奶牛临床型乳房炎MRSA新疆流行株耐药基因的检测及MLST分型研究

为了解新疆地区奶牛临床型乳房炎MRSA流行株耐药表型、耐药基因分布及分子分型特征,采用纸片扩散法检测了临床分离的71株金黄色葡萄球菌的耐药表型,并对MRSA进行判定;应用多重PCR方法对MRSA流行株进行耐药基因的检测及MLST分型。结果显示,71株金黄色葡萄球菌中共检出13株MRSA,检出率为18.3%。13株MRSA流行株均检出mecA和linA耐药基因,检出率为100.0%;7株检出tetm耐药基因,检出率为53.8%;4株检出msrB耐药基因,检出率为30.8%;4株检出AacA-Da耐药基因,检出率为30.8%;MLST分型结果发现,13株MRSA可分为6种ST型,分别为ST188、ST9、ST63、ST2700、ST968、ST2373,其中ST9型流行较为广泛。本研究为新疆地区奶牛MRSA流行株的耐药特性及分子特征提供了理论基础,为兽医临床合理用药提供了科学依据。     

奶牛源金黄色葡萄球菌新疆流行株的耐药特性、毒力基因及分子分型

旨在了解引起奶牛乳房炎和子宫内膜炎的金黄色葡萄球菌(SA)新疆流行株的耐药性、毒力基因及其分子流行病学特征。对2014—2016年新疆地区155株SA奶牛临床分离株的耐药表型进行分析,并对耐甲氧西林SA(MRSA)进行鉴定;通过PCR技术对SA的耐药基因、毒力基因进行检测及SCCmec、MLST分子分型。结果在155株SA中检出22株MRSA,检出率为14.2%;MRSA流行株的耐药性明显高于甲氧西林敏感SA(MSSA);不同的毒力基因在MSSA和MRSA中的检出率有所差异;SCCmecⅠ为新疆地区SA主要基因型;MLST分型共检出14种ST型,分别为ST188、ST584、ST9、ST805、ST2373、ST968、ST2139、ST1、ST2700、ST903、ST2454、ST2990、ST63、STX,其中ST1和ST9检出率相对较高,在MSSA菌株中ST9型的检出率最高,MRSA菌株中ST1检出率最高。研究表明,新疆地区奶牛源SA中主要流行株为MSSA,但MRSA耐药性更强,且毒力基因分布多样,ST9为MSSA流行株的主要基因型,ST1-SCCmecⅠ为MRSA流行株的主要基因型。     

反刍动物源产气荚膜梭菌新疆流行株的分离鉴定及分型研究

为了弄清反刍动物源产气荚膜梭菌新疆流行株的生物学特性和分子特征,本研究从新疆不同地区规模化养殖场和屠宰场采集158份牛羊临床病料,进行产气荚膜梭菌的分离培养;通过形态学、生化特性、16S rRNA序列分析对产气荚膜梭菌分离株进行鉴定;利用多重PCR技术扩增产气荚膜梭菌α、β、ε、ι、β2基因,将测序结果与NCBI数据库比对进行新疆流行株的基因分型。结果从158份临床病料中共分离出产气荚膜梭菌67株,形态学、生化和16S rRNA序列分析鉴定结果均为产气荚膜梭菌。毒素基因检测表明,其中α基因检出率为100.00%(67/67),ε基因检出率为17.91%(12/67),β2基因检出率为37.31%(25/67),β、ι基因未检出。毒素基因分型可将产气荚膜梭菌新疆流行株分为A、D型,其中A型占82.09%(55/67),D型占17.91%(12/67),提示产气荚膜梭菌新疆流行株优势型别为A型。本研究为产气荚膜梭菌流行病学研究和防控提供科学依据。     

奶牛源MRSA菌株的分离鉴定和耐药性分析

本研究对部分奶牛场采集的502份隐性乳房炎试验（california mastitis test,CMT）检测呈阳性的奶样进行细菌分离、鉴定,运用多重PCR方法筛选出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）,并对分离出的MRSA用纸片扩散法进行药敏试验,检测其对19种抗菌药物的敏感性。结果显示,分离到细菌的奶样有452份,其中检出葡萄球菌338株,MRSA 89株;MRSA分离株主要对万古霉素、磷霉素、氯霉素和克拉霉素敏感,对青霉素、多黏菌素、大观霉素及头孢他啶具有较强的耐药性。本研究为指导奶牛乳房炎用药、MRSA菌株的快速鉴定及制定MRSA感染的防控措施提供参考。     

