FJ841887和KJ725077)聚为一族。组织病理学观察发现：野鲤碘泡虫以大孢囊的形式仅寄生于鳃弓和鳃丝,形成巨大的寄生虫孢囊,囊内包裹大量成熟孢子;鳃小片增生和坏死,可见大量炎性细胞浸润,表现为寄生虫性、增生性和坏死性鳃炎。【结论】野鲤碘泡虫为本次引起镜鲤鳃乳白色赘生物的病原。本研究首次...     

洪湖碘泡虫多克隆抗体的制备及免疫特性分析

利用蔗糖密度梯度离心法分离纯化洪湖碘泡虫,经反复冻融、液氮研磨提取可溶性蛋白,免疫小鼠制备得到多克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFAT)、免疫印迹分析(Western blotting)对多克隆抗体的免疫特性进行分析。间接ELISA法测定多抗血清的效价为1∶25 600;IFAT荧光定位显示洪湖碘泡虫的抗原主要位于极丝、孢子壳瓣的四周及底部一特定位置;Western blotting印迹分析显示该多抗血清与洪湖碘泡虫可溶性蛋白中约10条带发生反应,该可溶性蛋白中具有免疫原性的蛋白分子质量大小分别约为180、130、78、75、62、52、42、36、34、28ku。该多抗血清与碘泡虫属及单极虫属的一些粘孢子虫种类存在一定程度的交叉反应。     

草鱼饼形碘泡虫病

本病已知流行于广东、广西、福建、湖南，湖北等养鱼地区，其他省份可能也有此病流行，因随着省间鱼种运搬，病原体也可随之传播他处。据调查，1969年广东南海水产养殖场当时有600多万尾草鱼苗欲运往云南，因天气关系，飞机不能起飞，放到石井鱼苗培育组培育而发病，这可能是本病在广东地区较早的记录。现在已知，广东佛山、肇庆、惠阳、汕头、湛江等地区，都有本病流行，成为草鱼种常见严重疾病之一。     

链碘泡虫孢子超微结构的研究

本文对白链疯狂病的病原体－链碘泡虫孢子的超微结构进行了观察,发现其孢子由孢壳,极囊及孢质组成,孢壳由两壳瓣组成,壳瓣在链脊处加厚,两者通过微管连接;孢子具有两个大小不等的梨形极囊,极丝6－7圈沿极囊纵轴螺旋缠绕在基质周围,极囊的前端处有极囊帽,其宽而平部分罩住极囊前端,此处极囊壁具有极丝排出管,极囊壁由“暗－亮－暗”三层组成,外层周围环绕一层的电子致密物质,孢质中具有两个细胞核,还有线粒体,内质网,嗜碘泡等细胞器,大量的小球状电子致密颗粒集中在孢质及极囊周围。     

异育银鲫孢子虫病的防治

异育银鲫作为里下河地区淡水养殖的当家品种,近年来其孢子虫病的猛烈发生制约了养殖者的积极性,许多养殖者已到了谈孢色变、无计可施的地步。一、主要病原异育银鲫喉孢子虫病、异育银鲫鳃孢子虫病、异育银鲫鳃丝孢子虫病、异育银鲫体表孢子虫病、异育银     

鲤吉陶单极虫病血液学研究

对患吉陶单极虫病鲤鱼的血液学进行了初步研究,结果表明:病鱼的白细胞数量增多;红细胞数量减少,体积变小,平均血红蛋白含量降低,幼稚的和破碎变形的红细胞增多;分叶的嗜中性粒细胞增多,体积变大;大淋巴细胞增多,血栓细胞减少.在病鱼外周血中未见“未明血液生物体“.     

草鱼饼形碘泡虫病防治初探

草鱼饼形碘泡虫病是严重危害鱼苗的粘孢子类寄生虫病，死亡率高达90％以上，目前治疗方法未见有新的进展。以饼形碘泡虫生物学特征为研究依据探索防治方法，试验结果表明：用含碘药物进行治疗，孢子、胞囊结构有明显变化。     

