基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及对小鼠感染的治疗

成功构建了能够高效表达鲎素TPⅠ基因的组成型毕赤酵母表达菌株,发酵培养后上清对分属于13个属的61株菌抑菌活性良好.应用肉汤微量稀释法测定发酵上清对金黄色葡萄球菌的抗菌活性,用扫描电镜观察其对金黄色葡萄球菌的抑制作用,并探讨发酵上清对小鼠皮肤感染模型的治疗作用.结果显示,基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(MIC)为(3.46±0.76) mg/L,亚抑菌浓度为(0.865±0.22) mg/L.基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌小鼠感染模型的治疗效果与抗生素差异不显著(P＞0.05),且具有刺激小鼠血管内皮生长因子表达水平增加,加速血管生成和血管发生,促进皮肤创伤愈合的功能；表明基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌感染小鼠具有良好的治疗效果.     

金银花提取物对金黄色葡萄球菌的抗菌作用研究

目的:研究金银花对金黄色葡萄球菌的抗菌作用。方法:将金银花用50%乙醇提取,石油醚萃取后取水相,采用试管二倍稀释法测定其对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),建立小鼠尾静脉注射感染金黄色葡萄球菌模型检测其对小鼠体内的保护率,并采用比色法研究其对细菌体内琥珀酸脱氢酶(SDH)比活性的影响。结果:金银花对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为15.6 mg/mL和31.2 mg/mL,能降低小鼠人工感染金黄色葡萄球菌死亡率,但差异不显著(P>0.05);金银花能极显著降低细菌体内SDH比活性(P<0.01)。结论:金银花对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用,其抑菌作用是通过降低SDH比活性来实现的。     

基因工程鲎素对小鼠非特异性免疫的影响及作用机制

抗菌肽具有抗感染和介导宿主天然免疫防御作用,是理想的抗生素替代物,实验室前期用研发的基因工程鲎素(TPI)对小鼠金黄色葡萄球菌感染模型开展的治疗效果显示,小鼠感染模型肺部及其他脏器中菌含量明显减少,肺部的病理变化减轻,治疗效果较好。本试验在此基础上,从宿主天然免疫防御的角度开展了TPI对小鼠非特异免疫功能的影响及机制研究。用滴鼻的方式给小鼠使用TPI,测定不同剂量TPI对小鼠体征指标,包括:体质量、肺廓清指数、脾脏指数的影响。用腹腔注射的方式给小鼠使用TPI,测定非特异性免疫相关指标,包括:小鼠单核细胞和巨噬细胞的吞噬能力、小鼠β-防御素2(mBD-2)和小鼠胸腺肽β4的表达水平,结果显示与对照组相比,TPI可提高小鼠增重,可显著提高小鼠的巨噬细胞吞噬能力及廓清指数;可上调小鼠脏器中mBD-2和小鼠胸腺肽β4的表达水平,增强宿主防御能力,激活机体非特异性免疫,提示TPI不但能直接杀伤病原体,还能够激活和协同宿主防御肽共同发挥非特异免疫作用。     

柴胡水提取物抗菌作用研究

目的：研究探讨柴胡水提物的体内、外抑菌作用及其作用机理。方法：采用管碟法、试管法和小鼠腹腔注射经0.5%胃膜素增菌菌液的方法,测定其抑菌效果。结果：柴胡水提物对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌有显著的抑制作用;对由伤寒杆菌引起的小鼠急性腹腔感染死亡率有明显降低效果,且此效果随着药物剂量的增大有一定程度的增强。结论：柴胡水提物抑菌效能为直接作用。     

篦齿蒿提取物的抗菌试验

为了研究篦齿蒿(Neopallasia pectinata)水提取物及醇提取物的体外抑菌作用,采用牛津杯法测定篦齿蒿各种提取物对大肠埃希菌,金黄色葡萄球菌,沙门菌和链球菌的抑菌圈直径。用试管2倍稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC),以金黄色葡萄球菌和链球菌感染小鼠,判断其体内抗菌效果。结果表明,篦齿蒿各种提取物都具有一定的抑菌作用,尤其是对金黄色葡萄球菌,其乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物是体外抗菌的主要活性部分。篦齿蒿提取物对链球菌感染小鼠体内抗菌效果较差,对金黄色葡萄球菌感染小鼠体内抗菌成分主要集中在乙酸乙酯提取物内,对小鼠死亡保护率明显高于阴性对照组,可达75%。     

