夹心ELISA法检测小鼠单克隆抗体试验

本试验用羊抗鼠抗体包被酶标板，建立一种用于多种含鼠抗成分的ＭｃＡｂ的检测方法。用１：１０００（２３．３μｇ／ｍｌ）的羊抗鼠抗体包被４０孔酶标板做夹心ＥＬＩＳＡ试验，检测抗沙门氏菌Ｈ抗原杂交瘤上清，其结果与用抗原包板的间接ＥＬＩＳＡ测得的阳性具有很高的符合率，可用于单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的初步检测。     

双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV

用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为1:800包被37℃1 h加4℃12 h,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:2 000作用45 min,以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为5×103.67TCID50/m L,并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品,结果显示,ELISA阳性检出率为39.6%,而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点,可用于PEDV快速检测。     

鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法的建立

通过制备兔抗鹿血和小鼠抗鹿血多克隆抗体,建立了以兔抗为包被抗体,鼠抗为检测抗体的鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法。采用方阵滴定法确定了抗原、抗体的最佳反应浓度,并对ELISA各反应条件进行优化。结果表明:兔抗最佳包被浓度为1∶8 000,鼠抗的最佳反应浓度为1∶2 000,最佳封闭时间为60 min。该方法对鹿血检测灵敏,可达3×10-4倍稀释度,且对马血、牛血、羊血、猪血的检测结果均为阴性,说明该方法特异性良好。     

禽流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒（AIV）抗原的双抗体夹心ELISA方法。经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件：兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1：8000（浓度为3.531μg/ml）,抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1：800,酶标二抗的工作浓度为1：4000。与其他禽易感病毒（NDV、IBV、EDS-76V）等均没有交叉反应。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,可应用于AIV的检测和流行病学调查。     

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定,ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ,ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００,该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ ⒚     

检测牛IL-4双抗体夹心ELISA方法的建立

为利用牛白细胞介素-4 (BoIL-4)的特异性单克隆抗体(MAb)建立检测BoIL-4的双抗体夹心ELISA方法,以多种ELISA方法对7株抗BoIL-4的单抗进一步筛选,得到反应最佳的2株单抗8B7和4A10,以A9表达的重组BoIL-4为阻断剂的阻断ELISA试验中,表明这2株单抗也可识别所构建的细胞系A9表达的重组BoIL-4。以单抗8B7作为包被抗体,以标记了HRP的单抗4A10作为检测抗体建立的双抗体夹心ELISA方法可检测大肠埃希菌、毕赤酵母和Flp-In-293细胞系3种表达系统表达的重组BoIL-4,最低检测限分别为0.25、8和2 ng·mL^-1,且对A9细胞系上清中表达的BoIL-4检测效果和特异性良好。该研究建立的BoIL-4双抗体夹心ELISA方法为深入研究BoIL-4、开发BoIL-4 ELISA检测试剂盒奠定了基础。     

鸭肝炎病毒单克隆抗体的研究

[目的]研制鸭肝炎病毒的单克隆抗体。[方法]将DHV-W株的鸭胚尿囊液经冻融、氯仿处理和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,探讨DHV特异性强、敏感性高、简便快速的DHV抗原诊断方法。[结果]经间接ELISA筛选获得1株能稳定分泌DHV的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5G8。特性鉴定结果表明该株单抗ELISA效价较高且特异性好,中和特性稍差。杂交瘤细胞冻存6个月和12个月后复苏能稳定分泌特异性抗体。[结论]HDV的McAb成功制备为DHV的快速诊断、筛选特定基因探针等技术奠定了基础。     

应用ELISA间接法检测抗IBDV单克隆抗体

本文用 ELISA 间接法,研究并建立了抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的检测体系。实验证明,该法具有简便、灵敏、迅速、特异性强、准确性高及重复性好的优点。是研究筛选抗 IBDV单抗杂交瘤细胞的可靠方法。     

重组Ⅸ蛋白检测犬传染性肝炎病毒抗体间接ELISA方法的建立

[目的]建立用重组蛋白Ⅸ检测犬传染性肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。[方法]分别设置不同抗原包被浓度、包被条件、封闭液等,比较ELISA反应效果。[结果]最佳抗原包被浓度为5.0μg/ml;最佳包被条件为,37℃包被1 h、4℃过夜;最佳封闭液为5%BSA;HRP-羊抗犬IgG的最佳工作浓度为1∶1 600。[结论]建立了检测犬传染性肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。     

RT-PCR方法在实验小鼠肝炎病毒检测中的应用

实验应用RT-PCR方法对来自不同单位、6个品系、不同等级的84只小鼠进行了MHV检测。结果显示:MHV阳性小鼠35只,阳性率为41.67%;其中普通级小鼠29只,阳性18只,阳性率为62.07%;SPF级小鼠55只,MHV阳性小鼠17只,阳性率为30.91%。     

