国槐槐角种胚细胞悬浮培养的动力学研究

对国槐Sophora japonica槐角种胚细胞悬浮培养的动力学进行研究,在优化细胞接种量的基础上,分析测定培养周期内不同培养阶段的槐角细胞生长和培养基中碳源、氮源、磷源的消耗,以及细胞的鲜质量、干质量和黄酮产量的变化,从而了解细胞生长、营养消耗与次生代谢产物积累的基本规律,为建立结构化动力学模型奠定基础。结果表明:①初始接种量为40.000 gL－1时,最利于细胞的培养;②细胞的培养周期约为27 d,经过27 d的培养,生物量和黄酮的产量达到最高,分别为9.733 gL－1和53.566 mgL－1,对细胞比生长速率和黄酮比合成速率进行分析,得出黄酮的积累和细胞的生长为部分生长偶联型,在6～12 d呈负相关,12～33 d呈正相关;③基质中的碳源、氮源、磷源都是在0~6 d被迅速消耗,到12 d时消耗量达到总量的80.00%以上。在氮源的吸收上,铵态氮（NH4+）先于硝态氮（NO3－）的吸收。碳源、氮源、磷源的消耗与细胞生长和产物的积累密切相关。图10参25     

柳橙胚愈伤组织耐盐性研究

柳橙(Cirtus sinensis Osbeck)胚细胞无性系(L76-Ⅰ细胞系)的生长量随培养基中NaCl浓度的升高而降低。0.5％NaCl时,生长量约为对照的50％。耐盐临界浓度为2％。巨型细胞数量与NaCl浓度呈负相关。L76—Ⅰ细胞系外渗液电导率与NaCl浓度呈显著负相关。NaCl造成细胞内Na~+积累,K~+、Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)含量减少,并对过氧化物酶同工酶酶谱产生明显的影响;过氧化物酶活性受到抑制,且随NaCl浓度升高,活性相应下降。蛋白质氨基酸分析表明,NaCl对其种类几乎没有影响,8种主要蛋白质氨基酸含量与NaCl浓度呈负相关。过氧化物酶活性和几种主要的蛋白质氨基酸含量可作为抗盐细胞系筛选和评价的生理生化指标。试验所得L86—Ⅱ细胞系的耐盐性比L76—Ⅰ细胞系高。     

小麦幼胚愈伤组织的诱导

为建立小麦(Triticum aestivum Linn.)幼胚的转化体系,获得转基因的小麦再生植株,对小麦幼胚进行愈伤组织诱导。以新春6号和新春9号小麦幼胚为试验材料,选择不同诱导培养基对幼胚进行愈伤组织诱导。结果表明,4种培养基诱导的愈伤组织质量和诱导率有明显的差异,其中MCIMA+KT高于其他3种培养基,新春6号和新春9号诱导率分别为53.80%和52.25%,愈伤组织的质量级别为A级,属于极适宜进行遗传转化状态。SD2培养基上诱导出的2个小麦品种愈伤组织分别为0.002%和0.59%,是不适宜进行遗传转化的培养基。新春6号和新春9号2个基因型诱导的愈伤组织数量和质量之间没有明显差异,适于进行遗传转化。     

玉米成熟胚愈伤组织的诱导

以玉米自交系齐319、郑58、昌7-2、Lx9801和81162的成熟胚为外植体诱导愈伤组织,研究了基因型、外源激素组合、低温处理对愈伤组织诱导的影响。结果表明,基因型对玉米成熟胚愈伤组织诱导的影响显著。在供试的5个基因型中,齐319的愈伤组织诱导率最高,诱导出的愈伤组织质量也较好,为致密、松脆、淡黄色或乳白色,昌7-2不仅愈伤组织诱导率低而且不能产生胚性愈伤组织：在所试验的外源激素组合中,以4,0 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L 6-BA对愈伤组织的诱导最为有效;4℃低温预处理3 d对愈伤组织的诱导具有明显的促进作用。经处理,齐319愈伤组织的诱导率由67.5%提高到78.3%。研究确定了愈伤组织诱导的最佳条件,为建立高效的玉米成熟胚再生体系奠定了基础。     

