母子两代连续双酚A暴露对子鼠睾丸发育的影响

双酚A(BPA)是一种无处不在的环境雌激素,长期暴露或接触会影响动物的生殖功能。为了探究持续低剂量暴露BPA对雄鼠生殖器官和功能的影响,将妊娠0 d孕鼠随机分为7组,每组20只,分别为空白对照组,0.05 mg·kg~(-1)·d~(-1) BPA组,0.50 mg·kg~(-1)·d~(-1) BPA组,5.00 mg·kg~(-1)·d~(-1) BPA组,10.00 mg·kg~(-1)·d~(-1) BPA组,20.00 mg·kg~(-1)·d~(-1) BPA组, 50.00 mg·kg~(-1)·d~(-1) BPA组。自母鼠怀孕0 d起持续饮水染毒BPA至哺乳期结束,仔鼠21 d断奶后直接以继续饮水染毒至45日龄性成熟期,共染毒63 d。子代雄鼠于45 d处死。结果显示,染毒BPA剂量大于等于10.00 mg·kg~(-1)·d~(-1)时雄鼠血清BPA含量显著高于空白对照组(P<0.05),染毒BPA剂量大于等于20.00 mg·kg~(-1)·d~(-1)时睾丸组织BPA含量显著高于空白对照组(P<0.05)。H&E染色和睾丸器官指数测定结果显示染毒BPA剂量10.00 mg·kg~(-1)·d~(-1)以上导致睾丸生精小管萎缩,小管间隙变大,50.00 mg·kg~(-1)·d~(-1)以上导致子代雄鼠睾丸指数显著增大(P<0.05)。染毒BPA剂量在0.50 mg·kg~(-1)·d~(-1)以上时睾丸精子活力与密度相较于空白对照组均显著减少(P<0.05),而各染毒组精子畸形率均显著大于空白对照组(P<0.05)。染毒BPA剂量在0.50 mg·kg~(-1)·d~(-1)以上时睾丸生殖细胞核DNA损伤显著大于空白对照组(P<0.05)。染毒BPA剂量在0.05 mg·kg~(-1)·d~(-1)以上时睾丸雄激素受体(AR)表达量显著减少(P<0.05)。转录组测序结果显示染毒BPA可导致雄鼠睾丸剪切体U1亚基蛋白质C合成基因Snrpc和剪切体通用载体组件编码基因Hnrnpu均显著下调,使得mRNA的转录后修饰第一步即无法进行,剪切体功能受阻可能是BPA影响睾丸发育的重要原因。荧光定量PCR证实了转录组结果,并进一步证明了Hnrnpu对BPA的敏感性大于Snrpc。     

阿司匹林丁香酚酯的一代繁殖毒性研究

为了初步评价阿司匹林丁香酚酯(AEE)对亲代大鼠的生殖功能和子代早期发育的影响,将360只Wistar大鼠随机分成6组,分别为受试药物AEE高、中、低剂量组(剂量分别为498.0、124.5和31.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)),阿司匹林组(剂量为68.4 mg·kg~(-1)·d~(-1)),丁香酚组(剂量为246.0 mg·kg~(-1)·d~(-1)),空白对照组(给予常规维持饲料)。各实验组均按设定剂量连续给药10周后,测定亲代大鼠主要的脏器系数、繁殖指数和生产指标以及子代(F1)仔鼠的出生指标和生长指标。结果显示,与空白对照组相比,高剂量的AEE影响胎鼠的生长(P0.05),并且高剂量AEE组大鼠的妊娠率、窝产仔数、出生活仔率和出生存活率都偏低,其中雄性仔鼠比例偏高;阿司匹林组妊娠大鼠和哺乳期胎鼠生长缓慢(P0.05);高剂量组AEE亲代大鼠的睾丸和附睾系数偏高(P0.05),阿司匹林和丁香酚组子代大鼠的附睾系数偏高(P0.05)。结果表明,在本试验条件下,AEE对大鼠繁殖毒性的最大无损害作用剂量为31.1 mg·kg~(-1)·d~(-1),对大鼠的最小有损害作用剂量为124.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)。     

