4株猪流行性腹泻病毒的HA和HI试验

为观察猪流行性腹泻病毒(PDEV)的血凝特性,进而为建立PEDVHA和HI试验,评估疫苗免疫抗体水平奠定基础,将CV777、DR13、YN13和YN144共4株PEDV毒株,在37℃下,分别用0、5、10、50、100μg/mL胰蛋白酶处理30min,然后用鸡、兔和猪红细胞进行血凝(HA)试验;用已经鉴定为PEDV抗体阳性的血清和乳清分别进行血凝抑制(HI)试验。结果显示:4株PEDV毒株只与兔红细胞发生凝集反应;CV777、DR13毒株的HA现象需要用5μg/mL的胰蛋白酶进行预处理,但是YN13和YN144毒株的HA现象不需要胰蛋白酶作用;该凝集现象能够被PEDV抗体特异性抑制。结果表明,PEDV能够凝集兔的红细胞,不能凝集鸡和猪的红细胞,因而可以用兔红细胞建立PEDV的HA和HI试验方法。     

鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究

本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。     

鸡新城疫病毒V_4株疫苗研究(摘要)

鸡新城疫病毒(NDV)V_4株是澳大利亚学者自健康鸡体内分离获得的自然无毒株.自1988年以来,我们对其特性进行了较为系统的鉴定,结果发现,V_4株病毒可以在鸡胚中很好地增殖,感染鸡胚的尿囊液对鸡红细胞的血凝效价可达1:320～1:1280,这种血凝作用能为已知的NDV阳性血清所抑制,也能凝集人的O型红细胞,但不凝集猪、马等动物的红细胞,对发育鸡胚不致死,但鸡胚半数感染量(EID_(50))可达10~(-8.0)～10~(-9.0)/0.1mL;56℃1h仍然保留感染性,通过耐热筛选,获得     

EDS－BH_（91）毒株血凝特性的研究

本试验主要从红细胞凝集谱、凝集解脱情况以及血凝性的影响因素几方面对本室分离的ＥＤＳ－ＢＨ９１毒株和ＥＤＳ－７６ＡＶ１２７毒株进行了比较系统的测定．试验结果表明：两毒株均能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，而且２４小时内无解脱现象；对兔红细胞呈可疑；对人、奶牛、绵羊、猪、小鼠、驴的红细胞不能凝集。血凝反应的最适温度为３７℃；最适红细胞浓度为１％；分别以ｐＨ７．４．浓度为０．ｏ１、０．０４、０．１、０．２Ｍ以及浓度为０．ｏ１Ｍ，ｐＨ为５．８、６．８、７．４和８．０的ＰＢＳ作为稀释液进行血凝试验．其血凝滴度无显著差异；０．０５～０．３％的甲醛溶液４℃下处理病毒７２小时以及反复冻融病毒５次，其处理前后的血凝性均无显著差异。８０℃１０分钟就可以破坏病毒血凝性，而５６℃作用１小时对病毒血凝性无影响。０．１２５～０．５００％的胰酶对血凝性的影响不明显；病毒对氯仿不敏感，属于无囊膜病毒。     

鸡产蛋下降综合症病毒的血凝特性测定

本试验旨在探讨ＥＤＳ病毒血凝反应的最佳反应条件,观察病毒对各种动物红细胞的凝集谱,测定各种因素对病毒血凝素的影响,结果表明,血凝反应宜采用１％的鸡红血球,稀释液用ｐＨ７的生理盐水,室温作用３５ｍｉｎ（分钟）后观察表明,该病毒能凝集鸡,鸭,鹅红细胞,而不能凝集哺乳动物红细胞,耐热,５６℃１ｈ不影响其血凝性,对胰酶和浓度大于０．４％的甲醛敏感;反复冻融８次对血凝效价无影响。     

