蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取研究

[目的]筛选蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取的最佳提取条件。[方法]采用纤维素酶酶解细胞壁,从而溶出更多的蛇足石杉细胞中的物质,并设计正交试验选出酶法提取的最佳提取条件。[结果]蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取的最佳工艺条件为纤维素酶用量0.125 g,酶解pH4.5,酶解温度60℃,酶解时间2.5 h;在此条件下,蛇足石杉中石杉碱甲的提取率为0.589‰;各因素中温度对纤维素酶的酶解效果影响最大。与酸提法相比,酶法提取的石杉碱甲的提取率提高了40.3%。[结论]该方法简便快捷、提取率高,可用来提取蛇足石杉中石杉碱甲。     

液相色谱-串联质谱法快速测定蛇足石杉中的石杉碱甲

[目的]利用液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术建立一种快速测定蛇足石杉中石杉碱甲含量的分析方法。[方法]采用Shim-pack VP-ODS(150 L×2.0 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇与0.1%乙酸水溶液,梯度洗脱15 min,流速为0.3 m L/min,柱温保持在40℃,在质谱正离子模式下用多反应离子监测(MRM)模式来进行定量测定。[结果]在4.38~70.00μg/L的浓度范围内线性良好(r=0.998 9),回收率为96.0%~102.3%,RSD为2.18%;重现性好,变异系数为1.50%;定量检出限为0.438μg/L。[结论]该方法快速灵敏、结果准确、重现性好,对批量检测分析蛇足石杉中石杉碱甲含量有积极的参考意义。     

长柄石杉中石杉碱甲的含量测定

[目的]建立HPLC法测定长柄石杉中石杉碱甲的含量。[方法]色谱条件:色谱柱为ZORBAX Extend-C18(150 mm×4.6 mm,4.5μm),流动相为乙腈-浓度0.02 mol/L磷酸二氢钾(8∶92,V/V),检测波长为310 nm,柱温为25℃,流速为1 ml/min,进样量为10μl。[结果]石杉碱甲在0.046～0.460μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(R=0.999 9),平均回收率为97.45%,RSD为2.70%,平均含量为0.025%。[结论]该方法简单、易行,可用于长柄石杉中石杉碱甲的含量测定。     

蛇足石杉的研究进展

对蛇足石杉的资源分布、生物学特性、化学成分、繁殖技术和栽培种植方面的研究成果进行总结分析。     

草药蛇足石杉研究进展

石杉碱甲是治疗老年痴呆症最好的药物,蛇足石杉的石杉碱甲是石衫植物中含量最高的。本文从蛇足石杉内生真菌、组培灭菌、药用成分分离纯化及含量测定等方面的研究新进展进行综述。     

药用植物蛇足石杉内生菌研究进展

总结了近年来国内外研究成果,从物种多样性、次级代谢产物、生物活性、生物转化和菌株石杉碱甲高产策略5个方面对蛇足石杉内生菌的研究概况进行综述。蛇足石杉内生菌应用前景广阔,其价值有待于深入研究与开发。本文总结的研究方法亦可为其他植物内生菌的研究提供参考借鉴。     

蛇足石杉内生真菌的动态分布

不同的季节分别对药用植物蛇足石杉（Huperzia serrata）根、茎和叶中的内生真菌进行分离,共得到内生真菌98株,根据形态学进行鉴定为12个属,其中Alternaria和Aspergillus在组织中出现的频率较高,为其优势种群。分类研究结果表明,内生真菌在蛇足石杉的组织中分布存在较大差别,具有一定的组织选择性。该研究丰富了内生真菌资源,为该植物内生真菌资源的开发利用提供了理论基础。     

珍稀蕨类植物蛇足石杉药用有效成分研究进展

蛇足石杉由于能治疗阿尔茨海默病(AD)等疾病,因而具有特殊的药用价值,日益受到国内外的关注。本文综述了近年来蛇足石杉药用有效成分如生物碱、三萜化合物等的药理作用及其分离提取工艺,总结了其在医学、基因工程领域的研究进展,为蛇足石杉药用有效成分可持续利用研究提供参考。     

