无机解磷菌的分离鉴定及解磷条件优化

解磷菌对于提高土壤磷元素的有效利用具有促进作用,而且对于土壤面源污染的防治也具有重要意义.通过对包头地区草坪土壤微生物的筛选,获得3株具有稳定解磷能力的解磷菌P1、P2和P3,其中P1的解磷效果最佳;复合菌群组合试验结果表明,不同组合的解磷能力依次为P1:P3＜P1:P2＜P1:P2:P3＜P2:P3,证实P1具有高效的解磷能力;分子鉴定结果表明,P1是伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.),说明该菌具有较大的应用价值.     

磷铁尾矿中高效解磷菌筛选、鉴定及解磷特性

【目的】从磷铁尾矿矿泥中筛选到高效解磷微生物,并评价其解磷效果与促进生菜生长的能力。【方法】采用无机磷选择性培养基和国际植物研究所磷酸盐生长培养基(NBRIP),进行解磷菌的初筛与复筛;利用形态、分子和生理生化鉴定,明确目标菌株分类地位;利用不同Ca₃(PO₄)₂添加量和不同培养时间液体发酵试验,评估目标菌株解磷效果;利用平板促生长试验,测定目标菌株对生菜的促生长效果。【结果】初筛获得19株菌,复筛后确定JP21-05菌株为目标解磷菌株,JP21-05菌株与人参假单胞菌Pseudomonas panacis(MT033062.1)16S rRNA基因相似性为100.00%,结合形态、生理生化特征,确定其为人参假单胞菌。添加7 g/L Ca₃(PO₄)₂的NBRIP液体培养5 d, JP21-05菌株解磷能力最强,可溶性磷(PO₄^2-)浓度为45.94 mg/L。JP21-05菌株对生菜具有显著的促生长作用,能够促...     

解磷菌的分离、筛选、鉴定及解磷能力研究

为开发高效微生物解磷肥,利用解磷菌选择培养基(蒙吉娜卵磷脂培养基)从陕西省西安市周至县猕猴桃园农田土壤中分离出11株解磷菌,通过纯化培养,筛选出1株高效解磷菌JYP9。利用16S rDNA基因序列分析方法对该菌株的分类信息进行鉴定,鉴定结果表明该菌株为假单胞菌(Pseudomonas extremorientalis)。并用解磷圈法和液体摇瓶培养法,分别以卵磷脂为惟一磷源,确定了该菌株的最适培养温度为26℃、最适转速为200 r/min、最适起始pH为7和最适起始接种量为2%。     

小白菜根际高效解磷菌的分离鉴定与培养条件优化

为评价小白菜Brassica chinensis L.根际微生物分解有机磷的能力,明确其优势解磷菌的分类学地位,进一步优化培养条件,为开发微生物肥料提供基础。采用蒙金娜有机磷平板法筛选小白菜根际有机磷分解菌,利用钼锑抗比色法分析菌株解磷能力;进一步观察优势解磷菌的菌落形态,并通过16S DNA序列同源性比对和邻近法构建系统发育树,确定优势菌株FG5的分类学地位;最后,采用单因素和正交试验进一步探讨菌株FG5的最适培养条件。结果表明：小白菜根际共分离筛选出解有机磷菌3株,其中菌株FG5解磷效果最佳,接种菌株FG5培养3 d后,培养基中游离磷质量浓度高达165.20 ug·mL^-1。FG5菌落圆形,表面干燥,微微隆起,边缘波状的米白色,16S DNA序列同源性比对结果表明其为特基拉芽孢杆菌。单因素和正交试验优化结果显示菌株FG5最佳培养条件为：甘露醇为碳源,尿素为氮源,培养温度27℃,转速180 r·min^-1,接种量1.5%(V/V)。在该条件下FG5的解磷量达到307.25 ug·mL^-1,相较于培养条件优化前,解磷能力...     