关于阿维菌素对异育银鲫的急性毒性和组织病理研究

采用每24h换液式毒性试验法研究了不同浓度（0,01～2．56mg／L）的阿维菌素对异育银鲫Allogynogenetic cruciancarp的急性毒性,并对暴露在0（对照）、0．01、0．04mg／L阿维菌素溶液中养殖21d后异育银鲫的鳃、肾、肝、脾和脑组织器官的病理切片进行了观察。结果表明：阿维菌素对异育银鲫24、48、72h和96h LC50分别为0．21、0．14、0．08、0．06mg／L,安全浓度为0．019mg／L;对照组鱼元组织病理变化。0．01mg／L浓度组鱼只在鳃、肝脏和脾脏的部分细胞中出现颗粒变性或空泡变性轻度病理变化。0．04mg／L浓度组鱼出现严重的病理损伤：1）鳃小片尖端膨胀,基部上皮细胞脱落,部分鳃小片发生融合等;2）肾脏中肾小球充血,肾小管透明变性,部分肾小管上皮细胞核溶解消失;3）肝脏中肝细胞空泡变性,细胞核膜破裂、核仁溶解消失,病变严重的肝细胞坏死;4）脾脏中出现网状组织增生和铁血黄素沉淀;5）脑组织中神经细胞空泡变性,部分细胞核移位到边缘。     

关于阿维菌素对异育银鲫的急性毒性和组织病理研究

采用每24 h换液式毒性试验法研究了不同浓度(0.01～2.56 mg/L)的阿维菌素对异育银鲫Allogy-nogenetic crucian carp的急性毒性,并对暴露在0(对照)、0.01、0.04 mg/L阿维菌素溶液中养殖21 d后异育银鲫的鳃、肾、肝、脾和脑组织器官的病理切片进行了观察。结果表明:阿维菌素对异育银鲫24、48、72 h和96 h LC50分别为0.21、0.14、0.08、0.06 mg/L,安全浓度为0.019 mg/L;对照组鱼无组织病理变化。0.01 mg/L浓度组鱼只在鳃、肝脏和脾脏的部分细胞中出现颗粒变性或空泡变性轻度病理变化。0.04mg/L浓度组鱼出现严重的病理损伤:1)鳃小片尖端膨胀,基部上皮细胞脱落,部分鳃小片发生融合等;2)肾脏中肾小球充血,肾小管透明变性,部分肾小管上皮细胞核溶解消失;3)肝脏中肝细胞空泡变性,细胞核膜破裂、核仁溶解消失,病变严重的肝细胞坏死;4)脾脏中出现网状组织增生和铁血黄素沉淀;5)脑组织中神经细胞空泡变性,部分细胞核移位到边缘。     

银鲫与普通鲫早期胚胎发育的比较研究

为了解黑龙江水系银鲫Carassius auratus gibelio和普通鲫C.auratus auratus的胚胎发育过程,对银鲫(3n♀×3n♂,SS)和普通鲫(2n♀×2n♂,DD)的胚胎发育过程进行了比较观察。结果表明:SS(DD)成熟的卵子呈浅黄色,卵膜透明,圆形,有黏性,卵径为1.3¹.7 mm(1.21.7 mm(1.2¹.6 mm);水温为(23±1)℃条件下,SS(DD)受精后1 h 08 min(1 h 03 min)进入卵裂期,受精后2 h 54 min(5 h 02 min)进入囊胚期,受精后8 h 06 min(6 h 49 min)进入原肠胚期,受精后10 h 25 min(10 h 51 min)进入神经胚期,受精后14 h 22 min(16 h 20 min)进入器官形成期,59 h 31 min(59 h 05 min)后出膜。研究表明,SS和DD均具有正常的早期胚胎发育过程,这为进一步了解SS和DD的遗传背景和生殖方式提供了生物学依据。     

精子膜蛋白在异精雌核发育银鲫中的作用

通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份，包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等，在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分，研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现，加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多，并且在子代培育过程中，发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明：精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。     

精子膜蛋白在异精雌核发育银鲫中的作用

通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份,包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等,在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分,研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现,加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多,并且在子代培育过程中,发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明：精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。     

异育银鲫饲料中适宜脂肪需求量研究

研究异育银鲫（Carassius auratus gibelio）饲料中脂肪的适宜需要量,以鱼粉豆粕为蛋白源、鱼油作为添加的脂肪源,分别添加0、2％、4％、6％和8％的鱼油,配制成5组饲料。对平均体质量每尾（17．00±0．15）g的异育银鲫进行为期45d的养殖试验。结果表明各试验组的饵料系数、蛋白质效率差异不显著（P〉0．05）,饲料中脂肪含量6．04％的试验组饵料系数最低（2．00）、蛋白质效率最高（1．19）、其增重率与饲料中脂肪水平为4．08％的比较差异不显著（P〉0．05）,但与其余各试验组的差异显著（P〈0．05）;饲料中主要营养物质的表观消化率以添加6．04％试验组最高,且粗脂肪、钠及饲料总消化率显著高于对照组（P〈0．05）,但与脂肪水平为4．08％的试验组差异不显著（P〉0．05）。试验表明异育银鲫饲料中脂肪的适宜需求量为4．08％-6．04％。     