母鼠孕期暴露双酚A对子代断乳雄鼠生殖内分泌以及睾丸DNA甲基化的影响

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(bisphenol A,BPA)对子代断乳雄鼠生殖内分泌与睾丸DNA甲基化的影响。按0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0 mg·kg~(-1)·d~(-1 )BPA剂量在妊娠期(PND)1～17 d灌胃孕鼠,制备孕鼠BPA暴露模型。然后统计母鼠妊娠期流产率,仔鼠断乳时存活率,睾丸系数。放射免疫法检测血清中雌二醇(E_2)、睾酮(T)含量;酶联免疫吸附法检测血清中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)含量;实时定量荧光PCR法检测睾丸中DNA甲基转移酶1(Dnmt1)、DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)、DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)mRNA相对转录水平。结果显示,20.0 mg/kg BPA暴露可极显著增加断乳时仔鼠睾丸系数(P0.01);20.0,40.0 mg/kg BPA暴露可显著增加母鼠流产率(P0.05),极显著降低仔鼠存活率(P0.01);2.5,20.0 mg/kg BPA暴露可极显著提高仔鼠血清T和ERβ含量(P0.01);各BPA剂量均可极显著降低仔鼠血清雌二醇水平(P0.01),促进睾丸内Dnmt1转录,抑制Dnmt3a和Dnmt3b转录;血清中雌激素受体α含量与BPA剂量呈现非线性关系。表明BPA通过干扰子代雄鼠睾丸内DNA甲基转移酶(Dnmt)的转录,使睾酮、雌二醇及雌激素受体分泌紊乱,影响子代雄鼠的生殖机能。     

枸杞多糖抗全氟辛酸致子代雌鼠生殖损伤的作用及对生殖激素的影响

为探讨妊娠期暴露于全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)对子代雌鼠的生殖损伤作用,以及枸杞多糖(lyciumbarbarumpolysaccharide, LBP)对生殖损伤缓解的效果和对生殖激素含量的影响,试验取40只孕鼠随机分为4组,每组10只,分别为空白组,1,2.5,5 mg/kg组(饲粮中分别含1,2.5,5 mg/kg的PFOA),分别测定各组孕鼠肾脏的病理变化,肾脏、卵巢指数,生殖激素的含量确定制作生殖损损模型的最佳剂量。取60只孕鼠随机分为6组,每组10只,1组为空白组,2组为PFOA模型组,3～6组为枸杞多糖保护组,每天分别灌服20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg和100 mg/kg枸杞多糖,记录孕鼠体重变化,仔鼠出生重和出生率;子代雌鼠生长至21天时,采集仔鼠血清、肾脏和卵巢,计算器官指数;用放射免疫法检测血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌激素(E2)的含量。结果表明:2.5 mg/kg PFOA可做为生殖损伤模型剂量。应用枸杞多糖以后仔鼠出生率明显上升,仔鼠体重显著升高(P0.05);与模型组比较,血清LH含量显著降低(P0.05),E2含量显著升高(P0.05),FSH含量变化差异不显著(P0.05)。表明枸杞多糖能够有效调节子代雌鼠生殖激素水平,缓解PFOA所致生殖损伤。     

枸杞多糖对双酚A暴露小鼠生精细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

研究枸杞多糖(LBP)对双酚A(BPA)暴露小鼠睾丸生精细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax凋亡蛋白表达的影响.将50只成年雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D、E共5组,每组10只.除正常对照组(A组)注射等量橄榄油外,其余4组小鼠分别腹腔注射20 mg·kg 1的BPA,连续7d,建立生精损伤模型.同时C、D、E组小鼠分别灌服7d不同剂量的LBP(50、100、200 mg·kg-1),正常对照组(A组)和模型组(B组)小鼠灌服等量生理盐水.制备组织切片观察睾丸组织病理学变化,免疫组化法测定睾丸组织Caspase-3、Bax和Bcl-2凋亡蛋白的表达.结果显示,BPA可极显著增加睾丸生精细胞Caspase-3和Bax的阳性细胞数量(P＜0.01),降低Bcl-2的表达(P＜0.05).补充不同剂量LBP后,Caspase-3的阳性表达均极显著低于模型组(P＜0.01).200 mg·kg-1 LBP组生精细胞Bax的阳性细胞数量极显著低于模型组(P＜0.01);Bcl-2的表达随LBP剂量的增加而提高,其中200 mg·kg1LBP组阳性表达极显著高于模型组(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值也随着LBP剂量的增加而上升.结果表明,枸杞多糖通过调节凋亡相关基因的表达,抑制生精细胞凋亡,从而缓解双酚A引起的雄性生殖损伤.     

玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞及其早期胚胎中DNA甲基转移酶的表达模式

卵母细胞玻璃化冷冻导致的胚胎发育阻滞与其DNA甲基化模式的异常密切相关。本研究以小鼠为模型,旨在探讨玻璃化冷冻对卵母细胞及其形成的早期胚胎中DNA甲基转移酶(DNMTs)表达模式的影响。采用免疫荧光染色结合激光共聚焦显微成像技术检测了DNMT1、DNMT3A和DNMT3B在新鲜和冷冻卵母细胞及其形成的各阶段早期胚胎中的表达与分布,结果表明:在卵母细胞及受精后的合子中冷冻组3种DNMTs的表达均出现了异常。采用实时定量PCR技术检测了新鲜和冷冻卵母细胞及其形成的囊胚中,Dnmt1、Dnmt3a和Dnmt3b的m RNA表达水平,显示在冷冻卵母细胞中3种Dnmts的表达水平均显著下降,至囊胚阶段Dnmt3b的表达水平仍然很低(P0.05)。研究结果表明卵母细胞玻璃化冷冻导致了小鼠早期胚胎发育过程中DNMTs表达模式的异常,这可能是DNA甲基化异常的重要原因之一。     

地方性鼻内腺瘤中DNMTs启动子甲基化状态及转录表达的研究

为研究山羊地方性鼻内腺瘤中DNA甲基转移酶(DNMTs)启动子区甲基化状态及其对转录表达的影响,本研究采用甲基化特异性PCR和荧光定量RT-PCR法检测20例正常鼻内腺组织和24例鼻内腺瘤组织中DNMTs基因启动子甲基化状态及其转录表达水平,分析DNMTs基因甲基化对转录表达的影响。结果显示,24例鼻内腺瘤组织中DNMT1和DNMT3b基因启动子甲基化阳性率分别为20.8%(5/24)和41.7%(10/24),与正常鼻内腺组织(未检测到甲基化)均差异显著(p0.05)。20例正常鼻内腺组织中DNMT1和DNMT3b基因相对转录表达量分别为1(0.693~1.444)和0.382(0.503~1.840);5例甲基化和19例非甲基化鼻内腺瘤组织中DNMT1相对转录表达量分别为1.56(0.678~1.474)和1.248(0.820~1.905),两者差异不显著;10例甲基化和14例非甲基化鼻内腺瘤组织中DNMT3b相对转录表达量分别为1.165(0.646~1.548)和0.376(0.230~1.231),两者差异显著(p0.05)。而DNMT3a在两组间无差异。以上结果表明,鼻内腺瘤组织中DNMT3b基因甲基化与转录表达相关,推测其对鼻内腺瘤具有促进肿瘤相关基因甲基化的作用,导致肿瘤相关基因失活或激活,最终导致肿瘤发生。     

