大熊猫阴道源乳酸杆菌生物学特性研究

用大熊猫阴道源的3株乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius GPV01、Lactobacillus plantarum GPV02和Lactobacillus saerimneri GPV03)作为试验组,用人阴道源3株乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus WAV01、Lactobacillus crispatus WAV02和Lactobacillus plantarum WAV03)作为对照组,进行产过氧化氢能力、耐酸性、耐热性、抗菌活性、药物敏感性及黏附性研究。结果表明:在相同的培养条件下,L.salivarius GPV01、L.plantarum GPV02和L.saerimneri GPV03的产H2O2能力和耐热能力不及L.acidophilus WAV01、L.mcrispatus WAV02和L.plantarum WAV03。L.salivarius GPV01、L.plantarum GPV02和L.plantarum WAV03具有很好的酸耐性,在培养基pH为2~3之间时,3株菌的D值在0.2~0.55之间,其中L.plantarum GPV02的D值最高,达到0.55。同时,6株乳酸杆菌的培养上清液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌均有不同程度的抑制作用,6株乳酸杆菌对3种致病菌的抑制作用远弱于pH 3.5的乳酸。6株乳酸杆菌对多西环素、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、阿莫西林高度敏感,而对四环素和利福平一般敏感。6株乳酸杆菌对链霉素、氧氟沙星、庆大霉素、复方新诺明、环丙沙星、磺胺甲基异恶唑表现出耐药。6株乳酸杆菌均能黏附到Hela细胞上,GPV01、03,WAV01、03对Hela细胞的平均黏附数为18.8~32.8·cell~(-1)。WAV02黏附能力最强(54.75±2.40)个·cell~(-1),而GPV02黏附能力最弱(6.83±0.33)·cell~(-1)。     

1株猪源乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性

微生态制剂是发展绿色养猪业的关键,乳酸杆菌是目前应用的微生态制剂中最重要的有益菌组成成分之一.本研究分离、鉴定并筛选出了1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳酸杆菌,命名为乳酸杆菌L5株.雏鸡安全性试验、抑菌试验和肠黏液糖蛋白黏附性试验结果显示,所筛选的乳酸杆菌L5株具有良好的生物安全性、抑菌性和肠道黏附能力.     

3株犬源乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性研究

从散养的健康成年中华田园犬粪便中分离乳酸杆菌,研究其益生特性,旨在开发犬用益生菌菌株。采用MRS改良培养基从田园犬粪便中分离出3株乳酸杆菌,进行细菌染色形态观察、生理生化试验和16S rRNA基因序列同源性分析,鉴定为唾液乳酸杆菌(L.salivarius)、约氏乳酸乳杆菌(L.johnsonii)和瑞士乳酸杆菌(L.helveticus),分别命名为TCSL1、TCSL2和TCSL3。随后进行体外耐酸试验、抗胆盐试验、细胞黏附试验、抑菌试验和小鼠口服促生长等益生特性试验。结果显示,3株分离菌株能耐受0.6%的胆盐、pH值2.0的酸度;对犬肠黏膜上皮细胞黏附率均在65%以上;其上清液对犬致病性大肠杆菌均有抑制作用;连续28 d饲喂小鼠,未见腹泻和死亡现象,TCSL1和TCSL2能显著增加小鼠体质量(P0.05)。从散养田园犬粪便中分离到的3株乳酸杆菌具有益生特性,可作为犬用益生菌制剂的候选菌株进行开发。     

乳酸杆菌分离鉴定技术概况

乳酸杆菌作为一种重要的益生菌,在动物食品工业中的应用日益广泛。乳酸杆菌的作用及其安全性具有菌株的特异性,菌种的正确使用是保障动物食品安全性的重要基础,而表型和基因型分析是目前乳酸杆菌鉴定的重要技术。本文就乳酸杆菌的分离培养技术及其属、种、株水平上鉴定技术的研究概况进行综述。     

猪源乳酸杆菌的分离鉴定及其发酵培养条件优化

微生态制剂是发展绿色养猪业的关键,乳酸杆菌是目前应用的微生态制剂中最重要的有益菌组成成分之一。分离、鉴定并筛选出1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳酸杆菌,命名为乳酸杆菌L5株。采用单因素法和正交试验设计法对其发酵培养条件进行了优化,发酵培养菌落总数可达8.25×108 cfu/mL。     

