猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体的调查

应用血凝和血凝抑制试验检测了从吉林省部分地区采集的猪血清中血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）抗体。结果，212份样品中有94份呈现HEV抗体阳性反应，阳性率高达44．3％。被采集血清的猪未表现临床症状，说明该地区的猪群中存在HEV隐性感染。     

猪血凝性脑脊髓炎研究进展

流行病学及病理变化 猪血凝性脑脊髓炎病毒属于冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)的成员，引起幼猪的一种急性、高度接触性传染病。通常只侵鲁1～3周龄的乳猪，不感染其他动物。流行病学研究发现猪的HEV感染甚为普遍，很可能是全球性的。     

猪血凝性脑脊髓炎研究进展

猪血凝性脑脊髓炎(PHE)是由血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)感染引起猪的一种急性传染病,主要侵害1周龄~3周龄的哺乳仔猪。感染仔猪以呕吐、衰竭和神经症状为特征,病死率很高。血凝性脑脊髓炎病毒具有嗜神经性,主要从感染部位经外周神经向中枢神经系统传播,引起中枢神经系统损伤,从而造成非化脓性脑炎的病变。论文主要对猪血凝性脑脊髓炎的病原、临床症状和病理变化、致病机制、潜在危害及防治等方面进行综述。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒的血清学调查

应用血凝和血凝抑制试验检测了从辽宁省部分地区采集的猪血清中血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）的抗体滴度。结果表明,368份血清样品中,有162份呈抗体阳性反应,阳性率高达44.0%。被采集血清的猪未表现出临床症状,说明该地区存在血凝性脑脊髓炎病毒的隐性感染。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒感染可激活脑内的小胶质细胞

以猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)易感的BALB/c小鼠为实验动物模型,以小胶质细胞表面特异性标记物Iba1蛋白为检测对象,利用荧光定量PCR、Western-blot、免疫组化等方法,分别从基因转录水平、蛋白水平和组织学水平对PHEV感染后不同时间点小鼠脑内小胶质细胞的增殖、活化情况进行了检测分析。结果表明,与对照组相比,试验组小鼠脑组织内的Iba1基因转录水平、蛋白表达量均有升高,且都随着感染时间延长而增大。将采集的小鼠脑组织制作石蜡切片,免疫组化结果证实PHEV的感染激活了小胶质细胞,表现为细胞数量增多,呈聚集样分布;同时细胞形态变化也很明显,胞体变大并呈阿米巴状。上述试验证实PHEV感染小鼠后小胶质细胞发生了明显增殖、活化现象,为后期深入开展PHEV所致神经系统炎性损伤的机制研究奠定了基础。     

PGRN缺失对猪血凝性脑脊髓炎病毒脑内感染小鼠的影响

已有研究表明溶酶体与β冠状病毒复制密切相关,为研究调控溶酶体功能的关键蛋白颗粒蛋白前体(progranulin, PGRN)对β冠状病毒猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)复制的影响,本研究以PGRN缺失及其对照小鼠为研究对象,探究PGRN在PHEV脑内感染小鼠过程中的作用。研究发现,与PHEV脑内感染野生型小鼠相比,PGRN缺失小鼠脑内感染病毒后其存活时间延长,同时脑内病毒含量显著降低,细胞因子IFN和TNF-a的含量升高;此外,神经退行性病变相关蛋白TDP-43表达显著升高,表明PGRN缺失能减缓病毒的复制,增强免疫反应,并影响病毒的致病性。研究结果为进一步揭示溶酶体蛋白PGRN在PHEV复制过程中的作用机制提供研究基础,并为β冠状病毒致病机制研究提供参考。     

猪血凝性脑脊髓炎的研究现状

猪血凝性脑脊髓炎是由血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)感染引起猪的一种急性传染病，主要侵害乳猪。以呕吐、衰竭和脑脊髓炎为特征，死亡率很高。血清学检测证明猪感染HEV很普遍，可能是世界性的。作者对猪血凝性脑脊髓炎的病原、发病机理、临床症状、病理变化及常用的诊断技术和防制措施等几个方面的研究现状作了简要综述。     

一例猪血凝性脑脊髓炎实验室诊断与防治

猪血凝性脑脊髓炎是一种病毒性传染性疾病,它是由凝血性脑脊髓炎病毒感染引发,临床上主要以呕吐、采食停止、便秘、身体逐渐消瘦、中枢神经系统功能障碍为主要特征.不同年龄的猪受到病原侵染之后,所表现出来的症状存在很大差异性,其中幼龄猪感染病毒之后造成的死亡率最高.近年来,随着生猪养殖产业不断向着集约化规模化方向发展,猪血凝性脑...     

猪血凝性脑脊髓炎病毒感染对小鼠脑内星形胶质细胞的影响

为阐明猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)感染后小鼠脑内星形胶质细胞的活化情况,本研究通过滴鼻途径将PHEV接种BALB/c小鼠,分别运用qRT-PCR、Western blot和间接免疫荧光方法检测感染后不同时间点小鼠脑组织...     

Porcine encephalomyelitis caused by hemagglutinating encephalomyelitis virus.

Six epizootics of encephalomyeltis in suckling pigs in Minnesota were attributed to infection with hemagglutinating encephalomyelitis virus. The disease occurred in 74 litters of pigs and was characterized by sudden onset of tremors, inappetence, weakness, atazia, and hyperesthesia, with high morbidity and case fatality rate. Pathologic changes consisted of marked nonsuppurative, nondemyelinating encephalomyelitis characterized by perivascular mononuclear cuffing, gliosis, neuronal death, and satellitosis. Clinical disease was limited principally to suckling pigs during a single farrowing period and did not recur in the herds involved during the ensuing 18 months.     