壳聚糖对异育银鲫生长和饲料消化率的影响

采用单因子试验设计方法,试验分成4组进行,对照组和3个试验组,每组3个重复.对照组投喂基础饲料,3个试验组分别投喂在基础饲料中添加0.25%壳聚糖、0.50%壳聚糖和1.00%壳聚糖的试验饲料,自然水温下饲养异育银鲫Carassius auratus gibelio 50尾/池[初始体质量为(78.31±2.15)g].64 d后,采用国标常规方法测定异育银鲫肌肉的营养成分,采用国标间接法(以Cr2O3为外源指示剂)测定饲料能量和营养成分消化率,并计算特定生长率、饲料系数、蛋白质效率、蛋白质沉积率、白肌RNA/DNA,旨在探讨壳聚糖对异育银鲫生长、饲料营养成分和能量消化率及利用率的影响.结果表明,饲料中添加0.50%以上的壳聚糖可以显著提高异育银鲫的特定生长率(P<0.05)、蛋白质消化率(P<0.05)和白肌RNA/DNA(P<0.05),显著降低异育银鲫对饲料脂肪的消化率(P<0.05).添加0.50%壳聚糖可以显著降低异育银鲫的饲料系数(P<0.05),显著提高蛋白质效率和肌肉中的蛋白质沉积率(P<0.05),显著提高异育银鲫对饲料能量的消化率(P<0.05).添加0.25%和0.50%壳聚糖可以显著提高鱼体肌肉中的灰分含量(P<0.05).由此看来,在饲料中添加0.50%壳聚糖可以提高蛋白质和能量的消化率和利用率,从而降低饲料系数、促进异育银鲫的生长.     

异育银鲫饲料中适宜脂肪需求量研究

研究异育银鲫（Carassius auratus gibelio）饲料中脂肪的适宜需要量,以鱼粉豆粕为蛋白源、鱼油作为添加的脂肪源,分别添加0、2％、4％、6％和8％的鱼油,配制成5组饲料。对平均体质量每尾（17．00&#177;0．15）g的异育银鲫进行为期45d的养殖试验。结果表明各试验组的饵料系数、蛋白质效率差异不显著（P〉0．05）,饲料中脂肪含量6．04％的试验组饵料系数最低（2．00）、蛋白质效率最高（1．19）、其增重率与饲料中脂肪水平为4．08％的比较差异不显著（P〉0．05）,但与其余各试验组的差异显著（P〈0．05）;饲料中主要营养物质的表观消化率以添加6．04％试验组最高,且粗脂肪、钠及饲料总消化率显著高于对照组（P〈0．05）,但与脂肪水平为4．08％的试验组差异不显著（P〉0．05）。试验表明异育银鲫饲料中脂肪的适宜需求量为4．08％-6．04％。     

黑龙江银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)精子生物学研究

测量了黑龙江水域比较有代表性的两个银鲫种群——方正银鲫和扎龙湖银鲫的染色体数量和精子密度 ,以及精子在天然水体中的泳动能力、精子的寿命、精子头部的直径和体积 ,结果表明 ,两种银鲫的遗传基础截然不同 ,方正银鲫的体细胞具有 15 0±条染色体 ,扎龙湖银鲫的体细胞具有 10 0条染色体 ;其精子的直径、体积和精子密度也反映了这一点 ,方正银鲫精子头部的直径平均为 2 .81︼m,体积平均为 11.83︼m3,尾长为 4 5 .2 6 ︼m;扎龙湖银鲫精子头部直径平均为 2 .34︼m,体积平均为 6 .83︼m3,尾长为 38.39︼m;方正银鲫的精子密度为 0 .5 7× 10 1 0 / m L～ 0 .90× 10 1 0 / m L,平均为 0 .73× 10 1 0 / m L;扎龙湖银鲫为 0 .94× 10 1 0 / m L～ 1.70× 10 1 0 / m L,平均为 1.38× 10 1 0 / m L。其他测量内容没有明显的区别 ,方正银鲫和扎龙湖银鲫精子的泳动能力分别为 4 9.16 s和 4 9.15 s,寿命分别为 3min2 4 s和 3m in16 s,两个群体之间的差异不显著 (P >0 .0 5 )。两种鲫鱼的授精力没有明显的区域。本项研究进一步证明方正县双丰水库具有 15 0±条染色体的银鲫 ,其雄性具有正常的性别发育和生产精液的能力 ,所产生的精子与倍性正常的鱼类的精子在形态结构、泳动能力和受精能力等方面没有明显的区别?