解磷菌PSBHY-3的发酵培养工艺参数优化

【目的】优化解磷菌PSBHY-3的培养参数,为水产养殖专用解磷菌的工业化发酵生产提供技术支持。【方法】通过单因素试验筛选适合解磷菌菌株PSBHY-3生长的发酵培养基碳氮源及其含量;采用Plackett-Burman试验筛选获得对菌量影响最显著的3个因子;通过最陡爬坡试验和Box-Behnken试验确定显著因子的最佳水平,建立主要培养参数的回归方程,得出优化后显著因子的最佳值及预测菌量;通过摇瓶试验验证,检验模型方程的准确性。【结果】菌株PSBHY-3的最佳碳源、氮源分别为可溶性淀粉和蛋白胨—酵母膏（1∶1）。以温度（A）、蛋白胨—酵母膏（B）和转速（C）为因素变量,菌株PSBHY-3的菌量为响应值,拟合得到二次多元回归方程Y=17.10-0.88A+0.55B+1.27C+0.24AB+0.34AC-0.24BC-3.57A2-2.78B2-6.13C2。优化得到的解磷菌菌株PSBHY-3最佳发酵培养参数为:可溶性淀粉10.0 g/L,蛋白胨10.18 g/L,酵母膏10.18 g/L,氯化钠3.0 g/L,硫酸镁1.0 g/L,pH 7,培养温度35.54℃,转速164 r/min,接种量1%,装液量60%（V/V）。在最佳发酵培养条件下,菌量实际值为1.81×109 CFU/mL,与理论菌量（1.72×109 CFU/mL）间无显著差异（P> 0.05）,但显著高于优化前采用营养肉汤培养的菌量（1.90×108 CFU/mL）（P< 0.05）。【结论】通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验等优化了菌株PSBHY-3的发酵参数,显著提高了目的菌量,回归方程预测准确,优化后的发酵参数可用于水产养殖专用解磷菌的工业化发酵生产。     

土壤解磷微生物混合培养条件的优化

将实验室保藏的5株根瘤菌(S1、S2、S3、S6、S8)分别与解磷菌(P3)、硅酸盐细菌(K5)进行生物拮抗测试,结果表明,S2、S3、S6可与P3、K5进行混合培养.选择出与P3、K5混合培养促进解磷能力良好的根瘤菌株S6,解磷量为6.51mg·L-1.进一步进行混合培养培养基优化,优化后的最佳碳源为蔗糖,解磷量为9.81mg·L-1;最佳氮源为蛋白胨,解磷量为7.94mg·L-1.通过混合培养发酵条件的筛选,由正交试验得出最优发酵条件为:初始pH值为7.0;接种比例为S6∶P3∶K5=1∶1∶3;接种顺序P3→K5S6,其间相隔6h,此时解磷能力最强.     

油茶根际高效解磷细菌NC285液体发酵培养条件的优化

磷是植物生长的必需元素之一,土壤中绝大多数的磷都以植物难以吸收的形态存在,导致了植物无法正常生长,而解磷细菌具有溶解难溶性磷的特性,因此,开发高效解磷细菌对提高磷的利用率具有重要的意义。为了探究油茶(Camellia oleifera Abel.)根际解磷细菌的最适生长条件,采用单因素试验分别考察了碳源、氮源、温度、pH、接种量以及溶氧量对该菌株生长的影响,并在单因素的基础上,采用正交试验对其溶磷条件进行优化。结果表明该菌株的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为(NH4)2SO4,最佳培养条件分别为温度28℃,初始pH值7.5,接种量1%,溶氧量100 mL。解磷菌在优化后的培养基中的溶磷能力明显提高,培养基有效磷含量高达586.73 mg/L,比优化前提高了45.16%。     

低温蛋白酶高产菌株的筛选、鉴定及培养条件优化

从慕士塔格峰江布拉克冰川融水中筛选获得一株耐低温蛋白酶细菌菌株P3-1,16S r DNA序列分析鉴定为假单胞菌,其分泌的蛋白酶最适催化温度为25℃,符合低温酶特性.通过单因子筛选及正交试验优化P3-1发酵条件,确定其最佳产酶培养基配比为:3.0%葡萄糖、1.5%蛋白胨、0.3%Mg SO4,最适宜培养条件为:接种量3%,p H 7.0,发酵时间42 h.在此条件下菌株发酵产酶活力可达82.1 U·m L~(-1),是最初(37.3 U·m L~(-1))的2.2倍.     