千层塔中石杉碱甲的提取方法选择

［目的］优化选择千层塔中石杉碱甲的提取方法。［方法］采用Hypersil ODS2 C18柱,以乙腈∶磷酸盐缓冲液（pH值2.5）=20∶80（体积比）为流动相,流速1.0 ml/min,用紫外检测器于310 nm波长处检测。用酸提取-氯仿萃取-甲醇定容与酸提取-碱调pH值-过滤上柱的方法进行对比试验,选择千层塔中石杉碱甲的最佳提取方法。［结果］石杉碱甲的浓度在5-55 μg/ml与其峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 7）,RSD=0.95%。采用酸提取-氯仿萃取-甲醇定容的方法比较好,方法简单,快速,检测准确。用该方法进行提取,测得千层塔中石杉碱甲含量为0.40%。［结论］为更准确地测量千层塔中石杉碱甲提供了可靠的依据。     

石杉碱甲提取工艺研究

系统研究了石杉碱甲的提取工艺.系用有机酸浸提、萃取、反萃取、脱色和重结晶等化学分离技术从千层塔中提取、纯化石杉碱甲.结果表明:①pH对石杉碱甲的存在形态有很大影响;②一定酸度下的液液萃取除杂效果理想;③活性炭的用量及吸附条件对除杂效果影响显著;④低温下氯仿的重结晶可得到纯度大于99%的高纯度石杉碱甲.     

蛇足石杉孢子离体繁殖技术研究

蛇足石杉是一种古老的蕨类植物,具有非常重要的药用价值,该试验以蛇足石杉的孢子为外植体进行离体繁殖以提高繁育速度,通过孢子不同接种方式及不同初代、增殖、生根培养基配方比较,最后得出,接种时最佳的接种方式是将1cm大小的孢子叶直接接到培养基上;初代诱导阶段选用MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L配方最好;增值阶段选用MS+KT 1.0mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA3 1.0mg/L配方最好并能降低玻璃化;生根阶段选用1/2 MS+IBA 0.5 mg/L配方效果最好。希望该试验的结论能为整个蛇足石杉快繁提供依据,加速其工厂化育苗。     

不同培养条件对蛇足石杉内生真菌生物量积累及总生物碱含量的影响

为探索现代生物技术生产生物碱的可能,采用定量滤纸过滤后冷冻干燥和经典总生物碱提取方法,研究了光照、温度、摇床转速和pH值对蛇足石杉内生真菌(2-S1和11-′S1菌株)生物量积累及总生物碱含量的影响。结果表明:自然散射光、25℃、pH5和摇床转速100 r/min时,2-S1菌株生物量积累较好;黑暗、25℃、pH5～7和摇床转速0 r/min时,2-S1菌株总生物碱含量较高;黑暗、25℃、pH6和摇床转速0～100 r/min时,11-′S1菌株生物量积累较佳;黑暗、15℃p、H 6和摇床转速0～100 r/min时,11-′S1菌株总生物碱含量较高。     

HPLC法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量

[目的]比较不同产地黄芪中黄芪甲苷含量的大小。[方法]采用高效液相-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）测定黄芪中黄芪甲苷的含量,色谱柱为Agilent C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm, 5μm）;流动相为乙腈-水（40∶60）;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;进样量为5μL。ELSD检测器漂移管温度为100℃;载气压力为200 kPa。[结果]不同产地黄芪中黄芪甲苷含量分别为甘南0.147%、陇西0.117%、岷县0.205%、山西0.182%、张掖0.067%、武威0.045%、庆阳0.097%、渭源0.114%、内蒙古0.087%、新疆0.046%。[结论]不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量差异较大,4个黄芪主产省（自治区）中甘肃产的黄芪中黄芪甲苷含量最高,山西、陕西产的黄芪中黄芪甲苷含量相对较高,新疆产的黄芪中黄芪甲苷含量较低。同一省份中陇西、甘南、岷县、庆阳、渭源县产黄芪中黄芪甲苷的含量较高,而武威和张掖产黄芪中黄芪甲苷的含量偏低。     

蛇足石杉组培快繁体系的研究

通过对蛇足石杉(Huperzia serrata)的组织培养进行系统研究,建立蛇足石杉的快速繁殖体系。结果表明,100 mg/L AAS+0.5 mg/L孔雀石绿组合对蛇足石杉外植体内生菌的抑制效果较好,外植体存活率为20%。蛇足石杉初代培养的最佳培养基为MS+蔗糖20 g/L+琼脂4.59 g/L+IBA 0.05μg/L+KT 1.4μmol/L+谷氨酰胺0.1 g/L+山农一号0.05%+TDZ 0.3 mg/L,诱导率达80%;继代培养中愈伤组织诱导在MS+1.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D的条件下,愈伤组织诱导率可达70%;诱导生根的最佳培养基为1/3MS+1.5 mg/L IBA+2.0 mg/L谷氨酰胺,生根率可达90%。     