我国西北地区奶牛源乳房炎无乳链球菌的青霉素耐药特性研究

为了研究我国西北地区分离的奶牛源乳房炎无乳链球菌的青霉素耐药特性,试验采用药敏纸片法检测82株无乳链球菌对青霉素的耐药性,利用β-内酰胺酶试剂盒测定耐青霉素菌株β-内酰胺酶活性,通过刚果红法定性检测生物被膜的形成能力。结果表明:在82株受试无乳链球菌中,对青霉素耐药的菌株有18株(21.95%),β-内酰胺酶为阳性的有11株(13.41%),生物被膜为阳性的有64株(78.05%);在18株青霉素耐药菌株中,β-内酰胺酶为阳性的有9株(50.00%),生物被膜为阳性的有17株(94.44%),β-内酰胺酶和生物被膜同为阳性的有8株(44.44%);β-内酰胺酶为阳性而生物被膜为阴性的菌株有1株(5.56%),β-内酰胺酶为阴性但生物被膜为阳性的菌株有9株(50.00%)。说明奶牛乳房炎无乳链球菌对青霉素的耐药率较高,无乳链球菌青霉素耐药性受β-内酰胺酶和生物被膜等多种因子共同调控。     

1株奶牛源溶血性曼氏杆菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了对送检奶牛肺脏组织进行病原菌的分离鉴定并研究分离病原菌的生物学特性,试验采用细菌的分离纯化、革兰氏染色镜检、理化试验及16S rDNA序列分析对分离菌进行鉴定,并检测其血清型、多位点序列分型(MLST)、毒力基因、致病性和耐药性。结果表明：该菌株能发酵葡萄糖、乳糖和麦芽糖等,不发酵甘露糖;革兰氏染色镜检显示该菌呈红色的球杆状,为革兰氏阴性菌;16S rDNA序列分析结果显示该菌株为溶血性曼氏杆菌,命名为202102NF,为血清型1型;202102NF的7个管家基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf序列号分别为1,2,1,2,1,2,1,序列型为ST1;202102NF携带LKTA、GCP、POMA、NANH、ADHE、HF等多种毒力基因;小鼠腹腔注射202102NF 18 h内死亡,镜检可见攻毒组的小鼠肝脏和肾脏发生肿大、颜色加深,肺部出现出血斑,肠道有大量炎性渗出物;202102NF对诺氟沙星中介,对多黏菌素B、头孢噻肟、左氧氟沙星等17种抗菌药物均敏感。说明202102NF为血清型1型的溶血性曼氏杆菌,其序列型为ST1,携带多种毒力基因,具有较强的毒...     

3株非典型羊源布鲁菌的基因分型研究

[目的]探讨采用基因分型方法对非典型布鲁菌鉴定的实用性,为非典型菌株的鉴别提供参考。[方法]采用常规鉴定方法和VITEK 2.0全自动细菌鉴定分析系统对菌株进行初步鉴定,利用AMOS-PCR进行种型鉴定,应用多位点可变数目串联重复序列分析方法(MLVA)确定菌株的基因型。[结果]常规鉴定结果显示试验菌株为疑似布鲁菌;VITEK 2.0全自动细菌鉴定系统显示3株试验菌株均为布鲁菌;AMOS-PCR扩增表明试验菌株均为羊种菌,MLVA聚类分析表明试验菌株与羊种2型布鲁菌紧密地聚为一类,属东地中海基因型,并在Panel 2B中发现了新的基因型(4-4-3-7-5),命名为CN2B-45。[结论]MLVA基因分型方法对非典型布鲁菌具有极高的分辨力,是非典型布鲁菌分型鉴别的最佳策略。     

相同耐药谱的11株大肠杆菌的脉冲场电泳分型研究

为了了解同一猪场不同来源具相同耐药谱的11株大肠杆菌之间的同源性,以探讨其耐药流行机制,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对同一猪场不同来源具相同耐药谱的大肠杆菌做染色体DNA分型.结果发现分别来自小猪和环境的2株大肠杆菌通过PFGE分型,属于同一个亚型.初步认为不同来源的大肠杆菌来自不同克隆系,同时在动物环境之间可能存在着耐药性的克隆传播.结果表明,PFGE可作为耐药性流行病学调查的一种研究方法.     