藏猪源唾液乳酸杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】对藏猪粪便中乳酸杆菌进行分离、鉴定及生物学特性研究。【方法】采集不同生长阶段藏猪（仔猪、保育猪、母猪）粪便,通过MRS选择性培养基培养、形态学观察、产酸性能测定、细菌生化鉴定及16S rDNA基因测序技术等方法从中分离、鉴定乳酸杆菌,检测藏猪源乳酸杆菌的生长曲线、耐酸耐胆盐特性、溶血活性、体外抑菌效果、益生基因,并对其进行安全性评估。【结果】从藏猪粪便中分离出48株乳酸杆菌,经16S rDNA基因测序和生物学特性分析,最终得到1株藏猪源唾液乳酸杆菌（Lactobacillus salivarius）,该菌株具有较好的产酸性能,产酸量可达（0.070±0.005） mol/L;对高质量浓度胆盐和低pH具有良好的耐受能力;该菌株中检测到肠菌素P2基因（Ent P2）,无溶血活性;体外抑菌结果显示,藏猪源唾液乳酸杆菌对金黄色葡萄球菌（CMCC 26003）和大肠杆菌（CMCC 44102）具有良好的抑菌效果;15 d小鼠灌胃试验结果显示,小鼠的体质量变化和脏器指数与生理盐水组无显著性差异,未观察到菌血症和细菌移位现象。【结论】筛选得到1株安全无毒副作用的藏猪源唾液乳酸杆菌,该菌具有较好的生物学特性,可作为发酵饲料和防治细菌性肠道疾病的潜在益生菌。     

1株黑斑蛙源蛙病毒的分离鉴定及系统进化分析

【目的】为探究四川某养殖场黑斑蛙Rana nigromaculata蝌蚪爆发传染病病因。【方法】通过对患病蝌蚪进行病理学检查与病毒分离,并结合人工感染试验、电镜观察、PCR检测和系统发育分析对分离的病原进行鉴定。【结果】黑斑蛙患病蝌蚪主要临床特征为体表出血、腹部肿胀、腹腔内淡黄色腹水;组织病理学上,患病蝌蚪肝、肾、脾与胰腺等组织器官受损,出现明显的变性与坏死病灶,且在一些病变细胞胞浆内见嗜碱性包涵体。患病蝌蚪组织匀浆接种鲤鱼上皮瘤(EPC)细胞,25℃培养4 d后出现明显细胞病变效应(CPE),TCID50为108 mL–1。用病毒液进行人工感染试验,感病蝌蚪表现出与自然患病蝌蚪相似的症状,死亡率达到80%,证实分离病毒的病原性。电镜观察发现,病毒颗粒为正六边形,有囊膜,对角线直径(135±8) nm,在胞质中呈晶格状排列或游离状。针对蛙病毒MCP基因的PCR检测显示,自然患病蝌蚪、饲养水源以及分离病毒均为阳性,基于MCP全序列的遗传进化分析发现,分离病毒与蛙病毒属病毒的相似性在99%以上,且与蛙病毒属FV3病毒类群聚为同一分支。【结论】证实导致此次黑斑蛙蝌蚪大量死亡的病原为蛙病毒属病毒,将其命名为黑斑蛙蛙病毒(Rana nigromaculata ranavirus,RNRV)。     

一株猪源屎肠球菌的分离鉴定及系统进化分析

为获得性能优良的动物肠源乳酸菌菌种,试验利用MRS琼脂培养基从健康猪肠道及其内容物中分离得到一株乳酸菌CE001。综合形态特征、生理生化特征以及16SrRNA基因序列和pheS基因系统进化分析结果,初步鉴定为屎肠球菌,该菌种保藏于中国普通微生物菌种保藏中心,保藏号为CGMCC9666。     

乳酸粪肠球菌的分离鉴定与系统进化分析

分离鉴定一株疑似乳酸粪肠球菌.通过对表型特性包括培养特性、形态学观察、生化试验等鉴定,同时结合16S rDNA系统进化分析;结果该株革兰氏阳性菌能在10℃和45℃生长.接触酶阴性,发酵葡萄糖产酸不产气,可生长于6.5%NaCl和pH9.6的环境等,16S rDNA系统进化分析与粪肠球菌有最高同源性.结论表明分离株为乳酸粪肠球菌.     

新疆小芦苇青贮中乳酸杆菌的分离鉴定

[目的]筛选新疆小芦苇青贮中优良的乳酸杆菌.[方法]研究将从自制的新疆小芦苇青贮中分离出乳酸杆菌进行鉴定,对鉴定出的菌株进行产酸试验,确定新疆小芦苇青贮中的优势菌株.[结果]试验共分离得到了11株乳酸杆菌,根据<伯杰氏细菌鉴定手册>(第八版)中的种属表述结果,经鉴定2株(Hz2-1和Hz2-2)为戊糖乳杆菌(L. pentosus),2株(Hz3-1和Hz3-2)为植物乳杆菌(L.plantarum),2株(Zar2-8和Zar2-9)为牛粪乳杆菌(L.dung),2株(Zar8-3和Zar8-4)为短乳杆菌(L. brevis),3株(Gsr1-1、Hz1-1和Zar9-4)为德氏乳杆菌保加利亚亚种(L.delbrueckii subsp.bulgaricus).[结论]从不同菌株发酵产酸试验的结果来看,发现Hz2-1,Hz3-1具有较强的产酸能力,pH最低可达3.50,是新疆小芦苇青贮发酵过程中的主要产酸菌株.     