蛇足石杉资源分布和种植方面的研究进展

为了合理开发和利用珍稀药用植物蛇足石杉的药用价值,本文对蛇足石杉的资源分布和栽培种植方面的研究成果进行了总结分析,并对今后的研究进行展望。     

石杉碱甲资源可持续利用研究进展

综述了有关石杉碱甲野生资源、人工栽培资源、组织培养资源、内生真菌资源的研究进展,为该资源的可持续利用提供了参考。     

LC-MS/MS法测定野生青风藤中木兰花碱和青藤碱含量

采用LC-MS/MS技术建立野生青风藤中木兰花碱和青藤碱含量的测定方法。以水-乙腈溶液为流动相梯度洗脱,以Kromasil Eternity-5 C18 色谱柱（2.1 mm × 50 mm,5 μm）为分析柱,电喷雾离子源,正离子模式,选择离子监测（SRM）。木兰花碱和青藤碱分别在20.6～412 ng·mL^-1和29.5～590 ng·mL^-1的范围内线性良好,相关系数均大于0.99。方法专属性良好,木兰花碱和青藤碱的平均加样回收率分别为99.09%和 {98.95% },RSD分别为1.99%和1.65%。所建立的LC-MS/MS方法简单、灵敏,适用于野生青风藤中木兰花碱和青藤碱含量的检测。     

蛇足石杉茎尖灭菌方法与组织培养的研究

[目的]研究蛇足石杉组织培养的灭菌方法和培养条件。[方法]以野生孢子体茎尖为外植体,先用不同灭菌液单独或配合使用对外植体进行表面灭菌,将表面无菌外植体转到添加多种抗生素和孔雀石绿的培养基上杀灭内生菌,然后将外植体分别接种到不同的培养基上,筛选茎尖培养的最佳灭菌方法和培养条件。[结果]最佳表面灭菌方法为70%乙醇灭菌40 s,0.1%升汞溶液灭菌8 min,70%双氧水溶液灭菌10 min,培养2周,表面无菌率为63%。适宜的杀灭内生菌方法为表面无菌的外植体在附加0.5 mg/L孔雀石绿和100 mg/L抗生素AAS的培养基上培养4~6周,无菌率达52%。适宜的培养基为1/4MS矿质元素+1/2MS有机元素+2%蔗糖+4.5 g/L琼脂,pH5.8。在此培养基上茎尖外植体可生长出新枝,并可再生根。[结论]建立了蛇足石杉茎尖组织培养的灭菌方法且筛选出适合其生长的适宜培养基,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供实验基础。     

海南蛇足石杉天然居群结构与生境因子研究

【目的】了解海南蛇足石杉居群特征和生长环境,掌握其生长所需的环境条件,为蛇足石杉规范化和产业化栽培研究提供技术支撑。【方法】2009年2～12月,对海南霸王岭自然保护区的蛇足石杉自然居群结构、原生境土壤养分、酸碱度及空气温湿度等进行调查测定。【结果】海南蛇足石杉居群分集中分布居群和分散分布居群,集中分布居群平均密度为83.1株/m2,以幼苗和幼株为主,占居群植株总数的78.2%,其土壤养分含量明显高于分散居群;分散分布居群密度远小于集中分布居群,且幼苗较少;两居群均为酸性土壤;测定期间样地除湿度有较大变化外,温度基本维持在20℃左右。【结论】海南蛇足石杉集中分布居群以幼苗为主,属于更新能力较强的种群;而分散分布居群幼苗较少,更新能力弱。酸性土壤、丰富的土壤养分及20℃左右的气温和90%以上的高湿度环境条件有利于蛇足石杉生长。     

蛇足石杉内生真菌生物学性状及发酵产物研究

研究蛇足石杉内生真菌的生物学性状及其液体发酵产物中植物激素和酶类,结果显示:推测蛇足石杉内生真菌分别属于木霉属、曲霉、峡筒串孢霉属、聚孢霉属;从根毛细胞中发现内生菌菌丝,而在其他部位菌丝都以胞外菌丝状态存在;2株内生真菌能够分泌IAA,3株真菌发酵液具有PPO活性,3株真菌发酵液具有POD活性.