奶牛源坏死梭杆菌四川株分离鉴定及生物学特性分析

从四川规模化奶牛场患腐蹄病的奶牛蹄部分离坏死梭杆菌,采用常规实验室检测方法对其进行分离鉴定,并进行坏死梭杆菌分离条件、保存条件、实验动物致死和感染试验以及药敏试验。结果:不同的分离方法导致坏死梭杆菌的分离率不同,坏死梭杆菌在不同的保存条件下存活时间不同;攻毒后死亡小鼠注射部位形成脓肿;绵羊蹄部感染坏死梭杆菌后蹄部灌脓,形成脓肿;药敏试验表明坏死梭杆菌对林可霉素、洁霉素、强力霉素、阿莫西林、氨苄青霉素、头孢唑啉高度敏感,对头孢拉定、青霉素中度敏感,对卡那霉素、氧氟沙星、四环素、链霉素耐药。     

鸡粪源性沙门氏菌的耐药特性

采自健康鸡群的非重复粪便样品90份,分离沙门氏菌34株,分别对13种抗生素进行药敏试验和4种耐药基因的检测。结果表明,鸡粪源性沙门氏菌对多种抗生素存在耐药性,对氨苄西林耐药性最高,并携带β-内酰胺类耐药基因,为有效防控鸡沙门氏菌病提供依据。     

贵州省PCV2流行株的分型及遗传变异分析

为了解贵州省猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行病学及遗传变异情况,本文收集2012～2016年间16株贵州PCV2流行毒株和NCBI上报道登录的35株PCV2序列作生物信息学分析。分析结果显示,在本次所分析的各PCV2毒株之间核苷酸变异率较大的分别为ORF6(32. 22%)、ORF10(29. 63%)、ORF2(24. 11%)、ORF5(21. 60%)、ORF7(20. 00%);遗传进化表明,贵州省16株PCV2序列中3株为PCV2a型,5株为PCV2b型,8株为PCV2d型;其中PCV2d型已经逐渐过渡成为贵州省的主要流行毒株,且同种基因型之间ORF2所编码的氨基酸序列保守性相对较高。表明PCV2流行毒株之间由于基因型的不同,可能会导致免疫力或致病力的改变。该结果以期为贵州省PCV2的防控、流行病学的研究提供一定的参考。     

六十二株水貂源大肠杆菌分离株耐药表型与耐药基因及克隆菌群分析

为了调查诸城地区某水貂养殖场粪便源大肠杆菌的表观及其分子特征,采集某个水貂养殖场的水貂粪便进行大肠杆菌分离鉴定,对分离鉴定的大肠杆菌进行血清型鉴定和对14种常见抗菌药物的耐药表型鉴定;使用PCR检测耐药基因以及Ⅰ整合子基因盒的携带情况,利用多位点序列分型（MLST）来分析菌株的克隆关系并构建系统发育树来分析相同克隆群菌株的遗传相似性。结果显示,自82份水貂粪便样品分离到62株大肠杆菌,分离率75.61%;大肠杆菌分离株对AMP和TET的耐药率超过90%,多重耐药菌株（MDR）占比为85.48%。PCR检测到5类耐药基因的存在,qnrS检出率最高,为61.29%（38/62）;aaC2、aaC4、sul1和aac（6'）-Ib-cr耐药基因与菌株产生相应的耐药抗性存在一致性（P<0.01）。分离菌株中Ⅰ类整合子可变区域的优势结构为dfrA27-aadA2-qnrA。鉴定出致病性血清型的存在,且对应菌株都具有多重耐药性,优势血清型为O104：H4。分离株中存在33个STs,ST46为优势STs（16.13%）,具有3个主要克隆群,依次为CC10、CC46和CC176;与致病性相关菌株的STs和人源大肠杆菌具有共同的遗传背景。本研究表明,养殖场的水貂受到致病性和多重耐药性大肠杆菌的污染,相同克隆群菌株的耐药基因分布具有多态性,表观特征差异明显。     

