苦参碱对PRRSV的体外抑制作用及其机制

本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察苦参碱(matrine)体外抗猪繁殖呼吸与综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)活性,并从抑制病毒复制、阻断吸附和直接杀灭3个方面探讨苦参碱体外抑制PRRSV的作用机制.结果显示,苦参碱CC50＞1 500 mg/L,最大安全浓度为750 mg/L,EC50为(443.5±33.4)mg/L,SI≥3.38,在安全浓度范围内对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制率达到93.6％;在直接杀灭和复制抑制试验中最高抑制率分别达到105.10％和91.53％;在病毒吸附抑制试验中抑制率＜20％,表明苦参碱不能阻断PRRSV对Marc-145细胞的吸附.结果表明,苦参碱在体外可有效抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,其抗病毒机制可能是干扰病毒的复制或/和直接杀灭病毒,提示苦参碱可作为研发预防及治疗猪蓝耳病的药物或先导化合物.     

shRNA抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1-R株在Marc-145细胞中复制及抗PRRSV细胞株的建立

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是世界上主要的猪传染性疾病之一,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。本研究选择猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）JXA1-R株ORF1a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6、ORF7的保守区域为靶序列,利用pSilencer2.1-U6 neo构建shRNA表达载体并转染Marc-145细胞。经实时荧光定量PCR、细胞病变及病毒滴度分析,结果显示,ORF1a-4-shRNA、ORF3-1-shRNA、ORF6-2-shRNA干扰质粒能明显抑制病毒基因的转录,并有效抑制PRRSV在Marc-145上的增殖,显著降低病毒滴度。最后筛选ORF6-2-shRNA表达质粒转染猪胎儿成纤维细胞,构建稳定转染细胞株,为抗PRRSV转基因猪的生产奠定了基础。     

苦参碱对感染PRRSV Marc-145细胞受体表达的影响

为探讨苦参碱在猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染Marc-145细胞过程中的抗病毒机制。本研究建立感染PRRSV的Marc-145细胞模型,将试验分为4组:细胞对照组、病毒对照组、苦参碱对照组和苦参碱试验组,每组重复3次。PRRSV感染细胞3,6,12,24h后,收集细胞,采用qRT-PCR和Western blot分别检测苦参碱对PRRSV N基因及其细胞受体CD163、Vimentin和CD151的影响。结果表明,在PRRSV感染24h内苦参碱显著降低PRRSV N基因的表达(P0.05)。与病毒对照组相比,在PRRSV感染6h时,苦参碱可显著降低CD163的表达量(P0.05);在PRRSV感染3,6h,苦参碱试验组Vimentin的表达量显著降低(P0.05);在PRRSV感染3,24h时,CD151的表达量显著低于病毒对照组(P0.05)。以上结果表明苦参碱在PRRSV感染Marc-145细胞的不同时间点可通过抑制细胞不同受体的表达来抑制PRRSV吸附和侵入宿主细胞,从而干扰PRRSV在细胞中的复制。     

miRNA调控PRRSV增殖的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种以导致怀孕母猪流产和仔猪呼吸困难为主要特征的疾病,PRRS已给养猪业造成巨大的经济损失。微RNA(miRNA)是一类重要的转录后调控基因表达的微小RNA分子,广泛存在于各种生物体内。文章综述了miRNA-23、miRNA-26、miRNA-29、miRNA-125、miRNA-181、miRNA-506对PRRSV在猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)或非洲绿猴肾上皮细胞(african green monkey kidney epithelial cell line,Marc-145)中复制的调控作用。     

从猪繁殖与呼吸综合征病毒的起源与进化谈猪繁殖与呼吸综合征的防制

1猪繁殖与呼吸综合征概述猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起猪的一种高度接触性传染病,不同年龄、品种和性别的猪均可感染,以母猪流产、死胎、弱胎、木乃伊胎,以及仔猪的呼吸困     

规模化猪场PRRSV不同感染状态下防控实践探讨

本文针对猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)不同感染状态,通过不同防控措施(接种疫苗、药物保健和生产组织优化),探讨了猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的防控经验。试验结果：PRRSV阳性不稳定猪群,接种PRRS灭活疫苗连续2次,1个月可实现猪群抗原阴性,阴性维持时间大约100d;PRRSV阴性猪群采用PRRS弱毒活疫苗半数低剂量免疫,排毒时间约28 d,免疫猪群100%转阳,而未免疫猪转阳率为30%～40%。     

葛根连芩提取液对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究

为了探索葛根连芩提取液体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用,在Marc-145细胞上进行相关抗病毒试验。在药物对Marc-145细胞的安全浓度范围内,通过细胞病变效应(CPE)来评价药物对PRRSV体外的抑制作用和阻断作用。结果显示,葛根连芩提取液对PRRSV有明显的体外阻断作用,而对PRRSV没有体外抑制作用。     

GS-441524体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制效果

利用CCK8方法测定GS-441524作用Marc-145细胞的安全浓度,并通过检测该化合物在病毒吸附、内化、核酸复制环节对病毒的感染能力、mRNA与蛋白合成能力的影响,评价了GS-441524体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的活性,确定其在体外抑制PRRSV的作用阶段。结果显示,在Marc-145细胞中,GS-441524具有良好的抗PRRSV活性,其EC₅₀为2.65μmol/L;该化合物在体外显示出良好的安全性,其CC₅₀为2 706.41μmol/L;对PRRSV复制周期的影响是GS-441524主要抑制PRRSV的复制早期阶段,而对病毒吸附、内化环节无阻断作用。结果表明,GS-441524具有抗PRRSV复制的潜在能力,该结果为抗PRRSV药物的选择和开发提供了新思路。     

中药抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用机制研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的烈性、高度接触性传染病,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状。疫苗免疫是防控PRRS的主要手段,但由于PRRSV毒株高度变异性导致疫苗对该病的效果仍不理想。中药(traditional Chinese medicine, TCM)活性成分众多,生理活性多样,包括抗菌、抗病毒和抗氧化等作用,是抗病毒药物的研究热点。研究证明,中药能以单体或复方的方式对PRRSV产生抑制增殖、阻断吸附和杀灭病毒的作用,以及对机体免疫反应产生影响。关于中药抗PRRSV的机制包括直接抗病毒机制和间接抗病毒机制。直接抗病毒机制即中药有效成分对病毒复制周期的直接影响,主要表现为抑制病毒的吸附、内化、复制、大分子组装和释放中的一环,从而达到抑制病毒的作用。间接抗病毒机制即中药有效成分通过调节细胞因子合成、炎症信号通路、细胞凋亡、氧化代谢和免疫系统...     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对宿主细胞信号转导通路影响的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)的病原,能够引起猪的繁殖障碍和呼吸系统疾病,目前尚未完全了解其致病机制。近年来,人们对于PRRSV感染后引起的相关信号通路变化进行了深入研究,许多信号通路传导机制不断被阐释,但仍缺乏系统性的探究,通过对PRRSV感染宿主后引起的相关信号通路变化研究做综述总结,以期为PRRSV研究提供新的思路。