小尾寒羊黄体期和卵泡期生殖轴凋亡基因的表达研究及其与发情的关系

旨在分析Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL基因在小尾寒羊黄体期和卵泡期下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异,并探究这些基因与绵羊常年发情性状的关系。以常年发情小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术,对比分析了Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL4个基因在不同繁殖状态下(黄体期和卵泡期)小尾寒羊下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达特征,采用放射免疫法(RIA)检测相应时期血清雌二醇和孕酮含量。结果表明,Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL4个基因在下丘脑、垂体、卵巢均有表达,Bad和Bcl-2在黄体期的垂体和卵巢中的表达量均显著高于卵泡期(P0.05),在下丘脑中2个时期表达量都没有显著差异(P0.05);Bax和Bcl-xL在黄体期下丘脑、垂体和卵巢中的表达量与卵泡期均无显著差异(P0.05)。黄体期血清中孕酮含量显著高于卵泡期(P0.05),而2个时期血清中雌二醇含量没有显著差异(P0.05)。Bad和Bcl-2基因在小尾寒羊黄体期和卵泡期的垂体和卵巢中差异表达,可能参与调控黄体期到卵泡期的发情状态转换,从而启动小尾寒羊发情。     

黄体期和卵泡期小尾寒羊DIO2与DIO3组织表达

为分析DIO2和DIO3基因在小尾寒羊不同繁殖时期(黄体期和卵泡期)下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异,阐明这2个基因在绵羊发情转换中的表达模式,实验采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术对比分析DIO2和DIO3基因在黄体期和卵泡期小尾寒羊下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异。结果表明:DIO2和DIO3基因在下丘脑、垂体、松果体、大脑、小脑、卵巢、子宫、输卵管、肾脏、肾上腺10种组织中均表达;DIO2基因在黄体期和卵泡期的垂体组织中表达量显著高于其他组织(P<0.05),其中黄体期垂体、子宫、下丘脑、松果体、输卵管和卵巢DIO2的表达量显著高于卵泡期(P<0.05);DIO3在卵泡期松果体、下丘脑、子宫、垂体和输卵管的表达量显著高于黄体期(P<0.05)。综上,DIO2能抑制绵羊发情,而DIO3促进发情。     

雪山草鸡PRL基因的表达差异及其对繁殖性能的影响

从880只250日龄雪山草鸡中选取处于产蛋期、就巢期和恢复期的鸡各20只,屠宰采集下丘脑、垂体、输卵管和卵巢,用荧光实时定量PCR法检测其中催乳素基因mRNA的表达水平,并与繁殖性能进行相关分析,结果表明:PRL基因在4个组织中都有表达,但在垂体中的表达极显著高于其他组织(P<0.01),而且在其他3个组织之间PRL的表达差异并不显著(P>0.05);就巢期鸡PRL基因在垂体中的表达量显著高于产蛋期鸡和恢复期鸡(P<0.05),而在下丘脑、输卵管和卵巢3个组织中3组个体PRL基因的表达量差异不显著(P>0.05);PRL在垂体的表达与种鸡的繁殖性能旱负相关,相关系数为-0.328(P<0.05).     

LEPR及LEP基因表达量对FecB不同基因型小尾寒羊产羔数的影响

旨在探索瘦素受体(Leptin receptor,LEPR)和瘦素(Leptin,LEP)基因与绵羊产羔数之间的关系。选择2~3岁健康母羊21只,对FecB野生纯合型(++)(9只)及突变纯合型(BB)(12只)小尾寒羊同期发情,通过腹腔镜记录排卵数。使用实时荧光定量PCR技术检测LEPR和LEP基因在卵泡期小尾寒羊11种组织(心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、输卵管、子宫体、垂体、下丘脑、卵巢)中的表达以及在卵泡期和黄体期、BB型和++型小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢性腺轴的表达。结果表明,BB型的排卵数(P=0.003 5)和产羔数(P=0.004 0)极显著高于++型。LEPR和LEP在卵泡期各个组织均有表达;其中LEPR基因在卵巢、子宫体、肾上腺组织高表达,LEP基因在下丘脑、垂体、卵巢和肾组织高表达。在卵巢中,卵泡期++型LEPR基因表达量高于黄体期++型,但差异不显著(P0.05);卵泡期BB型LEPR基因表达量极显著高于卵泡期++型(P=0.007)、黄体期BB型(P=0.003)和黄体期++型(P=0.003)。综上表明,卵泡期LEPR基因高表达与小尾寒羊产羔数增加存在一定程度的正相关,这为小尾寒羊产羔性状选育提高提供了新的线索。     