4株NDV流行株的分离鉴定、生物学特性及遗传学特性的研究

为研究近年国内的新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）流行株与传统疫苗株（Mukteswar、La Sota及Clone 30）的亲缘关系和遗传演化情况,试验从广东、广西和海南地区患病的免疫鸡群病料中分离鉴定得到4株NDV流行株。通过RT-PCR技术对各毒株的F和HN基因进行扩增、克隆与序列分析,然后与GenBank上发表的NDV序列进行同源性比对、遗传进化树分析,并测定各毒株致病指数。结果显示,本试验中HN-08株的鸡胚半数感染量（EID₅₀）、平均死亡时间（MDT）、脑内致病指数（ICPI）和静脉致病指数（IVPI）分别为10^-8.37/0.2 mL、58.5 h、1.78和2.45,XX-08株分别为10^-6.50/0.2 mL、75.0 h、1.61和2.41,YS-09株分别为10^-7.75/0.2 mL、64.5 h、1.71和2.38,LF-09株分别为10^-7.60/0.2 mL、63.8 h、1.84和2.38。4株鸡源NDV流行株彼此间F和HN基因推导的氨基酸序列同源性在95.8%以上,与鸡源流行株GX11/03、GM株的同源性为96.8%~98.6%,而疫苗株Mukteswar、La Sota及Clone 30株的同源性为86.7%~90.6%,与标准强毒株F₄₈E₉的同源性为88.4%~91.3%。表明4株NDV流行株均为强毒株,与近年来国内流行的GX11/03、GM株有较近的亲缘关系,而与传统疫苗株的关系相对较远。     

六十二株水貂源大肠杆菌分离株耐药表型与耐药基因及克隆菌群分析

为了调查诸城地区某水貂养殖场粪便源大肠杆菌的表观及其分子特征,采集某个水貂养殖场的水貂粪便进行大肠杆菌分离鉴定,对分离鉴定的大肠杆菌进行血清型鉴定和对14种常见抗菌药物的耐药表型鉴定;使用PCR检测耐药基因以及Ⅰ整合子基因盒的携带情况,利用多位点序列分型(MLST)来分析菌株的克隆关系并构建系统发育树来分析相同克隆群菌株的遗传相似性。结果显示,自82份水貂粪便样品分离到62株大肠杆菌,分离率75.61%;大肠杆菌分离株对AMP和TET的耐药率超过90%,多重耐药菌株(MDR)占比为85.48%。PCR检测到5类耐药基因的存在,qnrS检出率最高,为61.29%(38/62);aaC2、aaC4、sul1和aac(6′)-Ib-cr耐药基因与菌株产生相应的耐药抗性存在一致性(P0.01)。分离菌株中Ⅰ类整合子可变区域的优势结构为dfrA27-aadA2-qnrA。鉴定出致病性血清型的存在,且对应菌株都具有多重耐药性,优势血清型为O104:H4。分离株中存在33个STs,ST46为优势STs(16.13%),具有3个主要克隆群,依次为CC10、CC46和CC176;与致病性相关菌株的STs和人源大肠杆菌具有共同的遗传背景。本研究表明,养殖场的水貂受到致病性和多重耐药性大肠杆菌的污染,相同克隆群菌株的耐药基因分布具有多态性,表观特征差异明显。     

新疆塔城地区绵羊细粒棘球蚴流行株基因分型研究

为了探明新疆塔城地区绵羊细粒棘球蚴流行株基因型,根据GenBank公布的12S rRNA基因和CO1基因分别设计特异性引物,对58个绵羊细粒棘球蚴包囊进行PCR检测,再通过CO1特异性引物对检测阳性病料进行PCR扩增、测序及基因分型。通过12SrRNA基因检测发现58份样品均为阳性;对所测得的58条CO1基因序列分析,发现新疆塔城地区绵羊细粒棘球蚴流行株基因型均为G1型,且CO1基因序列存在多态性,为塔城地区绵羊细粒棘球蚴病的防控提供了科学依据。     