鹌鹑源禽脑脊髓炎病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为探究陕西省咸阳市某鹌鹑养殖厂的鹌鹑发病是否为禽脑脊髓炎病毒引起,采集发病鹌鹑的脑、肝脏、肠道等组织,通过鸡胚传代、RT-PCR扩增、免疫组织化学试验及动物回归试验对病原体进行分离鉴定,并对得到的序列进行同源性及遗传性分析。RT-PCR扩增结果显示,用禽脑脊髓炎病毒(AEV)特异性引物成功扩增得到大小为288bp的目的片段,与参考株的核苷酸序列相似性及氨基酸序列相似性分别为84.9%~99.3%和95.8%~98.9%;遗传进化分析结果表明,分离株与SX株位于同一分支;免疫组化试验结果显示,发病鹌鹑的脑、肝脏、肠道组织切片中存在大量的阳性棕黄色着色区域,而阴性对照没有;动物回归试验结果显示,攻毒组鹌鹑出现典型的禽脑脊髓炎(AE)临床症状,发病率55.1%,病死率100%,病理剖检发现患病鹌鹑的脑组织软化,脑半球轮廓模糊,对照组未见异常。成功分离得到1株鹌鹑源禽脑脊髓炎病毒,命名为AEV XY/Q-1410株,为鹌鹑禽脑脊髓炎的诊断及预防提供理论与技术支持。     

人工饲养大熊猫消化道正常菌群分离与鉴定研究

对陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心的6只大熊猫肠道正常菌群的种类进行分离鉴定研究,结果鉴定出12种细菌,并对其进行了生化试验和致病性性试验,致病性性试验发现四联消化链球菌、鼠李糖乳杆菌、短乳杆菌、耐久肠球菌、两歧双歧杆菌对小白鼠无致病性,而面包杆菌、奇异菌及多黏芽孢杆菌可致小白鼠死亡。     

兔源巴氏杆菌分离与鉴定

【目的】研究引起石河子地区某养兔合作社兔不明原因大量死亡的主要病原菌及其耐药性。【方法】采用常规细菌分离培养、形态学观察、生化试验、PCR鉴定及荚膜血清分型、致病性试验、药敏试验明确主要致病菌及其生物学特性。【结果】引起此次疾病的主要病原为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,且具有较强的致病性,并伴有大肠杆菌混合感染;临床常用的30种抗菌药物中较为敏感的是第三代头孢菌素类如头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟,部分喹诺酮类抗生素如氧氟沙星、左氟沙星以及氟苯尼考等敏感,对其余20余种药物中度敏感或耐药,分离菌株呈现出不同程度的多重耐药性。【结论】荚膜血清A型巴氏杆菌是引起石河子地区兔大规模死亡的主要病原菌,且对临床常用抗菌药物耐药严重;充实了巴氏杆菌在引起该地区引起多种动物疾病的研究基础,为指导临床科学用药和防控提供依据。     

鸡源肠道杆菌的分离与鉴定

1989～1992年从兰州市及其邻近县6个鸡场获得送检病料766份,对获得纯培养的279株肠道杆菌进行了生理生化和初步的血清学试验.结果表明,70株为沙门氏菌,其中绝大多数(63株)是鸡伤寒-白痢沙门氏菌;179株是大肠埃希氏菌;另有30株未被分类.L种鸡场分离的大肠埃希氏菌对1～1.5月龄公鸡有致病力。     

貉源李氏杆菌的分离与鉴定

采用常规细菌分离方法从病死貉的脑、肝脏、肾脏分离培养得到6株菌株,对分离菌株进行形态特征、培养特性观察及生化特性鉴定,结果确诊分离菌株为李氏杆菌。以该菌株接种家兔,接种后第7d开始出现死亡,并从家兔的肝脏、脾脏检测出与接种细菌一致的菌株,证实了李氏杆菌对家兔亦有一定的致病性。药敏试验结果表明,该分离菌对卡那霉素、头孢噻肟钠、万古霉素、庆大霉素、丁胺卡那霉素、氨苄青霉素、链霉素敏感;必要时应筛选出具有协同作用和累加作用的抗生素,以便临床上联合应用抗生素,提高治疗李氏杆菌病的疗效。     

