禽流感致病的分子基础及强弱毒鉴别诊断

高致病力禽流感(HPAI)被国际兽疫局列为Ⅰ类烈性传染病.我国农业部也将该病列为一类烈性传染病.高致病性禽流感一旦暴发会给养禽业带来毁灭性的危害,1983年美国禽流感和1995年墨西哥禽流感造成相当于现今10多亿美元的经济损失.     

猪IL-10重组腺病毒的构建及其对PRRSV体外增殖的影响

为探索猪 IL-10对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)增殖的影响,本研究构建表达猪IL-10的重组腺病毒对其进行过表达研究.根据GenBank收录的猪IL-10基因序列设计引物并扩增获得该基因,将其克隆至pAdT...     

柑桔衰退病毒强弱株系诱导甜橙差异表达蛋白研究

据中国农业科学院柑桔研究所的研究人员杨方云等的研究报道,采用比较蛋白质组学方法对柑桔衰退病毒强弱株系侵染甜橙后诱导寄主蛋白质表达变化进行了研究。利用双向荧光差异电泳     

鸡毒支原体F弱毒疫苗株感染SPF鸡对IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10产生的影响

为了解鸡毒支原体（Mycoplasma Gallisepticum,MG）F弱毒疫苗株感染SPF鸡对IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10共4种细胞因子产生的影响,本研究分别以活菌浓度为109（A组）、106（B组）CCU/mL的MG F株及生理盐水（C组）点眼接种SPF鸡,采用ELISA方法对免疫前后外周血4种细胞因子的动态变化规律进行研究。结果显示免疫后A、B组的4种细胞因子浓度明显升高;其中IFN-γ质量浓度A组于第7、14天显著高于其他组（P〈0.05）,B组于第7天显著高于C组（P〈0.05）;IL-2质量浓度各组于第3、5、7天差异显著（P〈0.05）,由高至低以此为：A、B和C组;A组与B组IL-4和IL-10质量浓度差异不显著（P〉0.05）,但两组IL-4质量浓度于第5、7、14天显著高于C组（P〈0.05）;且2组IL-10质量浓度于第5、7、14、21天显著高于C组（P〈0.05）。免疫MG F株可较好的提高IFN-γ、IL-2介导的细胞免疫作用和IL-4、IL-10介导的体液免疫作用,且MG F株活菌浓度与接种鸡的细胞免疫作用呈正相关性。     

猪瘟免疫猪接种PRRSV nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后IL-12、IL-10、TNF-α应答特征

不同时间段采集猪的血液样本,利用ELISA方法检测血清和细胞培养上清中IL-12、IL-10、TNF-α等3种细胞因子的水平,分析猪双重免疫CSFV、PRRSV弱毒苗后血清和细胞培养上清中细胞因子的变化规律。结果显示,IL-12在血清中的浓度显著高于细胞培养上清中的浓度(P<0.01),在CSFV高抗体PRRSV高抗体组中28d采血的细胞培养上清中IL-12的浓度高于14d采血的细胞培养上清中的浓度(P<0.05);IL-10血清中水平显著低于细胞培养上清中水平(P<0.01),在CSFV高抗体PRRSV高抗体组中28d采血的细胞培养上清中的IL-10浓度显著低于14d采血的细胞培养上清中的浓度(P<0.01);TNF-α在血清中水平显著低于细胞培养上清中水平(P<0.01),在3组中28d采血的细胞培养上清液中TNF-α浓度高于14d采血的细胞培养上清液中浓度(P<0.05)。结果表明,2种疫苗特异性抗体应答高时,IL-12水平显著上调,IL-10水平显著下调,提示上调IL-12及下调IL-10都是基因缺失疫苗发挥效力的潜在机制。TNF-α总体水平上升,但在血清中水平较低。     

PRRSV强弱病毒株嵌合感染性克隆的构建及鉴定

为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)与致弱PRRSV的重组病毒,本研究在PRRSV致弱株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS与HP-PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,利用SOE-PCR技术将强弱毒的nsp2区域进行互换,构建了nsp2基因替换的强弱毒PRRSV嵌合感染性克隆.将构建的嵌合克隆转染MA104细胞,4d后观察到典型的细胞病变.通过RT-PCR和间接免疫荧光证明获得了强弱病毒株之间nsp2基因互换的嵌合病毒.这些嵌合病毒的构建和相应反向遗传操作平台的建立,为进一步研究HP-PRRSV的致病机制及相关疫苗的研发奠定了基础.     