绵羊GnIH和VIP基因在不同繁殖状态下的表达变化

旨在进一步阐明GnIH和VIP基因在绵羊季节性发情和繁殖调控中的作用。本研究选取短光照(模拟繁殖季节)和长光照(模拟休情期)下成年苏尼特母羊各3只及卵泡期和黄体期的小尾寒羊母羊各3只,同时选取短光照第21天和长光照第3、15、21、42、49天共6个不同光照时间点的成年苏尼特母羊各3只,屠宰后采集其性腺轴组织(下丘脑、垂体、松果体、卵巢、输卵管、子宫体),利用qPCR技术分析GnIH和VIP基因mRNA表达规律。结果表明,GnIH和VIP基因在2个绵羊品种上述各组织中均表达,且在下丘脑中的表达量较高;苏尼特羊下丘脑中2个基因在长光照条件下的表达量均极显著高于短光照条件(P<0.01);在小尾寒羊下丘脑组织中,黄体期VIP基因的表达量显著高于卵泡期(P<0.05),黄体期GnIH基因的表达量稍高于卵泡期,但差异不显著(P>0.05)。由短光照转至长光照时,苏尼特羊下丘脑中GnIH和VIP基因表达上升,至长光照第3天时,2个基因表达均达到峰值,之后呈下降趋势。本研究揭示了GnIH和VIP基因在季节性发情和常年发情成年绵羊性腺轴各组织中的定量表达特征,不同光照条件和不同繁殖时期绵羊下丘脑中这2个基因的表达变化进一步提示了GnIH和VIP基因参与绵羊季节性发情调控和发情时期转换;在短光照转至长光照过程中,GnIH和VIP基因主要在长光照前3 d发挥关键作用。     

梅山与长大母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1和GPR54基因的表达差异

研究早熟与晚熟品种母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1和GPR54基因的表达差异。选用8头梅山母猪与12头长大(LY)母猪为研究对象,梅山母猪于70 d和100 d屠宰,LY母猪于70、100 d和199 d屠宰,收集血清及下丘脑、垂体、卵巢组织样品。ELISA检测血清瘦素(Leptin)和雌二醇(E2)水平,PCR克隆梅山与LY母猪Kiss1基因编码序列,实时荧光定量PCR检测母猪下丘脑、垂体、卵巢组织Kiss1和GPR54基因表达水平。结果表明:梅山与LY母猪Kiss1基因编码序列相似性为100%;梅山与LY母猪初情期下丘脑Kiss1基因表达量极显著高于垂体与卵巢(P<0.01),卵巢GPR54基因表达水平显著高于下丘脑与垂体(P<0.05)。梅山母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1基因表达水平都显著高于相同日龄和初情期LY母猪(P<0.05),梅山母猪血清Leptin水平极显著高于相同日龄LY母猪(P<0.01)。而E2水平显著高于100 d与初情期LY母猪(P<0.01)。Leptin与下丘脑Kiss1和GPR54基因表达呈显著正相关(P<0.05),而E2仅与下丘脑Kiss1基因表达有极显著正相关关系(P<0.01);梅山与LY母猪Kiss1基因编码区序列相似性为100%,梅山母猪下丘脑-垂体-卵巢轴上kiss1基因表达量较LY母猪高,主要原因可能是初情日龄早,下丘脑Kiss1基因表达水平的高低与血清Leptin和E2浓度密切相关。     