稻瘟菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织的影响

以生产上大面积推广的杂交水稻恢复系蜀恢527和西南科技大学自育优质高产杂交水稻恢复系“2330”为材料．研究目前四川地区的稻瘟优势菌株稻瘟菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织诱导、生长和分化的影响。结果表明,在优势稻瘟菌株A2中,随着稻瘟菌粗毒素浓度的提高．水稻愈伤组织的诱导率和分化能力显著降低,“2330”的最低诱导率为16．7％,蜀恢527只有12、5％：愈伤组织的致死率随毒素浓度的提高而增加．其最高致死率达到100％。在混合毒素培养基中粗毒素浓度为30％的处理选择效率较合适．但是增加毒素浓度可以进一步提高选择效果和提高得到抗性突变苗的几率。     

小桐子胚愈伤组织耐盐性研究

[目的]筛选耐盐性较强的小桐子新品种。[方法]以小桐子种胚为材料,采用含不同浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和吲哚丁酸(IBA)组合的培养基对其进行愈伤组织诱导,筛选出最佳诱导培养基;在最佳诱导培养基中分别加入0、20、40、60、80、100 mmol/L NaCl对小桐子胚愈伤组织进行诱导,研究胚愈伤组织的耐盐性。[结果]小桐子胚愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+0.1mg/LIBA;胚愈伤组织在含40、60 mmol/LNaCl的培养基上生长状况最佳,当培养基中NaCl浓度达到100 mmol/L时,小桐子胚愈伤组织无法存活。[结论]在MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/LIBA培养基中,小桐子胚愈伤组织具有较好的耐NaCl性。     

小麦胚性愈伤组织诱导研究

研究了不同基因型、低温处理时间、激素和蔗糖浓度及生根条件等对小麦幼胚培养再分化能力的影响。结果表明:在该体系优化的条件下,诱导胚性愈伤组织的频率为80.88 %,胚性愈伤组织分化的频率为97.30 %,分化芽的生根率为90.00 % 以上;筛选出栽培品种(系)6-90可以作为遗传转化的良好受体。     

芦苇胚性愈伤组织生长研究

以MS为基本培养基,添加不同量的蔗糖、琼脂、2,4-D、维生素B、肌醇、酵母粉等,对芦苇胚性愈伤组织的生长条件进行了研究。结果表明,要使芦苇愈伤组织生长良好,培养基中必须含有维生素B类和肌醇。此外,培养基还应具有40 g/L的蔗糖和较低的pH值。而1 mg/L的2,4-D对初始诱导愈伤组织的效果为最佳。     

幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油幼胚为材料,研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2,4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响,结果表明,长轴为5~7.9 mm低温处理18 h的幼胚,诱导胚性愈伤组织的效果最好;使用山梨醇(浓度为3%)为碳源、含氮量低的WPM培养基,胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基;幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2,4-D浓度为2.0 mg/L,培养基中附加5.0 mg/L AgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。     

油茶胚性愈伤组织诱导研究

该研究使用正交设计法，以油茶幼胚作为外植体，研究不同品种、不同基本培养基、不同激素种类及浓度、不同培养条件等因素的组合对油茶愈伤组织诱导的影响。结果表明，油茶胚性愈伤组织诱导最佳配方为：MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L TDZ，诱导率达到100%；单因素对于愈伤组织诱导率具有显著影响为品种>培养基>NAA>TDZ，其他因素对愈伤组织的诱导无显著性影响。     