PRRSV特异性淋巴细胞体外增殖培养试验研究

<正>猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种急性、热性传染病,以引起母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道症状及高死亡率为主要特征,又称猪蓝耳病。目前,PRRSV已成为我国重要猪传染病病原之一。许多研究者认为,在抗PRRSV感染免疫中,细胞免疫起更重要的作用[1]。过继免疫是把致敏淋巴细胞(具有特异免疫力的)或致敏淋巴细胞的产物(如转移因子和免     

PRRSV诱导机体免疫抑制的机制

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是影响猪繁殖和呼吸障碍的免疫抑制性疾病,严重影响世界养猪业。该病自1996年在我国开始流行以来,已经历了两次较大的变异。PRRSV极易变异的特性导致该病在临床上的流行情况越来越复杂。由于猪体对PRRSV感染后的免疫机制尚未清楚,目前尚无安全有效的疫苗对该病进行防控。胸腺作为猪的中枢免疫器官,研究PRRSV感染后引起的中枢免疫器官的损伤情况及其损伤与机体免疫抑制的关系是探求PRRSV引起猪体免疫抑制机制的重要途径。     

IBV可体外诱导γ-干扰素的产生

传染性支气管炎病毒（IBV）属于冠状病毒属,可引起家禽的呼吸系统疾病。荷兰乌德勒支大学兽医学院的科研人员采用IBV对鸡只进行体外刺激,结果在感染和未感染的鸡脾细胞中都产生了γ干扰素。当采用其他禽病毒或其他冠状病毒进行处理时均不会出现这种非特异性的刺激,并且,采用IBV对哺乳动物细胞进行处理也无此反应。IBV的灭活导致γ-干扰素产量下降,但是高于为刺激的细胞产生水平。     

甘草酸体外抗PRRSV的作用机制

为了研究甘草酸体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的作用及机制,本试验确定了甘草酸的抗PRRSV作用,并通过检测甘草酸对病毒的吸附侵入、核酸复制等环节对病毒的结构蛋白、非结构蛋白以及宿主细胞受体和IFN-α表达的影响确定甘草酸体外抗PRRSV的作用机制。结果显示,甘草酸阻断PRRSV感染时减少了GP4的表达,并降低CD163和CD151的表达;抑制PRRSV吸附时抑制了PRRSV GP4和细胞CD163的表达;抑制PRRSV侵入时抑制了GP4的表达,并显著提升细胞CD163和CD151的表达;抑制增殖的作用机制是抑制细胞内PRRSV nsp9和nsp10的表达,前期抑制病毒引起的TLR3表达升高的趋势,后期促进TLR3的表达;中后期降低、末期促进IFN-α的表达。结果表明,甘草酸能通过调节PRRSV的蛋白、宿主细胞受体和细胞因子的表达来抑制PRRSV体外感染Marc-145细胞。     

猪干扰素-α表达质粒和多聚左旋氨基酸共聚物对PRRSV弱毒疫苗诱导产生中和抗体的影响

研究非病毒载体多聚左旋赖氨酸(PLL)与猪干扰素α(PIFNα)重组质粒的聚合物PLL-pVAX1-PIFNα对PRRSV弱毒疫苗诱导产生中和抗体的影响。本文首先构建了猪干扰素α真核表达质粒pVAX1-PIFNα,并将此重组质粒在293T细胞中转染,经Western blot验证PIFNα在细胞上清中分泌表达;将pVAX1-PIFNα与PLL以适当的比例聚合后,联合PRRSV弱毒疫苗免疫动物,应用ELISA抗体试剂盒检测PRRSV抗体的水平。结果表明:联合聚合物PLL-pVAX1-PIFNα注射免疫组的抗体水平明显高于其他各组,说明PLL与pVAX1-PIFNα表达质粒的聚合,显著提高了pVAX1-PIFNα表达质粒联合PRRSV弱毒疫苗免疫后诱导机体产生抗体的能力。     

苷肽注射液诱导犬产生IL-2的试验

为了探讨新型免疫增强剂——苷肽注射液对犬免疫功能的影响,以20只健康犬为研究对象,随机分为四组,每组5只,分别注射苷肽注射液、苷肽注射液和犬五联疫苗、犬五联疫苗、生理盐水,各组犬于注射后0、2、7、15、21 d采血,检测不同组间的IL-2分泌情况。结果表明:苷肽注射液单独应用及其与疫苗联合应用,在注射后2 d就可以显著提高IL-2水平,并且可以维持15 d;注射苷肽注射液联合犬五联疫苗组和单独注射苷肽注射液组IL-2水平显著高于单独注射犬五联疫苗组(P<0.05),说明苷肽注射液可以提高犬IL-2的水平,具有提高细胞免疫的作用。     

猪对PRRSV易感性差异的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是当前危害养猪业最严重的传染病之一,其病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)。由于PRRSV的不断变异,其感染力和致病力增强,现有疫苗的保护效果不佳,且弱毒活疫苗有变异成新强毒的风险。本文从宿主遗传变异的角度讨论猪对PRRSV的易感性,包括猪免疫应答的变异与易感性、猪对PRRSV易感性的品种(系)间差异以及PRRSV抗性育种亟待解决的问题,试图为PRRS的防制提供新的思路。     