鸡减蛋综合征病毒血凝特性和在鸭胚中繁殖规律的研究

EDS病毒CH—1分离株能凝集鸡、鸭和鹅等禽类的红细胞,但不能凝集兔、小白鼠和人O型血红细胞。该病毒的血凝特性对缓冲液种类和浓度无严格要求。可耐受56℃24小时,但80℃作用30分钟,则几乎完全丧失血凝活性。1.0％胰酶和0.5％β—巯基乙醇对病毒血凝活性无明显影响,用0.1～0.4％甲醛37℃作用24小时血凝活性无变化,而0.5～1.0％甲醛处理后,病毒血凝价下降4～7个滴度。病毒反复冻融6次对血凝特性无影响。EDS病毒接种10日龄鸭胚后24小时就可检测到病毒的血凝滴度(2~(3.2))、96～120小时病毒在鸭胚液中的血凝滴度达到高峰(HA>2~(14)),此时胚液量也最大。病毒在鸭胚尿囊液和尿囊膜中的血凝滴度最高,其次是羊水,胚体中血凝滴度最低。     

犬细小病毒血凝特性的研究

犬细小病毒和猫泛白细胞减少症病毒在PBS4℃下能凝集恒河猴、猪、马和猫的红细胞,不能凝集牛、绵羊、山羊、犬、兔、豚鼠、小鼠、地鼠、鸡、人O型和鹅的红细胞。在22℃、37℃,病毒血凝的敏感性降低,经2～3小时即从红细胞上解脱下来。红细胞浓度与CPV的HA滴度成反比,HI滴度则随着红细胞浓度的增加而平行升高。     

猫细小病毒JL1-05株的分离与鉴定

通过细胞培养方法,从疑似患猫泛白细胞减少症而死亡的成年猫体内分离到1株病毒,命名为JL1-05.经细胞敏感试验、形态学观察、血凝及血凝抑制试验、动物感染、特征序列PCR扩增及测序分析,该病毒在猫肾细胞上生长良好,无囊膜,直径为20～24 nm,对热、乙醚、氯仿、胰蛋白酶有抗性,在4℃对猪红细胞有凝集作用,PCR扩增产物与预期一致,与标准毒株VP2基因序列同源性高达99%以上.该病毒特征与猫细小病毒的基本相符,为猫细小病毒.     

EDS—BH91毒株血凝特性的研究

本试验主要从红细胞凝集谱、凝集解脱情况以及血凝性的影响因素几方面对本室分离的ＥＤＳ－ＢＨ９１毒株和ＥＤＳ－７６ＡＶ１２７毒株进行了比较系统的测定。试验结果表明：两毒株均能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，而且２４小时内无解脱现象；对兔红细胞呈可疑；对人、奶牛、绵辜、猪、小鼠、驴的红细胞不能凝集。血凝反应的最适温度产３７℃；最适红细胞浓度为１％；分别以ｐＨ７．４，浓度为０．０１、０．０４、．０．１、０．２Ｍ以     

马病毒性动脉炎血凝及血凝抑制试验研究与应用

在RK-13细胞上培的马动脉炎病毒在4℃、室温和37℃条件下，用各种动物的红细胞进行血凝试验，证实病毒在不同温度下均可凝集小鼠和鸡的红细胞，但不能凝集牛、绵羊、山羊、马、猪、豚鼠、仓鼠、兔及鹅红细胞，病毒用吐温-80和乙醚处理后，血凝活力会显著增强，其血凝滴度比未经处理的病毒高4-8倍，且血凝像更加清晰，最适处理条件是病毒在冰、浴状态下用终浓度0.06%-0.125%(V/V)二温-80振荡处理15min-60min，再加50%（V/V）乙醚振荡作用5min-15min。用EAV免疫SPF豚鼠，4周后采血做HI和NT试验，显示HI抗体和NT抗体产物成正相关，对550份来自新西兰、吉尔吉斯、内蒙古、新疆的马血清做EAV的抗体检测，比较两个试验，二者符合率为97.8%，血凝抑制抗体与中和抗体效价呈显著的正相关，但抗体效价略低于后者。     