异牡荆苷作为sortase A抑制剂对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的保护作用

sortase A (SrtA)是一种重要的毒力决定因子,负责将多种毒力相关蛋白锚定在金黄色葡萄球菌(S.aureus)的细胞表面,在其致病过程中发挥重要作用,是开发抗金黄色葡萄球菌毒力药物的理想靶点。本研究首先通过荧光共振能量转移试验发现异牡荆苷是SrtA的可逆抑制剂;又利用细胞侵袭试验证明异牡荆苷能够显著抑制金黄色葡萄球菌对A549细胞的内化作用;最后考察了异牡荆苷对小鼠肺炎的保护作用,发现异牡荆苷能明显减轻金黄色葡萄球菌感染性肺炎小鼠肺组织的病理损伤和炎症反应,减少肺部载菌量,显著提高小鼠存活率。以上结果表明,异牡荆苷能够通过抑制毒力因子SrtA对金黄色葡萄球菌引起的小鼠肺炎起到保护作用,是一种很有前景的抗金黄色葡萄球菌毒力活性化合物,可作为开发治疗金黄色葡萄球菌感染药物的先导化合物。     

黄芪提取物对常见致病菌的体内外抑菌活性测定

为了研究黄芪提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌的抑菌活性,采用试管二倍稀释法,测定黄芪提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌活性;采用相同浓度致病菌灌胃小鼠后,分别用黄芪提取物灌胃治疗,测定小鼠十二指肠、空肠、回肠和盲肠中肠道菌群数量,以确定黄芪提取物的体内抑菌活性.结果表明,无论是在体外还是在体内,黄芪提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌均具有抑制作用,对大肠杆菌的抑制作用最强,对沙门氏菌的抑制作用最弱;且通过灌注黄芪提取物,显著降低了各种致病菌致病后小鼠的死亡率.通过研究可以得出,黄芪提取物对常见的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌具有较明显的体内外抑菌作用.     

连翘提取物对常见致病菌的体内外抑菌活性测定

为观察连翘提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌的抑菌活性,试验采用试管二倍稀释法,测定连翘提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌活性;采用相同浓度致病菌灌胃小鼠后,分别用连翘提取物灌胃治疗,测定小鼠十二指肠、空肠、回肠和盲肠中肠道菌群数量。结果表明,无论是在体外还是在体内,连翘提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌均具有抑制作用,且对金黄色葡萄球菌抑制性最强,对沙门氏菌抑制性最弱;通过灌注连翘提取物,显著降低了各致病菌致病后小鼠的死亡率。通过研究得出以下结论,连翘提取物对常见的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌具有较明显的体内外抑菌作用。     

金银花提取物对常见致病菌的体内外抑菌活性测定

为了观察金银花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门杆菌等致病菌的抑菌活性,试验采用试管二倍稀释法测定金银花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门杆菌的体外抑菌活性;采用相同浓度致病菌灌注小鼠,然后再用金银花提取物灌注治疗,测定小鼠十二指肠、空肠、回肠和盲肠中肠道菌群数量。结果表明:无论是体外还是体内,金银花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门杆菌均具有抑制作用,且对金黄色葡萄球菌和沙门杆菌的抑制作用最强,对大肠杆菌的抑制作用最弱;灌注金银花提取物后,可显著降低各致病菌致病后小鼠的死亡率。说明金银花提取物对常见的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门杆菌等致病菌具有较明显的体内外抑菌作用。     

新型头孢类化合物NAC-3的抗菌活性评价及对MRSA菌感染的体内保护效果

新型头孢类化合物NAC-3是一种甲氧头孢菌素类半合成抗生素,本研究通过测定最低抑菌浓度(MIC)来分析NAC-3的抗菌谱及评价其体外抗菌活性,并进一步通过建立小鼠感染动物模型来评价其对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染小鼠的保护活性。结果显示,NAC-3对临床分离的革兰阳性菌MRSA、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)和甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)的MIC值分别为32.000～64.000,1.000,1.000～4.000,0.125～1.000 mg/L,与对照药物相比具有较好的体外抗菌活性,但对革兰阴性菌的抑菌作用较弱。NAC-3对另外20株临床分离的金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定结果进一步验证其对MRSA和MSSA都具有较好的抗菌活性,且抑菌效果明显优于临床常用的头孢菌素类抗菌药物。同时,还证明NAC-3对MRSA菌株USA300引起的小鼠全身感染能起保护作用,并显著提高小鼠的存活率。结果表明,新型头孢类化合物NAC-3对MRSA菌株体外及体内均表现出良好的抗菌活性,为MRSA的有效防制提供了新的抗生素候选物,对于缓解革兰阳性菌的多重耐药问题提供了新思路。