小麦成熟胚诱导愈伤组织研究

以小麦成熟胚为外植体进行离体培养,研究不同预处理温度、消毒剂、胚的放置方式、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)浓度等因素对愈伤组织的质量和诱导率的影响.结果表明:低温预处理使愈伤组织的诱导率提高,但差别不显著;0.1%HgCl(2)(氯化汞)消毒处理比20%NaClO(次氯酸钠)处理效果要好;将成熟胚盾片向上放置可明显提高愈伤组织的诱导率;培养基添加2 mg/L 2,4-D时,2个小麦品种愈伤组织诱导率均高达80%,但随着2,4-D浓度的升高或降低,2个品种的诱导率均呈现下降趋势,不同品种间诱导率差异不大;在继代培养基中添加0.5 mg/L6-BA和0.3 mg/L ABA可以显著改善愈伤组织的质量,并且能提高胚性愈伤组织的产生率.     

云南松胚性愈伤组织诱导研究

以未成熟云南松种子为研究材料,选择合适的消毒方法,进行合子胚发育状态观测,从外植体类型、采果母树基因型、培养基种类3方面探讨其对胚性愈伤组织诱导的影响,并鉴定了胚性愈伤组织。结果表明：75%乙醇消毒30 s,无菌水冲洗2次,2%氯酸钠浸泡15 min,无菌水冲洗4～5次为种子最佳消毒方案;不同外植体类型对出愈率影响不显著,但对胚性愈伤组织的形成具有极显著影响,取带胚乳的合子胚作为外植体的胚性愈伤组织诱导率可达34.3%,而合子胚作为外植体时诱导率为14.3%;采用14种培养基接种,平均诱导率在2.2%～17.6%之间,其中接种于MLV+2, 4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+肌醇 0.1 g/L,1/2LM+2, 4-D 2.2 mg/L+6-BA 1.1 mg/L +AgNO₃ 3.4 mg/L+肌醇 0.1 g/L,DCR+6-BA 0.63 mg/L +KT 0.61 mg/L+NAA 2.0 mg/L+肌醇 0.2 g/L+麦芽糖15 g/L培养基的胚性愈伤诱导率分别为17.6%、17.6%、16.5%,表明该3种培养基适合于云南松的胚性愈伤诱导;8株云南松优株未成熟带胚乳合子胚的胚性愈伤组织平均诱导率为5.1%～19.4%,最高的是076号云南松,最低的是075号云南松,表明基因型对胚性愈伤组织诱导具有极显著的影响。     

小麦成熟胚愈伤组织诱导研究进展

小麦品种的遗传改良一直倍受重视,利用小麦成熟胚为外植体进行愈伤组织培养越来越受到人们的关注。本文主要对影响小麦成熟胚愈伤组织诱导的诸多因素进行了讨论。     

咖啡胚性愈伤组织诱导研究

以咖啡叶片为外植体材料,开展了灭菌条件筛选、初级愈伤诱导及胚性愈伤诱导的研究。结果表明,1.5%次氯酸钠溶液灭菌30min结合采样前一周用农业杀菌剂处理采样植株为适宜的咖啡叶片外植体的灭菌条件;在细胞分裂素与生长素同时存在的条件下,不同配比激素处理均能诱导出初级愈伤组织,其中,1mg/L2,4-D+2mg/L6-BA处理诱导的初级愈伤组织紧实,水渍化比例较小,是较为适宜的初级愈伤诱导激素组合;相比KT,6-BA具有更好的胚性愈伤诱导效果,细胞分裂素与生长素比例在4∶1左右时,胚性愈伤诱导效率较高。本研究筛选出了咖啡胚性愈伤诱导的适宜条件,并对影响胚性愈伤诱导效率的相关因素进行了探讨,旨在为提高咖啡组培苗繁育效率及促进咖啡优良品种规模化推广应用提供技术支撑。     

油松种胚愈伤诱导的初探

以油松成熟种子为材料,研究了外植体的不同处理方法、不同培养基、激素浓度及光照条件对愈伤诱导的影响。结果表明,在暗培养条件下,以带子叶的种子段为外植体,在DCR NAA 1 mg/L 6-BA 0.2 mg/L培养基上可以获得诱导率较高的愈伤,诱导率为66%。     