抗鸡关节炎病毒单克隆抗体介导间接ELISA的建立

利用淋巴细胞杂交瘤技术制备出抗鸡关节炎病毒特异的、具有群反应特性的单克隆抗体,挑选其中ＡＤ８株作为一抗建立检测抗原的间接ＥＬＩＳＡ,该法具有高度的特异性和敏感性,不仅适用于大面积检测的需要,而且可用于该病的早期诊断。     

用重组HN蛋白建立新城疫抗体检测的ELISA方法

用T4噬菌体表达的重组新城疫病毒HN蛋白（rHN）为包被抗原,建立新城疫抗体检测的酶联免疫吸附实验（rHN-ELISA）.结果表明,抗原最适包被浓度为1.6μg/100μL,待检血清最适稀释度为1：80,鸡血清样品的光吸收值OD450大于0.126可判定为阳性结果,而SPF鸡血清,非免疫鸡血清以及MD,IBD,IB,ILT,AI阳性血清的检测结果均为阴性.对批内和批间样品重复检测的变异系数分别为3.7%～8.5%和3.1%～7.4%.人工感染NDV的SPF鸡第3 d即可用rHN-ELISA检测到抗体,灵敏度明显高于HI和AGP试验.因此,rHN-ELISA是1种特异、敏感、快速的ND抗体检测方法.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单抗AG1的生物学特性及夹心ELISA诊断方法的建立

用纯化的猪繁残呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-S1）病毒液作抗原，免疫BALB/C小鼠，获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株，命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明，AG1具有高度特异性。AG1可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应，对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价AG1属于IgG2b，腹水效价在1：10^-3-10^-5之间。AG1有100条染色体，琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b。Western bloting试验表明AG1是针对N蛋白抗原表位的特异性单抗。以AG1为捕捉抗原抗体和酶标抗体，建立了快速检测PRRSV抗原的单抗夹心ELISA法，该方法具有快速、灵敏、准确、广谱等特点。     

小麦抗条点花叶病毒鉴定的症状学与ELISA测定技术

小麦不同生长阶段接种条点花叶病毒（ＷＳＭＶ）试验表明，利用寄主的症状反应和酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定小麦品种的抗病性是一致的；初次证明了ＢＷ１５５对耐病品种；其苗期与成株期抗病性均高于其它品种，对小麦生育后期感染ＷＳＭＶ产生的枯死斑过敏反应症状进行生物学接种试验，ＥＬＩＳＡ测定及超薄切片的电镜观察，表明枯死斑症状是寄主妻制病毒向健康绿色组织进一不扩展的保护性反应，枯斑大小及扩展速度与品种的抗     

分泌抗水稻细菌性条斑菌单克隆抗体杂交瘤株的建立及其在种子检验上的应用

本文首次报导了通过硫酸铵沉淀法提取水稻细菌性条斑菌(Xanthomonas campestris pv.oryzicola)(以下简称细条菌)的蛋白质,并以它作抗原建立了4个杂交瘤细胞株E_5、E_8、A_5和F_(11),其培养物上清的ELISA效价为1:20～1:160,腹水效价为1:10~6～1:10~7。该4个细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)与58个不同来源的细条菌都呈阳性反应,而对参试的具有一定代表性的其它13个细菌种,均呈阴性反应。试验还表明,4种McAb是针对同一抗原决定簇的,其亲和力大小为:E_8>A_5>E_5>F_(11)。应用McAb进行种子带菌检验也获得成功。     

杂交水稻叶片的若干生理指标与根系伤流强度关系

本试验选用早衰程度不同的水稻品种汕优63、献改优63、亚优2号和盐粳2号。研究水稻抽穗后根系活力变化及功能叶衰老过程中的生理生化变化。结果表明:抽穗后各品种剑叶光合速率变化存在一定的差异,盐粳2号剑叶光合强度先升高,到抽穗后第7天才开始缓慢下降,而其余的品种抽穗后剑叶光合强度就开始下降,但下降的幅度和速率以献改优63号最大,亚优2号次之,汕优63最小;剑叶叶绿素含量和叶绿素a/b的值也表示相似的趋势。分析抽穗后剑叶过氧化物酶活性变化趋势发现,盐梗2号剑叶过氧化物酶活性表现出持续下降的趋势,而其余3个品种酶活性先升高,而后以不同的速率下降,而品种间剑叶过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性则正好相反。对抽穗后各品种根系伤流强度测定结果表明在抽穗后各品种根系伤流强度都表现出不断下降的趋势,下降幅度以献改优63最大。亚优2号和汕优63次之,盐梗2号最小。根据以上结果,作者认为:叶片衰老与根系活性密切相关,但根系的作用尚不能完全解释叶片衰老的原因。因此,阐明叶片衰老的机理尚有待进一步研究。本文还就根系对叶片衰老可能的调节机理和伤流强度作为根系指标的可靠性进行了讨论。