神经生长因子(NGF)在母牛性腺及性腺外生殖器官中的表达研究

本研究旨在探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在母牛卵泡期及黄体期子宫、卵巢、输卵管3种组织中的表达情况。采用FQ-PCR方法和Western blotting技术对成年母牛卵泡期及黄体期的子宫、卵巢、输卵管中的NGF mRNA和蛋白质表达进行了检测。结果表明,NGF mRNA和蛋白质在卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中均有表达,且卵泡期子宫中NGF mRNA表达量显著高于卵泡期卵巢和黄体期输卵管中NGF mRNA表达量(P0.05),其它组织间无显著差异。     

SHU 9119对小鼠发情周期中Ghrelin表达的影响

为了研究SHU9119与ghrelin之间的潜在的生理学关系,本试验选择4周龄的C57BL/6小鼠下丘脑和卵巢组织为研究材料,对小鼠发情周期中SHU9119介导的ghrelin mRNA在下丘脑和卵巢部位表达水平进行研究。结果表明,正常生理条件下小鼠间情期下丘脑保持较高水平的ghrelin mRNA表达,而在卵巢内其表达水平相对较低;腹腔注射SHU9119(50μg/kg体重)可极显著抑制下丘脑中ghrelin mRNA的表达(P<0.01),同时显著促进小鼠间情期卵巢Ghrelin mRNA的表达(P<0.05)。然而,SHU9119并未引起小鼠发情前期、发情期和发情后期ghrelin mRNA表达量的显著差异。上述结果表明,SHU9119可能通过MC4R系统调节间情期小鼠ghrelin的变化,而不参与其他性周期ghrelin mRNA表达量的相关调控。     

妊娠期小鼠下丘N-垂体-卵巢轴中PrRP和PrRP-R mRNA表达规律的研究

为探讨妊娠期小鼠下丘脑一垂体一卵巢轴中催乳素释放肽(PrRP)及其受体(PrRP-R)mRNA的表达规律,选用妊娠6、12、18 d小鼠(n=6),取下丘脑、垂体、卵巢组织,利用半定量PCR方法测定下丘脑-垂体-卵巢轴中PrRP和PrRP-R mRNA表达水平,另外利用放射免疫法(RIA)测定血浆孕酮(P)、雌二醇(E2)和催乳素(PRL)水平,探究下丘脑-垂体-卵巢轴PrRP和PrRP-R mRNA与血浆P、E2、PRL的相关关系.结果表明:妊娠期小鼠下丘脑、垂体、卵巢中都有PrRP、PrRP-R mRNA的表达,其中卵巢PrRP mRNA表达量较高,而下丘脑PrRP-R mRMA的表达量较高.妊娠期小鼠血浆P水平与垂体PrRP mRNA表达量呈显著负相关,而垂体PrRP mRNA与下丘脑PrRP-R mRNA表达量呈显著正相关,结果提示妊娠期m浆高水平的P可能通过抑制垂体PrRP mRNA的表达,进而作用于下丘脑参与妊娠相关调控.妊娠期小鼠血浆PRL水平与下丘腩、垂体、卵巢PrRP和PrRP-R mRNA的表达晕均无显著相关关系,提示血浆PRL水平可能小受上述组织PrRP的影响.     

青年母猪不同生殖器官神经营养因子-4/5的表达研究

本研究旨在探讨神经营养因子-4/5(neuroteophin-4/5, NT-4/5)在青年母猪卵泡期与黄体期卵巢、输卵管及子宫3种生殖器官中表达情况。采用实时荧光定量RT-PCR方法与Western blotting技术对青年母猪卵泡期与黄体期卵巢、输卵管及子宫中的NT-4/5 mRNA与蛋白质表达进行检测。结果表明,NT-4/5 mRNA与蛋白质在卵泡期与黄体期卵巢、输卵管及子宫中均有表达,且卵泡期卵巢、子宫NT-4/5 mRNA表达水平均显著高于黄体期(P＜0.05),而卵泡期输卵管NT-4/5 mRNA表达水平显著低于黄体期(P＜0.05)。试验结果为进一步研究NT-4/5参与青年母猪生殖道生理功能的调节奠定基础。