鸡腺胃型IBV分离株血凝特性初探

从不同发病地区患鸡传染性腺胃病的鸡中分离出４株病毒，选择Ｈ９５和Ｓ９６两株流行株，采用胰蛋白酶和卵磷脂酶Ｃ处理，在不同条件下测定其血凝性，试验表明：用２％胰蛋白酶３７℃处理０．５小时后的病毒株对鸡的红细胞凝集价高达２１４，这种血凝性不能被抗Ｈ９５毒株的单克隆抗体、鼠、鸡特异性抗血清所抑制。经４单位／ｍｌ卵磷脂酶Ｃ３７℃处理３小时后血凝价可达２９，而能被相应的特异性单克隆抗体、鼠、鸡抗血清所抑制。     

浅谈影响禽血凝抑制试验(HI)的因素

鸡新城疫病毒、禽流感病毒等能够与禽类的红细胞发生凝集(红细胞凝集反应),这种红细胞凝集反应可被特异性免疫血清所抑制,即为禽的红细胞血凝抑制试验(HI)。     

大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究

大豆种子经过浸提、离心、硫酸铵逐级沉淀和D-半乳糖-Epoxy-Sepharosc-4B亲和层析,获得单一的大豆凝集素（Soybean agglutinin SBA）样品。纯化的大豆凝集素经pH8．9的聚丙烯酰胺凝胶电泳（胶浓度7．5％）,可以显示一条清晰的着色带。在血凝活性鉴定中,采用2％兔细胞悬液,测定凝集红细胞的能力和检测它们与糖结合后对红细胞的凝集作用的影响。结果表明,使兔红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg／mL左右。浓度为0．1mg／ml凝集素溶液分别与D-半乳糖、D-氨基半乳糖、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）、a-乳糖、几丁质溶液结合后,使兔红细胞50％凝集的糖配体溶液浓度分别为1mg／ml、2．5mg／ml、10mg／ml、30mg／ml,而几丁质几乎对SBA没有影响。     

鸡腺胃型IBV分离株血凝特性初探

从不同发病地区患鸡传染性腺胃病的鸡中分离出４株病毒，选择Ｈ９５和Ｓ９６两株流行株，采用胰蛋白酶和卵磷脂酶Ｃ处理，在不同条件下测定其血凝性，试验表明：用２％胰蛋白酶３７℃处理０．５小时后的病毒株对鸡的红细胞凝集价高达２＾１４，这种血凝性不能被抗Ｈ９５毒株的单克隆抗体、鼠、鸡特异性抗血清所抑制。经４单位／ｍｌ卵磷脂酶Ｃ３７℃处理３小时后血凝价可达２＾９，而能被相应的特异性单克隆抗体、鼠、鸡抗血清所抑制     

猪繁殖与呼吸道综合征研究进展(续)

（上接２００２年第６期）ELISA和IPMA试验敏感性几乎相同，但ELISA试剂盒在检测感染后１０天的血清时，敏感性比IPMA低，原因还有待探讨。６．５HA和HI试验PRRSV不凝集多种动物的红细胞。但可凝集BALB／C鼠红细胞，病毒材料经过吐温８０和乙醚处理后血凝活性增强，效价增加４～８倍，效价可达１：１２８。用细胞培养的PRRSV，经过乙醚和吐温处理后，４℃和３７℃均可凝集小鼠红细胞并且这种凝集被PRRSV特异性抗体所抑制。６．６基因探针Larochelle等用地高辛标记的核酸探针检测细胞培养和福尔马林固定组织中的PRRSV获…     

马动脉炎病毒的血凝性研究

在RK－13细胞上培养的马动脉炎病毒（Equine viral arteritis,EAV)在4℃、室温和37℃条件下，用多种动物的红细胞进行血凝试验，病毒在不同温度下均可凝集小鼠和鸡的红细胞，但不能凝集牛、绵羊、山羊、马、猪、豚鼠、仓鼠、兔及鹅的红细胞。将病毒用吐温－80和乙醚处理后，血凝活力会显著增强，其HA效价比未经处理的病毒高4－8倍，且血凝像更加清晰。处理病毒的最适条件是在冰浴状态下用终浓度0．6－1．25mL/L吐温－80振荡处理15－60min，再加1／2体积的乙醚振荡作用5－15min.     

