东方百合遗传转化组培体系的建立

为建立高效稳定的基因转化受体系统,以东方百合"西伯利亚"(Lilium orienta l"Siberia")无菌苗叶片和鳞片叶为外植体,使用不同种类和浓度的生长素与细胞分裂素、蔗糖、抗生素筛选等方法进行了不定芽的诱导分化、试管苗小鳞茎诱导及生根等研究。结果表明:鳞片诱导最佳分化培养基为MS+KT2.0+NAA0.2mg·L~(-1),试管苗小鳞茎诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT2.0 mg·L~(-1)+NAA0.2 mg·L~(-1)+75g·L~(-1)蔗糖,试管苗叶片分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA0.1 mg·L~(-1),试管苗鳞片叶分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+2,4-D 0.2 mg·L~(-1)。生根培养基为1/2MS+NAA0.2 mg·L~(-1)。抗生素敏感性试验表明,百合叶片的卡那霉素选择压为100 mg·L~(-1),鳞片叶为120 mg·L~(-1)。     

东方百合Tiger Woods离体快繁技术体系的建立

为探讨东方百合新品种Tiger Woods的组培快繁技术,以其花器官为外植体获得无菌试管苗,以无菌苗鳞片和叶片为次级外植体诱导不定芽形成,通过扩繁、生根获得完整植株,炼苗后移栽。结果表明:花梗与花丝诱导能力较强,其最适诱导培养基分别为MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.3mg·L~(-1)与MS+6-BA 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.3mg·L~(-1)。无菌苗鳞片、叶片直接诱导产生不定芽的最适培养基为MS+TDZ 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)与MS+TDZ 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1),诱导率为100%和93.33%,诱导系数为4.48和2.88;而上述两种外植体间接诱导愈伤组织的最适培养基为MS+PIC 1.0mg·L~(-1)+TDZ 0.5mg·L~(-1)与MS+PIC 1.0mg·L~(-1)+NAA0.5 mg·L~(-1),愈伤诱导率为93.33%和96.67%,分化系数为4.53和3.63。小鳞茎膨大最适培养基为MS+蔗糖75g·L~(-1),生根最佳培养基为MS+IBA 0.5mg·L~(-1),移栽最佳基质为草炭:蛭石:珍珠岩=1∶1∶1,成活率达91.11%。     

过山蕨组织培养技术研究

为建立过山蕨组培工厂化育苗技术体系,本试验以其可育叶为外植体,以GGB途径进行增殖扩繁,开展了组织培养的深入研究。结果表明:过山蕨可育叶诱导形成GGB的最佳培养基为1/2MS+琼脂6g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+BA 0.1g·L~(-1)+NAA 0.5g·L~(-1)+AC 0.5g·L~(-1);GGB增殖的最佳培养基为1/2MS+琼脂6g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+BA 0.1g·L~(-1)+NAA 0.3g·L~(-1)+AC 0.3g·L~(-1);GGB形成孢子体及完整植株的最佳培养基为1/2MS+琼脂6g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+IBA 0.05g·L~(-1)+AC 0.3g·L~(-1);试管苗移栽28d后,成活率在98%以上。     

乳茄组培快繁技术

以乳茄嫩枝为外植体,研究了不同消毒方法和不同激素对乳茄诱导、增殖及生根等的影响。结果表明,最适合乳茄外植体的消毒方法为70%的酒精消毒10s,0.1%的升汞消毒6min;最佳芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg·L~(-1)+NAA0.05mg·L~(-1);最佳继代增殖培养基为MS+BA1.0mg·L~(-1)+NAA0.05mg·L~(-1)+GA_30.1mg·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1),增殖系数为4.35;最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.5mg·L~(-1)+ABT1 0.3mg·L~(-1),生根率达93.5%以上;组培苗移栽适宜基质为泥炭土∶珍珠岩=5∶1,成活率达96.7%。     

铁皮石斛抗寒品种的快速繁殖

以铁皮石斛抗寒品种茎段为外植体,运用组织培养技术建立铁皮石斛无性快繁体系,筛选出铁皮石斛快繁的最佳培养基。结果显示,以铁皮石斛茎段为外植体诱导原球茎,最佳诱导培养基为MS+6-BA 2 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1)+IBA 0.2 mg·L~(-1),诱导率为66.67%。原球茎最佳分化培养基为MS+6-BA 0.5mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1)+IBA 0.1 mg·L~(-1),苗整齐健壮,叶片大而浓绿。试管苗生根的最佳培养基为1/2 MS+IBA 0.2 mg·L~(-1)+NAA 0.3 mg·L~(-1),生根率为100%。驯化移栽基质为碎砖瓦15%+松树皮50%+刨花25%+羊屎10%。     