抗生素对国槐愈伤组织诱导和生长的影响

由于不同植物不同外植体对抗生素的反应不同,在进行国槐农杆菌介导的遗传转化研究之前,必须对新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)有抗性的抗生素种类及其使用浓度进行探讨.结果表明,卡那霉素在浓度达到150mgL时仍然没有完全抑制国槐叶片和茎段的生长;而遗传霉素在低浓度下对国槐愈伤组织的诱导和生长的抑制作用较卡那霉素明显.随着遗传霉素浓度的增加,愈伤组织形成的频率降低,外植体的死亡率上升.当遗传霉素的浓度超过10mgL时,叶片和茎段愈伤组织的诱导和生长已完全受到抑制.另外,研究发现不同外植体对遗传霉素的敏感程度不同,茎段较强,叶片稍弱茎段的抗生素致死浓度在8～10mgL之间,叶片的抗生素致死浓度8mgL左右.     

荆半夏胚性愈伤组织的诱导

以竹叶型荆半夏叶柄为外植体,研究不同培养基、激素配比、不同叶柄处理方式对愈伤组织诱导的影响。结果表明,单独添加2,4-D或6-BA均能诱导半夏叶柄愈伤组织,但诱导率较低,愈伤组织质量相对较差。叶柄不同部位对愈伤组织诱导有显著影响,叶柄下段适合愈伤组织诱导,黄化处理能提高叶柄愈伤组织诱导的效果。正交试验结果表明,4因素对半夏愈伤组织诱导影响从大到小为2,4-D浓度叶柄位置6-BA浓度蔗糖浓度。从诱导率和愈伤组织质量考虑,取半夏叶柄下段接种于培养基MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+60 g/L蔗糖上进行培养,效果较好。     

核桃子叶胚性愈伤组织的诱导

用正交设计法研究了不同植物生长调节剂处理对核桃子叶胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明,植物生长调节剂影响核桃子叶胚性愈伤组织诱导的因素大小为6-BA>KT>IBA,其最佳诱导培养基为DKW+6-BA 1.3 mg/L+KT 2.2 mg/L+IBA 0.02 mg/L。     

幼胚和花药培养诱导荔枝胚性愈伤组织

以福建荔枝主栽品种元红的幼胚为外植体，优化了离体培养诱导胚性愈伤组织（ＥＣ）的培养基。对ＥＣ的诱导，较高质量浓度的蔗糖（５０ｇ·Ｌ＾－１）和２，４－Ｄ（２￣４ｍｇ·Ｌ＾－１）优于较低质量浓度的蔗糖（３０ｇ·Ｌ＾－１）和２，４－Ｄ（０．５￣１．０ｍｇ·Ｌ＾－１）。ＢＡ和活性炭（ＡＣ）对ＥＣ的诱导有抑制作用。适当的硫代硫酸银（ＳＴＳ）（２９．４μｍｏｌ·Ｌ＾－１）可以抵消ＢＡ的抑制作用。在ＭＳ附加质量     

花椰菜松散型胚性愈伤组织的诱导

本研究采用花椰菜组培苗不同外植体诱导愈伤组织,从中筛选出理想外植体类型;将诱导出的愈伤组织转移到不同培养基上进行松散型愈伤组织的诱导,从中筛选出理想的培养基配方;将诱导出的花椰菜松散型愈伤组织转接到不同的胚性愈伤组织诱导培养基上,找到理想的培养基配方。试验结果表明,选用花椰菜组培苗茎段为外植体,在MS+0.5 mg·L~(-1)BA+1.0 mg·L~(-1)2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上进行愈伤组织诱导,可以获得松散型愈伤组织;在MS+1 mg·L~(-1)BA+1 mg·L~(-1)2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上通过3～4次继代培养,可以诱导出花椰菜松散型胚性愈伤组织。