暴露纳米氧化锌对雄性小鼠糖、脂代谢及组织学的影响

根据小鼠的体质量,以不同剂量经口连续染毒纳米氧化锌,90d后摘眼球取血,对血脂、血糖、肝脏抗氧化指标进行检测。结果显示:对照组、80mg/kg剂量组小鼠血糖显著高于160mg/kg剂量组(P<0.05)。对照组、80mg/kg剂量组小鼠血糖极显著高于40mg/kg剂量组(P<0.01);40,80 mg/kg剂量组小鼠血脂含量显著高于对照组(P<0.05),160mg/kg剂量组小鼠血脂含量极显著高于对照组(P<0.01);40,160 mg/kg剂量组小鼠血清总胆固醇含量显著高于对照组(P<0.05);40mg/kg剂量组小鼠血清低密度脂蛋白含量显著高于对照组、80mg/kg剂量组(P<0.05),各组间血清高密度脂蛋白含量无显著差异;80,160mg/kg剂量组小鼠肝脏过氧化氢酶活性显著高于对照组、40mg/kg剂量组(P<0.05),80mg/kg剂量组小鼠肝脏过氧化氢酶活性极显著高于40 mg/kg剂量组(P<0.01);40,80mg/kg剂量组小鼠肝脏Cu-Zn SOD活性显著高于对照组(P<0.05);160 mg/kg剂量组小鼠肝脏抑制羟自由基能力显著低于对照组、40mg/kg剂量组及80mg/kg剂量组(P<0.05);随染毒剂量增加,小鼠肝脏MDA含量增加,但各组间含量差异不显著;随染毒剂量增加,小鼠肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性提高;但各组间活性差异不显著。各组间肝脏H2O2含量、总SOD活性无显著性差异。病理学检查发现,大脑细胞存在噬神经现象,脾脏红髓与白髓的界限不清晰;肺泡壁增厚,局部炎性细胞浸润,曲精小管间的间隙增大,生精细胞排列紊乱、脱落。结果表明:经口连续染毒纳米氧化锌90d能影响雄性小鼠肝脏抗氧化系统,导致小鼠糖、脂代谢紊乱,引起高脂血症,纳米氧化锌对雄性小鼠具有神经毒性及生殖毒性。     

钒对小鼠肌肉中谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

观察钒对小鼠肌肉中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响。用健康小鼠32只,随机分为4组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别混饮10、5、2.5 mg/kg的偏钒酸铵,Ⅳ组为对照组,饮用蒸馏水,持续饮用20 d,利用谷胱甘肽过氧化物酶测试盒测定肌肉中的GSH-PX活性。结果表明,Ⅰ组肌肉中GSH-PX活性降低极显著(P<0.01),Ⅱ组显著降低(P<0.05),Ⅲ组肌肉中GSH-PX活性升高,但差异不显著(P>0.05)。说明偏钒酸铵在5 mg/kg~10 mg/kg剂量范围内可使肌肉中谷胱甘肽过氧化物酶活性降低。     

刺葡萄汁对大鼠血脂代谢影响的研究

通过研究刺葡萄汁对动物血脂代谢的影响,探讨其调节血脂代谢的可能机制。选取6周龄大鼠60只,随机分为6组:空白对照组(基础饲料+生理盐水)、模型对照组(高脂饲料+生理盐水)、阳性药物组(高脂饲料+血脂康胶囊)、刺葡萄汁处理组(高脂饲料+低、中、高剂量刺葡萄汁)。每组10个重复,采用脂代谢紊乱法,试验干预6周。采用全自动血液生化分析仪检测并分析大鼠体质量、血脂指标、血清内谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活力,肝脏组织内抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)及血脂代谢相关基因的相对表达量。结果表明:刺葡萄汁能显著抑制大鼠体质量的增长;所有剂量刺葡萄汁能极显著(P<0.01)降低甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,中剂量刺葡萄汁显著(P<0.05)降低总胆固醇(TC),极显著(P<0.01)升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;所有剂量刺葡萄汁能极显著(P<0.01)升高大鼠肝脏内GSH-PX、SOD的活性,低中剂量极显著(P<0.01)降低肝脏MDA的含量;刺葡萄汁各剂量处理均能上调LCAT、MCD、CPT-1基因的表达,下调ACAT1、DGAT2、UCP2、SREBP-1和FAS基因的表达,低剂量、中剂量刺葡萄汁处理组与模型组相比均达到了显著(P<0.05)或极显著(P<0. 01)水平,高剂量刺葡萄汁处理在DGAT2、CPT-1和SREBP-1基因表达上与模型组相比无显著性差异。因而,低、中剂量的刺葡萄汁具有一定的调节血脂功能。