东亚唐棣增殖培养条件的优化

以东亚唐棣(Amelanchier asiatica)无菌试管苗为材料,研究了不同基本培养基、激素组合、蔗糖浓度以及琼脂浓度对东亚唐棣增殖的影响。结果表明:最为适合东亚唐棣增殖的培养基组合为MS+6-BA 1.00mg·L~(-1)+NAA 0.05mg·L~(-1)+IBA 0.10mg·L~(-1)+40g·L~(-1)蔗糖+8g·L~(-1)琼脂,增殖系数可达6.83,幼苗叶片生长舒展,苗高和茎的生长量也有了很大提高。试验结果将为东亚唐棣工厂化育苗提供技术指导。     

长筒花试管开花诱导影响因素

以苦苣苔科忌寒苣苔属长筒花(Achimenes‘Kim blue’)试管苗为试验材料,探究了植物生长调节剂种类及质量浓度、无机盐质量分数、不同碳源和琼脂质量浓度对其试管开花诱导的影响。结果表明:花芽诱导培养基中不宜添加细胞分裂素,添加适宜质量浓度生长素NAA与IBA即能诱导开花;增大培养基中P、K元素质量分数有利于花芽诱导;适宜的开花诱导培养基为MS(KNO_3+KH_2PO_4)+NAA0.1 mg·L~(-1)+IBA0.1 mg·L~(-1)+PP_(333)0.05mg·L~(-1),添加蔗糖40 g·L~(-1)+琼脂4 g·L~(-1)。     

亚洲百合试管鳞茎诱导

为进一步优化百合离体培养条件,以亚洲百合鳞片为外植体,研究不同鳞片部位、不同激素配比对亚洲百合试管鳞茎诱导的影响。结果表明:鳞茎内层下部分化率最高,鳞茎中层下部鳞片污染率低,是亚洲百合适宜选取的外植体材料。6-BA 0.5mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)鳞片分化率最高为75.00%,鳞片分化数最高的激素配比为6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1),分化数为3.05。在6-BA和NAA配合使用的情况下,6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)增殖效果最好,增殖数为13.4个。百合试管鳞茎膨大的理想激素浓度配比为MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+PP_(333)4.0mg·L~(-1)。     

金线莲组织培养条件优化对其有效成分含量的影响

为研究金线莲组织培养中有效成分含量积累的有效培养条件,以金线莲试管苗为材料,MS+6-BA2.0mg·L~(-1)+NAA 0.2mg·L~(-1)+KT 1.5mg·L~(-1)+琼脂7g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1)为基础培养基,采用正交设计试验,研究不同有机添加物、不同活性炭含量、不同光质等对金线莲试管苗生长过程中多糖、总黄酮含量积累的影响。结果表明,影响金线莲多糖、总黄酮含量的顺序为光质有机添加物活性炭。光质中蓝光的均值最大,并且蓝光与白光和红光之间具有显著性差异(P0.05);添加物中香蕉泥的均值最大,并且香蕉泥与苹果汁和胡萝卜汁之间具有显著性差异(P0.05);活性炭中浓度为1.0g·L~(-1)的均值最大,与1.5g·L~(-1)活性炭对比有显著性差异(P0.05)。综合3个因素对金线莲组培苗生长状况和多糖、总黄酮含量的影响,优化金线莲有效成分含量累积的培养条件为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1)+KT 1.5mg·L~(-1)+琼脂7g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1)+100g·L~(-1)香蕉泥+1.0g·L~(-1)活性炭+蓝光。     

山药组培快繁技术条件的优化

以‘明淮2号’山药为试验材料,进行山药快繁技术条件的优化研究。结果表明:初代培养的外植体以中部带芽茎段为好。最好的消毒方法是用70%的酒精浸泡10s,0.1%HgCl_2浸泡10min,污染率为15.0%,死亡率为6.7%。初代培养基为:MS+6-BA1.0mg·L~(-1)+NAA0.05mg·L~(-1)+PVP100mg·L~(-1)+VC 500mg·L~(-1)+AC0.5g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1),2周后转入相同配方的固体培养基中,褐化率为36.7%,诱导率为81.7%。增殖培养基为:MS+6-BA2.0mg·L~(-1)+KT1.0mg·L~(-1)+NAA0.05mg·L~(-1)+PP_(333)0.05mg·L~(-1)+琼脂粉4.0g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1),30d后增殖系数为2.97。生根培养基为:1/2MS+NAA0.3mg·L~(-1)+IBA0.2mg·L~(-1)+AC1.0g·L~(-1)+琼脂粉4.5g·L~(-1)+蔗糖20g·L~(-1),30d生根率达91.3%。组培苗炼苗2周,取出用多菌灵浸泡后移栽到草炭土穴盘中,成活率达70%以上。     