新疆和静县绵羊细粒棘球蚴流行株基因分型研究

为了解新疆和静县绵羊细粒棘球蚴病的感染情况及流行株基因分型,对和静县屠宰场的1 115只1岁以上绵羊的细粒棘球蚴病感染情况进行调查和统计,并利用PCR技术对包囊病灶进行了基因分型鉴定。结果表明:有88只绵羊脏器表面发现棘球蚴包囊,感染率为7.89%(88/1115),其中来自农区的感染率为3%(10/331),来自牧区的感染率为9.9%(78/784)。通过线粒体细胞色素氧化酶基因1(mtCO1)特异性引物对剖检的感染病料进行PCR扩增、克隆、测序和NCBI中的Blast比对,发现新疆和静县绵羊细粒棘球蚴流行株基因型均为G1型。本研究为和静县绵羊细粒棘球蚴病的防控提供了科学依据。     

奶牛乳房炎样品金黄色葡萄球菌分离株的基因分型

为了掌握上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌基因型,本文采用ERIC-PCR分型方法,对从患有乳腺炎的奶牛乳汁中分离所得的74株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。结果显示,74株金黄色葡萄球菌可扩增出4~9条带,共分为4个聚类群,亲缘关系相同或相近的菌株占97.7%。发现在同一牛群中的分离株可以是相同的基因型,也可以存在不同的基因型,而不同牛群中的分离株也可属于同一基因型。但总的来说,上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌多为同一基因型,在某个或某些牛群中存在金黄色葡萄球菌的优势基因型,而不同地区、不同环境和条件下同一种病原菌的基因型也存在一定差异,可能存在多个金黄色葡萄球菌基因型。     

耐甲氧西林葡萄球菌牛乳分离株耐药特征和分型研究

为了研究天津地区牛源耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococci,MRS)的耐药特征和分型情况,试验通过选择培养、溶源检测、革兰氏染色、PCR检测、测序分型分析、耐药基因和毒力基因检测、药敏试验对从天津市郊4个区5所规模牛场126头泌乳牛采集的499份乳样进行研究.结果 表...     

11株瘤胃源芽孢杆菌生理学特性研究

试验对已筛选的11株瘤胃源芽孢杆菌的产酶活力、耐酸、耐胆盐和抑菌活性及菌株间相容性进行研究。采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定纤维素酶的活力,涂布平板计数法测定菌株的耐酸性、耐胆盐等特性,牛津杯法测定抑菌活性,滤纸片法进行室内相容性试验。结果显示,菌株T-2、T-3和T-10产纤维素酶的酶活力较高;菌株T-2、T-5、T-7、T-8和T-9表现较强的耐酸能力;菌株T-4、T-5、T-9和T-11表现较强的耐胆盐能力。菌株T-4和T-7对副溶血弧菌的抑菌活性较强,T-7对产气杆菌的抑菌活性最强,T-5、T-9、T-10对大肠杆菌抑菌活性较强,而T-3对藤黄八叠球菌指示菌的抑菌性最强。室内相容性试验结果表明,11株芽孢杆菌部分菌株之间存在颉颃作用,由此筛选出优良菌株的复配组合,抑菌可能的最优复配组合为T-3、T-4、T-5;T-3、T-4、T-10;T-4、T-5、T-10;T-3、T-7、T-10。纤维素酶活力较强时可能的最优复配组合为T-2、T-3、T-5;T-2、T-3、T-10;T-2、T-5、T-10;T-3、T-5、T-6;T-3、T-5、T-10。本试验可为动物饲料的研究和开发提供一定的参考依据。     

东北地区新城疫流行株的分子生物学特性调查

从东北地区发生新城疫(ND)的病鸡、病鸽和产蛋下降鸡分离到19株NDV，对其融合蛋白(F)基因532bp或280bp片段进行了克隆、测序(在GenBank中的登录号为AY208680～AY208698)，并对各株的F基因序列进行了比较。结果，各毒株之间的核苷酸同源性为83．1％～100％，氨基酸同源性为85．5％～100％；系统发育进化树分析表明，其中2株与疫苗株V4同属基因Ⅰ型，为弱毒株；其余17株为强毒株，其中2株为基因Ⅵ型，其余为基因Ⅶ型。表明东北地区目前由3种基因型的NDV毒株(Ⅰ型、Ⅵ型、Ⅶ型)所引发，并以基因Ⅶ型为主。另外，对其中的代表毒株APMV1／chiclierl／China／JL-11／02进行了免疫学试验，结果显示，LaSota疫苗的免疫保护效果不理想，可能是LaSota疫苗免疫鸡群发生ND的主要原因。