沼泽红假单胞菌培养条件研究

对光合细菌沼泽红假单胞菌(B9)的培养条件及培养基配方进行了研究。新筛选的培养基配方具有成分少、易配制、价格低的特点。试验结果表明，沼泽红假单胞菌(B9)是一株较耐低营养的微耗氧的菌株，在500—5000lx光照下能良好生长，最适的生长温度为30℃．培养周期为4d。     

不同培养条件对油茶根际解磷菌6-Y-09溶磷效果的影响

研究了不同碳源(葡萄糖、果糖、可溶性淀粉、蔗糖、麦芽糖和乳糖)、氮源(硝酸钾、硫酸铵、尿素和硝酸铵)、C/N(40∶1、20∶1、8∶1)、p H值(5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)及温度(24、26、28、30、32、34、36℃)对油茶根际解磷菌6-Y-09溶磷能力的影响。结果表明:以葡萄糖为唯一碳源时解磷菌6-Y-09表现出最强的解磷效果,溶磷量达201.51 mg/L;以尿素为唯一氮源时,解磷菌6-Y-09表现出最强的解磷效果,溶磷量达215.43 mg/L;解磷菌6-Y-09最佳C/N为20∶1,最佳p H值为7.0~7.5;另外,解磷菌6-Y-09在28~30℃时表现出最强的解磷效果。     

株高氯·马拉硫磷降解菌的分离鉴定及培养

【目的】分离能够降解高氯·马拉硫磷的菌株,并对其降解特性进行初步研究,以探寻高氯·马拉硫磷无公害降解方法。【方法】利用富集及驯化培养方法,从长期施用并受高氯·马拉硫磷严重污染的土壤中,分离筛选出1株能够高效降解高氯·马拉硫磷的菌株;在形态特征和生理生化鉴定的基础上,对其16S rDNA 序列进行分析,并研究了其对高氯·马拉硫磷的降解特性和最佳摇床培养条件。【结果】获得了1株能以高氯·马拉硫磷作为惟一碳源和氮源生长的菌株,经形态特征观察、生理生化特性鉴定和16S rDNA 序列分析,初步鉴定其属于假单胞菌属;系统发育树显示,该菌株与荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）的相似性最高,为99.79%,因此确定其为荧光假单胞菌。该菌株最佳摇床培养条件为：培养基初始pH值8.0,摇床转速180 r/min,培养时间24 h,培养温度30 ℃。在此培养条件下,培养2 d 的菌株对500 mg/L高氯·马拉硫磷的降解率达到67%。【结论】分离菌株对高氯·马拉硫磷有明显的降解作用,可试用于高氯·马拉硫磷污染土壤的微生物修复。     

沼泽红假单胞菌的培养优化及植物病害防治研究

沼泽红假单胞菌是应用较为广泛的一种光合细菌,在污水处理、农业种植、畜牧与水产养殖等领域都有较多应用。在自然培养条件下优化培养基配方,对培养条件中对影响细菌生长的因素进行探究。最终确定最佳C源乙酸钠添加浓度为10 g/L,最优N、P源为复合肥2(N:P:K=15:15:15),最佳添加浓度为0.5 g/L。细菌适宜生长的培养条件为温度25℃以上、光照强度4 000 lx以上、p H值范围为7.5～8.0。在植物病害防治实验中,结果表明：沼泽红假单胞菌对枣锈病病原菌、根腐病病原菌、褐腐病病原菌、叶霉病病原菌具有显著的抑制效果。     

草鱼铜绿假单胞菌灭活疫苗发酵条件的优化

为优化铜绿假单胞菌JP802灭活疫苗菌液发酵及灭活条件。通过单因素试验对铜绿假单胞菌JP802摇瓶培养温度、pH、接种量、转速4因素进行了优化筛选,采用正交试验法对发酵条件的参数进行了优化,并进行了验证试验及5 L发酵罐生长曲线;同时对铜绿假单胞菌JP802灭活疫苗发酵菌液灭活条件进行优化。试验结果表明,铜绿假单胞菌JP802株最适发酵条件为28℃,pH7.5,以10%接种量,转速270 r/min,通气量4 L/min,发酵培养12～14 h。灭活条件优化结果表明在灭活温度为37℃条件下,福尔马林终浓度在0.40%,灭活48 h即能完全灭活。通过对发酵条件的优化,可以获得更高产量的铜绿假单胞菌JP802发酵菌液。     