文心兰杂种胚培养研究

以文心兰‘红狐狸’与‘百万金币’杂种胚为外植体,采用种胚→原球茎→完整植株→移栽的途径,探讨植物生长调节剂、有机添加物等因素对文心兰杂种胚萌发、原球茎分化、生根等各阶段的影响,建立文心兰杂种胚离体培养及植株再生技术。结果表明,适宜萌发的培养基为花宝+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+CM 150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖20g·L~(-1),培养90~100d后相对萌发率为155.6%,原球茎基本不增殖,利于叶的分化;适宜分化的培养基为花宝+6-BA 0.1mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1),分化率显著最高,为87.8%,添加马铃薯泥能显著提高分化率,促进芽苗的粗壮;将分化的芽苗在花宝+NAA 0.2mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.5g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1)培养基上培养40d后生根率为100%,且根系发达,植株健壮;生根苗炼苗后以水苔作为基质,移栽成活率达91.7%。     

文心兰离体培养技术研究

应用植物离体培养技术研究文心兰增殖技术。结果表明:文心兰原球茎增殖的最佳培养基为MS+6-BA4mg·L~(-1)+NAA0.4mg·L~(-1)+活性炭1.5g·L~(-1)+蔗糖20.0g·L~(-1);最佳的幼苗分化培养基是1/2MS+6-BA1.0mg·L~(-1)+NAA0.5mg·L~(-1)+蔗糖20.0g·L~(-1)+琼脂10.0g·L~(-1)为佳;最佳的壮苗培养基以1/2MS+NAA1.0mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+活性炭2.0 g·L~(-1)+黄瓜汁10%为佳。     

垂枝樱花组培技术研究

为了建立更高效的垂枝樱花的组织快繁体系,以垂枝樱花的当年生带腋芽茎段为外植体,进行了外植体的灭菌、启动、增殖和生根培养,探讨了适宜的外植体灭菌方法与程序,不同培养基配方对启动、增殖、生根培养效果的影响。结果表明:适宜的表面灭菌方法为75%乙醇浸泡30s,0.1%的HgCl2浸泡10min,最后无菌水冲洗5遍,成活率达66.7%;较适宜的启动培养基为1/2 MS+6-BA 0.5mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1),分化达68.3%;适宜的增殖培养基为:MS+6-BA 0.3mg·L~(-1)+NAA 0.05mg·L~(-1)+GA310mg·L~(-1),增殖系数为7.0,平均苗高2.9cm;适宜的生根培养基为:1/2 MS+NAA 1.0mg·L~(-1)+IBA 0.5mg·L~(-1)+蔗糖20g·L~(-1),生根率达93%。     

优良大樱桃砧木吉塞拉5号组培快繁体系构建

为建立优良大樱桃砧木的组培快繁体系,研究以樱桃砧木吉塞拉5号为试验材料,研究了外植体不同取材时间、消毒方法、激素浓度配比、移栽基质等因素对其组培快繁的影响。结果表明,4~5月份是吉塞拉5号取材的最佳时间,污染率最低为8.83%,诱导率最高为87.6%;采用0.1%Hg Cl2外植体消毒8 min效果最好;吉塞拉5号初代培养适宜的培养基是MS+6-BA0.5 mg·L~(-1)+IBA0.2 mg·L~(-1),诱导率最高为83.1%,增值数最高为5.4,继代培养基为:6-BA0.6 mg·L~(-1)+IBA 0.3 mg·L~(-1)效果最好,增值数最高为7.3;在1/2MS+0.2mg·L~(-1)IBA+0.4 mg·L~(-1)IAA生根培养基上,试管苗生根率可达97.2%;试管苗移栽基质配比为蛭石∶基质=1∶2时,成活率最高达97.6%。这些研究结果为进一步建立大樱桃砧木离体快繁体系奠定了基础。     

金线莲的无菌播种和组织培养

金线莲蒴果进行无菌播种成熟期为40~60 d,播种培养基为1/2MS+AC1 g·L~(-1)+香蕉泥100 g·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂5 g·L~(-1)。增殖培养材料顶芽优于茎段,2个品种间增殖培养基激素最适浓度和配比存在差异。适合金线莲生根壮苗培养基为1/2MS+活性炭1 g·L~(-1)+香蕉泥200 g·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂5 g·L~(-1)。     

珍珠彩桂的快速繁殖技术

以珍珠彩桂半木质化枝条为外植体,采用丛生芽诱导途径,建立组培快繁体系。结果表明:最佳启动培养基为木本植物培养基(WPM)+2.0 mg·L~(-1)6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)+0.5 mg·L~(-1)赤霉素(GA3)+6.5 g·L~(-1)琼脂+30 g·L~(-1)蔗糖,启动率高达86.4%;最佳增殖培养基为WPM+4.0 mg·L~(-1)6-BA+2.0 mg·L~(-1)6-糖基氨基嘌呤(KT)+0.5 mg·L~(-1)GA3+6.5 g·L~(-1)琼脂+30 g·L~(-1)蔗糖,继代周期25 d,增殖系数高达5.8;最佳生根培养基为1/2WPM+3.0 mg·L~(-1)3-吲哚丁酸(IBA)+6.5 g·L~(-1)琼脂+30 g·L~(-1)蔗糖,培养30 d后生根,生根率达89.5%。炼苗后,移栽到珍珠岩∶蛭石∶泥炭土体积比为1∶1∶1的混合基质中,成活率达到90%以上。     