新城疫病毒强弱毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立

设计1对特异性引物扩增新城疫病毒F蛋白基因460 bp大小片段,而后利用PstⅠ和Bbe Ⅰ进行酶切,弱毒株酶切出120 bp和220 bp两个片段,而强毒株酶切出120 bp和340 bp两个片段,经敏感性、特异性试验,表明该方法敏感性高、特异强.用该PCR-RFLP检测了170份病料,检出强毒株5份、弱毒株1份,PCR阳性病料经SPF鸡胚进行病毒分离,用MDT、ICPI试验测定其生物学毒力,并对它们的F蛋白基因克隆测序,通过MDT、ICPI和推导氨基酸裂解位点分析,确定其毒力的结果与PCR-RFLP检测结果一致.表明该方法快速、特异、敏感,很适合于鸡群中新城疫快速诊断和新城疫病原学监测.     

PRRSV野毒感染猪群免疫接种弱毒活疫苗的效果分析

为评估猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）弱毒活疫苗的免疫效果,本研究在两个小型猪场各选取两窝仔猪,在免疫接种猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）弱毒活疫苗后不同时间采集血清,应用RT-PCR检测PRRSV核酸,应用N-ELISA和G-ELISA两种试剂盒检测PRRSV抗体。结果发现,免疫前0 d可以从仔猪血清中检测到PRRSV野毒株核酸,可持续到免疫后30 d;相对应的母猪在免疫前0 d可从血清中检测到PRRSV野毒株核酸。试验仔猪在免疫前0 d未能检测到PRRSV抗体,但在免疫后30～150 d均可检测到PRRSV抗体,其中N-ELISA试剂盒的阳性检出率在免疫后30、60 d高于G-ELISA试剂盒的阳性检出率,而在免疫后120、150 d则低于G-ELISA试剂盒的阳性检出率。使用两种ELISA试剂盒共同检测216份血清样品,检测结果的总体符合率为95.83%;配对χ²检验,P>0.05,两者差异不显著;Kappa值为0.87,属于极强一致性;两者相关系数r为0.605,具有显著线性相关。表明免疫接种弱毒活疫苗可以有效清除野毒感染猪群中的野毒株,N-ELISA和G-ELISA两种ELISA试剂盒均可用于评估弱毒活疫苗的免疫效果。     

苦参碱对PRRSV的体外抑制作用及其机制

本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察苦参碱(matrine)体外抗猪繁殖呼吸与综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)活性,并从抑制病毒复制、阻断吸附和直接杀灭3个方面探讨苦参碱体外抑制PRRSV的作用机制.结果显示,苦参碱CC50＞1 500 mg/L,最大安全浓度为750 mg/L,EC50为(443.5±33.4)mg/L,SI≥3.38,在安全浓度范围内对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制率达到93.6％;在直接杀灭和复制抑制试验中最高抑制率分别达到105.10％和91.53％;在病毒吸附抑制试验中抑制率＜20％,表明苦参碱不能阻断PRRSV对Marc-145细胞的吸附.结果表明,苦参碱在体外可有效抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,其抗病毒机制可能是干扰病毒的复制或/和直接杀灭病毒,提示苦参碱可作为研发预防及治疗猪蓝耳病的药物或先导化合物.     

新城疫病毒毒力强弱的分子生物学基础

新城疫病毒毒力强弱的分子生物学基础宋长绪（广东省兽医研究所，广州５１０６４０）刘福安（华南农业大学，广州５１０６４２）新城疫病毒（ＮＤＶ）属于副粘病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）副粘病毒属Ⅰ型（ＰＭＶ－１），为新城疫的病原。新城疫是极易传染的...     

PRRS弱毒疫苗毒株与野毒株的分子遗传学差异

猪繁殖-呼吸综合征(PRRS)是近年来新发现的一种严重危害养猪业的病毒性传染病,其主要特征是:引起繁殖母猪的生殖障碍与仔猪的呼吸道症状.故命名为猪繁殖-呼吸综合征.该病病原为PRRS病毒(PRRSV),于1991年为荷兰学者Wensvoort等最先分离到.根据其基因组的结构及转录调控机制的特点,将其归于动脉炎病毒科.随后的研究表明,其为一种有囊膜的单股正链RNA病毒,根据病毒的基因组组成特征及抗原性差异,可将其分为两种基因型:即以VR-2332株为代表的北美洲型和以LV株为代表的欧洲型.其基因组的共同特点是,都含有8个开放阅读框架(ORF),其所编码的蛋白也都相同[1].即ORF1(包括ORF1a和ORF1b)编码病毒的复制酶,ORF2～6编码病毒的囊膜蛋白,ORF7则编码高度保守的核衣壳蛋白.