前后盘吸虫梅花鹿源分离株的种类鉴定及遗传进化分析

旨在研究温州地区的梅花鹿源前后盘吸虫的种类和遗传进化,利用形态学和分子生物学方法,对虫体样本进行染色显微镜观察及pcox1和pnad1序列的PCR扩增和序列分析。形态学鉴定结果表明,前后盘吸虫梅花鹿源分离株在外部形态、大小以及内部组织器官与鹿前后盘吸虫(Paramphistomum cervi)相近。序列比较分析结果表明,3株前后盘吸虫梅花鹿源分离株样本的pcox1和pnad1序列完全一致,扩增产物长度分别为446和505bp,与GenBank中鹿前后盘吸虫(KT198987)同源性最高,分别为98.2%和97.7%。遗传进化分析表明,3株前后盘吸虫梅花鹿源分离株与鹿前后盘吸虫位于同一分支。表明,分离的虫株在形态学和遗传进化分析上均与鹿前后盘吸虫具有高度的一致性,提示获得的前后盘吸虫梅花鹿源分离株为鹿前后盘吸虫。     

大熊猫肠道大肠杆菌的分离、鉴定及其耐药性分析

本实验分离大熊猫粪便样品中大肠杆菌,利用形态学和分子生物学方法鉴定菌株,采用药敏纸片扩散法(Kirby-Bauer)进行常用抗生素耐药性试验分析。结果表明,从抗生素大类来比较,耐药率依次为:四环素类(55.6%)>青霉素类(26.7%)>磺胺类(18.9%)>喹诺酮类(10%)>头孢类(7.8%)>氨基糖苷类(1.1%)>单环内酰胺类(0)、碳青霉烯类(0)。大肠杆菌对四环素的耐药率最高,达到55.6%;对头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、亚胺配能及美罗配能等敏感,耐药率为0。其它抗菌药物耐药率依次是:阿莫西林(26.7%)>磺胺复合物(18.9%)>氨苄西林/舒巴坦(17.8%)>复方新诺明(11.1%)>萘啶酸(10%)>头孢噻吩(7.8%)>阿莫西林/克拉维酸(3.3%)>庆大霉素(2.2%),共产生了33种耐药谱,大部分菌株至少耐1种药物,TET为优势耐药谱(18/90),其次为TET、AML(10/90),多重耐药较普遍(40/90),个别菌株耐药谱达到6种,此研究为大熊猫肠道疾病的合理、科学治疗奠定了基础。     

一株分离自水稻种子的真菌的鉴定及系统进化分析

真菌病害是制约水稻高产稳产的重要障碍因素之一.为了研究水稻种子中真菌发生情况,对分离自水稻种子中的一株真菌进行系统发育分析及功能评价.在形态学鉴定基础上,以通用引物ITS1/ITS4对目标真菌序列进行PCR扩增、序列对比分析、邻接法(NJ)构建系统发育树.通过菌落培养特征、孢子形态特征观察,分离菌株S-51的形态特征与...     

猪源性新城疫病毒的分离与鉴定

从猪身上分离到NDV AS株,其HA和HI效价均为1∶5 124,ELD50/0.1 ml为10-6.0。     

犬蝠源呼肠病毒的分离与鉴定

 【目的】从野生蝙蝠体内分离病毒，为开展蝙蝠的病原监测奠定基础。【方法】从广东省韶关采集了30份野生犬蝠样品，研磨后接种Vero E6细胞，从中分离到2株病毒，对其中一株病毒进行研究，使用生物学与分子生物学方法确定其分类学地位。【结果】该毒株在Vero E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变，表现为细胞内颗粒增多，细胞收缩、变圆，最后细胞从瓶壁脱落。反复冻融3次后，收集细胞及培养液，电镜观察发现，病毒粒子无囊膜，有双层衣壳，呈正二十面体对称，将病毒命名为Bat/China/2003（B/03）。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞，不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞。理化特性试验表明该病毒对氯仿有抵抗力、能耐受pH3.0的酸性环境、50℃水浴1 h病毒丧失感染能力、1 mol•L-1 MgCl2能提高病毒对热的抵抗力。病毒基因组经琼脂糖凝胶电泳分大、中、小3个区段。用哺乳动物呼肠病毒特异性引物进行反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR），扩增得到了预期大小的片段。测序结果经NCBI BLAST分析表明，与呼肠病毒科正呼肠病毒属的Ndelle virus核苷酸同源性最高为91.2%。用DNAMAN Multiple Alignment进行序列同源性分析，与哺乳动物呼肠病毒血清1、2、3型的代表株T1L，T2J，T3D的核苷酸同源性分别为89.9%、76.9%、89.9%。【结论】由以上结果推断该病毒为呼肠病毒科的成员。