茵芋花粉培养效应的优化

为研究茵芋花粉的培养效应,采用蔗糖、硼酸、氯化钙三因素三水平培养基离体培养法,I2—KI、TTC、红墨水等染色法,以及生物荧光显微镜对花粉活力进行观察与检测,筛选有活力的花粉的最适培养基及活力测定方法.结果表明,新鲜茵芋花粉粒呈黄色,花粉离体后逐渐转变为黄褐色.I2—KI、TTC对花粉染色无效;红墨水染色法使有活力的花粉在蓝色滤光片下呈绿色或原色,能够快速有效地检测花粉活力.花粉于25℃的恒温下离体培养4 h开始萌发,至24 h萌发稳定.蔗糖、硼酸、氯化钙三因素三水平培养基离体培养对花粉萌发的互作效应极显著,最优培养基为:15 g·L~(-1)蔗糖+0.05 g·L~(-1)硼酸+0.02 g·L~(-1)氯化钙,萌发率为60.0%;次优培养基为:15 g·L~(-1)蔗糖+0.03 g·L~(-1)硼酸+0.02 g·L~(-1)氯化钙,萌发率为58.0%;第三培养基为:15 g·L~(-1)蔗糖+0.01 g·L~(-1)硼酸+0.01 g·L~(-1)氯化钙,萌发率为50.4%.影响茵芋花粉萌发的主因素为氯化钙,次因素为蔗糖,辅助因素为硼酸.     

16年生大叶相思高效芽诱导、增殖体系研究

【目的】充分利用大叶相思Acacia auriculiformis成年优树的优良性状,提高大叶相思优质苗木扩繁效率、加快其良种选育及推广。【方法】以16年生大叶相思为材料,对外植体消毒方式进行研究,结合外植体及芽诱导培养基的选择,建立大叶相思高效芽诱导体系;对增殖培养基进行筛选,并研究多次继代与增殖倍数的关系。【结果】于8月取当年生枝条第3~5腋芽的茎段(最优外植体),选择φ为0.1%升汞和75%乙醇分别处理18 min和15 s最优外植体,接种于最佳芽诱导培养基MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+蔗糖40 g·L~(~(-1)),芽诱导率为92.00%。增殖培养基为II型培养基(MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)+Ac 0.05 g·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1))时增殖倍数高且稳定,7次继代平均增殖倍数为2.63。【结论】建立的高效组培体系适于大叶相思成年优树的快速扩繁。     

日本红枫组织培养技术研究

对日本红枫茎段组织培养过程中的外植体灭菌、启动培养、增殖培养和生根培养等进行了研究。结果表明:日本红枫外植体经1.0%次氯酸钠灭菌4 min后,成活率达到最高,为78.9%;以MS为基本培养基筛选出适宜日本红枫的启动培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1);在MS培养基中附加0.005 mg·L~(-1)TDZ时,可获得最佳的增殖效果,最佳的生根培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)+琼脂5g·L~(-1),生根率可达97.8%。幼苗经炼苗后移栽,成活率在90%以上。     

杉木不同器官愈伤组织和再生芽的诱导效率

以杉木未成熟胚、种子发芽的下胚轴、子叶以及组培苗茎段为外植体,研究基本培养基、不同激素组合及浓度对杉木愈伤组织的诱导及再生芽发生的影响。结果表明:不同激素组合及浓度对不同外植体的愈伤组织诱导率有显著影响,对未成熟胚愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+2,4-D 2 mg·L~(-1)+6-BA 1 mg·L~(-1)+KT 1 mg·L~(-1),诱导率为92.7%;对子叶、下胚轴愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+6-BA 2 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1)+TDZ 0.01 mg·L~(-1),诱导率分别为97.4%和95.2%;对组培苗茎段愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+2,4-D 1 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1)+TDZ 0.01 mg·L~(-1),诱导率为86.7%;MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT 1.5 mg·L~(-1)是愈伤组织诱导再生芽的最佳培养基,诱导率为80%。质地疏松的愈伤组织其再生芽率最高(65%),单个质地均匀的愈伤组织其再生芽数可达6个;基本培养基对愈伤组织质地形态有较大影响,1/2MS培养基诱导出愈伤组织质地较疏松,MS培养基诱导出的愈伤组织质地均匀且表面可见颗粒状细胞团,DCR培养基诱导出的愈伤组织质地较密。