沼泽红假单胞菌产类胡萝卜素发酵条件优化

利用单因素试验与正交试验的方法,对沼泽红假单胞菌B9(Rhodopsedomonas palustris B9)产类胡萝卜素培养基和培养条件进行优化。结果表明:最佳培养基成分为:KH2PO40.6g,K2HPO40.9g,酵母膏1.5 g,蛋白胨2.3g,MgSO40.2g,CaCl20.3g,NaCl0.5g,最佳培养条件为:接种量为8%,温度为26℃,pH值为自然pH值。培养7d后,类胡萝卜素产量可达2.863mg·g-1(以干重计)。     

脂肪酶产生菌的分离、鉴定及其发酵条件优化

从被废油长期污染的土壤中分离出一株酶活力大于5 U/mL的菌株,经16S rRNA鉴定,确定为铜绿假单胞菌属,命名为Pseudomonas aeruginosa B6。经发酵优化,取得其最佳发酵培养基与条件:葡萄糖0.4%、酵母粉0.7%、硫酸铵0.7%、七水硫酸镁0.1%、磷酸氢二钾0.1%;接种量为9.5%;起始pH值为6.5;温度为30℃,为脂肪酶发酵生产奠定了基础。     

混菌发酵降解茶皂素的条件优化

以茶皂素为研究对象,以茶皂素的降解率为评价指标,利用地衣芽孢杆菌与铜绿假单胞菌混合发酵降解茶皂素,分别探讨接种比例、发酵时间、发酵温度、摇床转速及接种量对其降解的影响,再通过曲面响应设计实验对发酵条件进行优化。结果表明,影响降解率显著性次序为：发酵时间>发酵温度>接种量>摇床转速>接种比例,得到最佳的优化条件为：混菌接种比例1:2（v/v）,发酵时间12.8d,发酵温度30.68℃,摇床转速150r/min,接种量为8.81%,在此条件下进行发酵,茶皂素的降解率达到（73.76±0.63）%。说明混菌对茶皂素的降解有着较明显的效果。     

解磷菌Novosphingobium sp.WW01的解磷活性及其发酵条件研究

从烟草根际土壤中分离到1株具有解磷活性菌株,编号WW01。通过连续发酵培养,考察了WW01菌株的解磷活性,结果显示WW01菌株发酵48 h时,发酵上清液中有效磷含量达到最大值1.33 mg/L。结合形态特征、生化测定和16S r DNA分析结果,WW01菌株鉴定为鞘鞍醇杆菌属,暂命名为Novosphingobium sp.WW01。发酵条件测定表明,菌株WW01对6种碳源的同化能力由强到弱的顺序是葡萄糖>直链淀粉>蔗糖>乳酸>支链淀粉>海藻糖;对6种氮源的同化能力由强到弱的顺序是硝酸钠>尿素>酰胺>氯化铵>硝酸钾>硫酸铵;生长的适宜温度是30～40℃,适宜的pH是6～8。菌株WW01可作为烟草有机肥备用资源。     

王草砖红壤土壤根际解磷菌的分离鉴定及培养条件研究

从王草(Cynodon dactylonL.)根际砖红壤土壤中筛选到21株解磷菌,对其形态学和生理生化特性进行了测定,最后将筛选出的解磷能力较强且无拮抗反应的4株解磷细菌组合成为解磷菌群,对其最适温度、最适pH值和最适生长时间进行了研究.结果表明,菌株2-5、2-6、2-8-1、2-9、3-8、3-8-1、4-1-2、4-2、4-5为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium);菌株2-7-1、2-8、3-6-1、4-1-1、4-3为伯克霍尔德菌属(Burkholderia sp);菌株4-4、2-7、2-8-2、3-6、4-3-1为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus).解磷菌群的最适生长温度为25～30℃,最适生长pH值为6.5～7.0,最适生长时间为90 h.     