鸡传染性支气管炎病毒血凝谱

用鸡传染性支气管炎病毒标准毒株Ｈ５２、Ｍ４１、Ｔ、Ｎ１１５、ＩＢＶ６２株及国内华中（ＨＺ）、华东（ＨＤ）、华南（ＨＮ）、华北（ＨＢ）、东北（ＤＢ）及西北（ＸＢ）等地方性分离株试验,研究ＩＢＶ血凝特性。结果表明,ＩＢＶ不直接凝集鸡、牛、兔、小白鼠、仓鼠、猪、鹅、马、绵羊及人的“Ｏ”型红细胞;１％胰蛋白酶３７℃作用ＩＢＶ４ｈ后,可凝集鸡、兔、小白鼠、仓鼠、鹅等动物红细胞;１０％乙醚３７℃作用ＩＢＶ２ｈ后,可凝集鸡、牛、小白鼠、仓鼠、鹅、绵羊及人的“Ｏ”型红细胞;１％卵磷脂酶Ｃ３７℃作用ＩＢＶ４ｈ后,可凝集鸡、兔、小白鼠、仓鼠、鹅等动物红细胞。     

血凝法测定饲料中植物凝集素含量

通过研究植物凝集素(lectin)的血细胞凝集活性与其浓度的关系，提出了用血凝法测定饲料中lectin的新方法，并探讨了试样粉碎粒度、脱脂方法、脱脂时间、抽提时间、抽提次数等测定条件对测定结果的影响。结果表明，lectin的活力与浓度之间存在高度线性相关(R^2=0．99)。血凝法测定饲料中lectin的含量时，以样品粉碎过40目、样品与30～60℃石油醚或乙醚比例(W／V)1：8脱脂8h、样品与生理盐水(W／V)1：8抽提8h为宜。在上述条件下测定，回收率可达88％～102％。经过对8种不同的饲料及原料样品lectin含量的测定，平均相对偏差为0．9％～2．4％，变异系数为1．3％～3．3％。结果表明，利用血凝法可快速测定饲料中的lectin含量。     

对血凝试验用鸡红细胞保存条件的探讨

对血凝试验所用的鸡红细胞的保存条件进行了比较。在新鲜红细胞液中加入甘油或尿素可以延缓细胞破裂溶血。鸡红细胞经戊二醛处理后，于4℃保存9个月，其凝集特性未发生变化，同时在醛化红细胞中加入甘油更能稳定血凝活性。在4℃、室温和37℃条件下将制备的新鲜红细胞和醛化红细胞用作血凝试验的指示剂，不影响新城疫病毒抗原血凝滴度。结果表明，所制备的醛化鸡红细胞的甘油悬液可以替代新鲜红细胞用于临床实践中新城疫的血凝和血凝抑制试验测定。     

鹅类新城疫病毒的血凝特性研究

对鹅类新城疫病毒的血凝特性研究表明,该病毒能凝集禽类、两栖类和某些哺乳动物的红细胞,不凝集驴红细胞首次从病科分离的鸭胚毒不凝集多种动物的红细胞,但经数次传代后,对红细胞的凝集价可达２＾４,该病毒与鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的血凝试验无明显差别。本病毒为快解脱型,于５６℃４５分钟失去血凝活性,与ＮＤＶ有相近的血凝抗原。