单核细胞增多性李斯特菌对小鼠血脑屏障通透性的影响

为研究小鼠感染单核细胞增多性李斯特菌(LM)90SB2株后血脑屏障通透性的变化,本实验采用ELISA方法检测小鼠血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)的水平和甲酰胺-紫外分光光度法检测脑组织中伊文思蓝(EB)的含量。结果显示:MBP于感染后4 h开始升高,10 h后维持较高水平,10 h、24 h、48 h、120 h和144 h各时间点与对照组比较均有显著性差异(p<0.05);EB在感染后24 h之内无明显增加,24 h后有较大幅度升高,并且与对照组比较存在显著性差异(p<0.05);但72 h后开始缓慢下降。表明小鼠感染LM后会导致血脑屏障通透性一定程度的升高。     

滴鼻途径感染猪血凝性脑脊髓炎病毒小鼠的免疫动态变化

应用石蜡切片、ELISA等方法,通过对小鼠脾脏病理组织学观察以及脾脏指数、IL-2、IFN-γ和TNF-α等重要细胞因子的检测,研究猪血凝性脑脊髓炎病毒（Hemagglutinatingencephalomyelitisvirus,HEV）感染不同周龄（4、6周龄）BALB／c小鼠后的免疫动态变化特点。结果显示,无论是4周龄还是6周龄小鼠,在被HEV感染后的1～3d,脾小体生发中心增大并在红髓有多量浆细胞出现,第4天脾小体开始缩小,其周边和中央动脉周围有多量淋巴细胞聚集,到第5天脾小体生发中心消失并在其周边和中央动脉周围淋巴细胞增多。另外,脾脏指数和血清中的TNF-α、IFN-γ、IL-4浓度均呈现先升高后降低的趋势,IL-2含量变化不明显,而IL-10含量较少几乎检测不到。结果表明,HEV感染初期,小鼠对侵入的病毒做出一定的免疫应答,但是随着病毒复制,病毒量的增大,小鼠的免疫反应受到抑制。同时不同周龄小鼠的被检指标降低或升高程度及持续时间不同,表明HEV的免疫、发病与小鼠感染年龄之间存在一定相关性。     

猪血凝性脑脊髓病毒在J774A.1细胞中的增殖特性及炎性因子表达

为了探讨宿主巨噬细胞(J774A.1细胞)在猪血凝性脑脊髓炎病毒(Procine hemagglutinatin encephalomyelitis virus,PHEV)感染过程中的作用及其参与炎性反应的应答特征,本研究通过CPE观察、TCID50、免疫荧光(IFA)、ELISA和PT-PCR等方法,对PHEV感染J774A.1细胞的增殖特性及炎性因子IL-6、TNF-a、IL-1β等mRNA转录水平和蛋白水平的表达情况进行检测分析。IFA的检测结果显示,感染后8h后仅有少量的被荧光抗体标记细胞出现绿色荧光,随着感染时间的延长,荧光标记的细胞逐渐增加,直至感染后32~40h出现大量细胞出现荧光。TCID50结果显示,PHEV感染滴度的增值趋势与mRNA含量的变化基本一致,在感染后24~32h增殖速度最快,至32h病毒感染滴度达到最高。荧光定量RT-PCR结果显示,PHEV感染可诱导J774A.1细胞分泌的TNF-a、IL-6、IL-1βmRNA转录水平均显著升高,尤其IL-6mRNA的表达量显著增加,在48h达到对照组的25倍;TNF-αmRNA的表达量在感染后8h内增加为对照组的4倍,随后一直维持较高水平。ELISA结果显示,TNF-a、IL-6、IL-1β蛋白水平表达也显著增加。上述研究结果表明,PHEV不仅可以感染J774A.1细胞,而且能诱导其分泌多种细胞因子参与免疫应答,为进一步阐明机体重要免疫细胞在PHEV过程中的作用奠定了基础。     

Immunofluorescence studies on the pathogenesis of hemagglutinating encephalomyelitis virus infection in pigs after oronasal inoculation

Hemagglutinating encephalomyelitis virus (HEV; also designated vomiting and wasting disease virus) was inoculated oronasally in 14 colostrum-deprived pigs at the day of birth. Anorexia and vomition were seen after 4 days. Pigs were killed at different times after inoculation, and the results of the examination by immunofluorescent antibody technique revealed that the epithelial cells of nasal mucosa, tonsils, lungs, and small intestine served as sites of primary viral replication. After the local replication near the sites of entry, the virus spread via peripheral nervous system to the CNS. During the incubation period, viral antigens were detected in the trigeminal ganglion,the inferior vagal ganglion, the superior cervical ganglion, the intestinal nervous plexuses, the solar ganglion, and the dorsal root ganglia of the lower thoracic region. In the brain stem, the infection started in the trigeminal and vagal sensory nuclei and spread to other nuclei and to the rostral part of the brain stem. In later stages of the infection, viral spread into the cerebrum, cerebellum, and spinal cord was sometimes also observed. Viral replication in nervous plexuses of the stomach was not present during the incubation period, but was detected in all except 1 of the pigs that were ill when killed. The question whether the vomition is induced centrally by viral replication in the brain stem or is due to viral replication in peripheral nervous tissues remains unanswered.     

猪血凝性脑脊髓炎病毒S1蛋白基因在毕赤酵母中的表达

应用特异性引物从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出S1蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体中,得到重组质粒pTS1。用Ec0R I和Not I双酶切pTS1,回收目的基因S1片段将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαASI。用BstX I酶切pPICZαAS1使其线性化,并电转至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1％甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果显示,在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为73000的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的S1蛋白片段在毕赤酵母中获得成功表达。