解磷菌株黑曲霉PSFM发酵条件优化研究

【目的】利用液体培养法探究不同碳源、氮源、无机盐和微量元素浓度以及发酵时间、温度、初始pH、转速、接种量等条件对解磷菌解磷特性的影响,获得解磷菌的最佳发酵培养基和培养条件。【方法】采用单因素及正交试验法,对一株分离自土壤的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）PSFM菌株的基础发酵培养基和发酵条件（发酵时间0～10 d、温度20～40℃、初始pH值3.0～11.0、接种量1%～11%、转速120～300 rpm）进行优化,测定其发酵液吸光度值,以解磷量的高低作为评价发酵培养基及发酵条件优劣的指标。【结果】分别在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP、NBRIYP培养基中培养6 d后,以无机磷液体培养基的PSFM菌株解磷能力最高,解磷量为526.42 mg/L。在12种不同碳源培养基中,PSFM均能正常生长,其解磷能力由大到小依次为：木糖＞葡萄糖＞乳糖＞蔗糖＞麦芽糖＞半乳糖＞山梨糖＞甘露糖＞果糖＞可溶性淀粉＞鼠李糖＞甘油。以硝酸钠、尿素、酵母浸膏、氯化铵、硝酸镁、硝酸铵、色氨酸、乙酸铵、牛肉浸膏、胰-蛋白胨、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸和精氨酸为氮源时,硫酸铵为唯一氮源的解磷效果最好,菌株PSFM发酵液中有效磷含量最高（990.31 mg/L）。菌株PSFM的解磷能力均随着最佳培养基中NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·7H2O浓度的增加呈先提高后降低趋势,当其浓度分别为0.03%、0.01%、0.03%、0.001%、0.001%时,菌株PSFM的解磷能力均最强。在不同发酵条件下,以发酵6 d、温度28℃、初始pH 6.0、5%接种量、转速300 rpm的PSFM解磷能力最强,解磷量分别为599.24、528.23、603.69、530.57和731.48 mg/L。【结论】最适合PSFM菌株的基础发酵培养基为无机磷液体培养基,碳源为1.0%木糖,氮源为0.10%硫酸铵,最佳无机盐配方为：NaCl 0.10 g/L、KCl 0.70 g/L、MgSO4·7H2O 0.70 g/L、FeSO4·7H2O 0.01 g/L、MnSO4·7H2O 0.01 g/L;最佳培养条件为：温度28℃,初始pH 6.0,转速180 rpm,接种量5％,发酵时间为6 d。     

解磷菌株黑曲霉PSFM发酵条件优化研究

【目的】利用液体培养法探究不同碳源、氮源、无机盐和微量元素浓度以及发酵时间、温度、初始pH、转速、接种量等条件对解磷菌解磷特性的影响,获得解磷菌的最佳发酵培养基和培养条件。【方法】采用单因素及正交试验法,对一株分离自土壤的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）PSFM菌株的基础发酵培养基和发酵条件（发酵时间0～10d、温度20～40℃、初始pH值3.0～11.0、接种量1%～11%、转速120～300rpm）进行优化,测定其发酵液吸光度值,以解磷量的高低作为评价发酵培养基及发酵条件优劣的指标。【结果】分别在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP、NBRIYP培养基中培养6d后,以无机磷液体培养基的PSFM菌株解磷能力最高,解磷量为526.42mg/L。在12种不同碳源培养基中,PSFM均能正常生长,其解磷能力由大到小依次为：木糖〉葡萄糖〉乳糖〉蔗糖〉麦芽糖〉半乳糖〉山梨糖〉甘露糖〉果糖〉可溶性淀粉〉鼠李糖〉甘油。以硝酸钠、尿素、酵母浸膏、氯化铵、硝酸镁、硝酸铵、色氨酸、乙酸铵、牛肉浸膏、胰-蛋白胨、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸和精氨酸为氮源时,硫酸铵为唯一氮源的解磷效果最好,菌株PSFM发酵液中有效磷含量最高（990.31mg/L）。菌株PSFM的解磷能力均随着最佳培养基中NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·7H2O浓度的增加呈先提高后降低趋势,当其浓度分别为0.03%、0.01%、0.03%、0.001%、0.001%时,菌株PSFM的解磷能力均最强。在不同发酵条件下,以发酵6d、温度28℃、初始pH6.0、5%接种量、转速300rpm的PSFM解磷能力最强,解磷量分别为599.24、528.23、603.69、530.57和731.48mg/L。【结论】最适合PSFM菌株的基础发酵培养基为无机磷液体培养基,碳源为1.0%木糖,氮源为0.10%硫酸铵,最佳无机盐配方为：NaCl0.10g/L、KCl0.70g/L、MgSO·47H2O 0.70g/L、FeSO4·7H2O 0.01g/L、MnSO·47H2O 0.01g/L;最佳培养条件为：温度28℃,初始pH6.0,转速180rpm,接种量5%,发酵时间为6d。