响应面法优化双孢蘑菇菌株W38液体菌种培养的研究

利用Design-Expert软件,在前期单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman设计和中心组合设计对双孢蘑菇新菌株W38液体菌种培养基及培养条件进行优化。根据响应面分析法建立模型并确定其最佳的培养基和培养条件为:小米粉49.90g·L~(-1),黄豆粉13.60g·L~(-1),KH_2PO_4 2.00g·L~(-1),MgSO_4·7H_2O 1.067 5g·L~(-1),初始pH 6.5,发酵时间7d,发酵温度24℃,摇瓶转速180r·min~(-1)。在此条件下,双孢蘑菇菌株W38液体菌种的菌丝体每100mL生物量可达2.35g,与初始培养条件下的菌丝体生物量相比提高了3.05倍,平均菌丝生长速度加快了14.7%。     

不同蜜环菌属真菌胞外多糖生物功能的研究

以11种蜜环菌为研究对象,应用深层液体发酵获得胞外多糖,采用硫酸-苯酚法确定多糖的得率,利用肿瘤细胞HepG2共培养的方法研究了胞外多糖抑制肿瘤增殖的活性,通过铁离子还原能力法(FRAP)评价蜜环菌胞外多糖的总抗氧化能力。研究结果表明,各品种间胞外多糖的得率存在着显著差异,从0. 34 g·L~(-1)到9. 31g·L~(-1)不等,体外抗肿瘤研究显示品种间差异较为显著。其中,黄盖蜜环菌胞外多糖的活性最高,其半抑制质量浓度IC50仅为253. 6 mg·L~(-1),抗氧化检测结果显示秦氏蜜环菌的胞外多糖活力最高,可以达到976. 4μmol·g~(-1)。结合发酵多糖产量发现,北方蜜环菌胞外多糖是各品种中抗肿瘤功效显著的优势品种,而芥黄蜜环菌则是抗氧化功效的优势品种。     

猪苓菌丝体液体培养基配方的筛选研究初报

猪苓菌丝体液体培养是工业化生产猪苓多糖的有效途径。为了寻求高效的猪苓菌丝体液体培养工艺,对猪苓菌丝体液体培养基的配方进行了筛选研究。结果表明：以“葡萄糖＋马铃薯煮汁＋蜜环菌煮汁”、“麦芽糖＋蜜环菌煮汁＋麦麸煮汁”2种配方培养的猪苓菌丝生长最好,而成合培养基的猪苓菌丝长势最差。     

液体培养富硒蜜环菌的研究

富硒食用菌因具有重要的生物学功效,成为近年来的研究热点。以蜜环菌生物量、多糖含量、硒含量为指标,研究了蜜环菌的培养方式、最佳C源、亚硒酸钠最佳添加时间和浓度。结果表明,液体状态下静置培养要优于摇瓶培养,最佳C源为麦芽糊精。蜜环菌AY3菌株接种后静置培养第8天为最佳的亚硒酸钠添加时间,最佳添加浓度为150 mg·L~(-1),在此条件下的生物量为18.92 g·L~(-1),多糖含量7.8 mg·g~(-1),硒含量为103 mg·kg~(-1),研究结果为后续蜜环菌硒多糖制备提供技术参数。     

大球盖菇液体菌种培养基碳氮源及培养条件的优化

为了促进大球盖菇液体菌种扩繁,采用单因素方差分析和正交试验的方法,对菌体培养的碳源、氮源和培养条件进行优化,通过测定大球盖菇菌丝球生物量指标,研究不同碳氮源和不同培养条件对大球盖菇生长的影响。结果表明:大球盖菇最适培养基为葡萄糖20 g·L~(-1),玉米粉10 g·L~(-1),麸皮5 g·L~(-1),KH_2PO_(4 )3 g·L~(-1),MgSO_(4 )0.2 g·L~(-1)。优化后,大球盖菇菌丝体生物量增加了174%,最佳培养条件是pH6,转速120 r·min~(-1)及培养温度25℃。培养基和培养条件的优化可以显著促进大球盖菇菌丝的生长。     

素心建兰无菌播种快繁技术研究

以素心建兰种子为外植体,通过基本培养基(1/2MS、花宝1号、改良MS)、植物激素(6-BA、TDZ、NAA)等关键因子对素心建兰种子萌发、根状茎增殖、分化等各培养阶段影响的试验,探讨了素心建兰无菌播种快繁关键技术。结果表明:种子无菌萌发较适宜的培养基配方为1/2MS+6-BA3.0 mg·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)+水解乳蛋白2.0g·L~(-1)+活性碳1.0g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1);根状茎较适宜的增殖培养基配方为改良1号+TDZ 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)+活性碳0.5g·L~(-1)+白糖30g·L~(-1),45d增殖系数高达7.3;根状茎接种于改良1号+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+白糖30g·L~(-1)培养基上分化培养45d后,再转入1/2MS+IBA 0.5mg·L~(-1)+活性碳0.5g·L~(-1)+白糖20g·L~(-1)培养基上培养60d,可诱导形成完整植株,芽分化率为86.3%,生根率为100.0%。     

蛹虫草工厂化生产栽培基质优化

为促进蛹虫草工厂化生产的发展,以虫草子座干重为指标,采用正交设计法优化蛹虫草固体培养基质。结果表明:蛹虫草工厂化生产最佳培养基质配方为小麦90%、豆粕10%,营养液为葡萄糖15g·L~(-1)、蛋白胨10g·L~(-1)、KH_2PO_41g·L~(-1)、MgSO_4·7H_2O 1g·L~(-1)、VB11g·L~(-1)、柠檬酸铵1g·L~(-1),料液比为1.0∶1.6。应用该配方,每一标准盆虫草子座干重产量可达62g以上。     

花叶金线莲茎段诱导植株再生培养技术研究

以花叶金线莲茎段为外植体,采用正交设计,探讨基本培养基(MS、B_5、改良MS)、植物生长调节剂(TDZ、6-BA、KT、IBA)等对其茎段诱导、增殖及生根等关键环节的影响,以期建立花叶金线莲茎段诱导植株再生培养技术。结果表明:各试验因素对花叶金线莲茎段诱导丛生芽影响的主次关系为基本培养基KT6-BATDZ;筛选出适宜的增殖培养基配方为改良MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+KT 0.5mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+白糖30.0g·L~(-1)+琼脂粉3.0g·L~(-1)+卡拉胶3.0g·L~(-1),60d平均增殖系数达4.58;筛选出适宜生根的培养基配方为改良MS+IBA 0.3mg·L~(-1)+活性炭0.5g·L~(-1)+白糖20g·L~(-1)+琼脂粉3.6g·L~(-1)+卡拉胶3.6g·L~(-1),培养60d,生根率为100.0%。     

金线莲的无菌播种和组织培养

金线莲蒴果进行无菌播种成熟期为40~60 d,播种培养基为1/2MS+AC1 g·L~(-1)+香蕉泥100 g·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂5 g·L~(-1)。增殖培养材料顶芽优于茎段,2个品种间增殖培养基激素最适浓度和配比存在差异。适合金线莲生根壮苗培养基为1/2MS+活性炭1 g·L~(-1)+香蕉泥200 g·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂5 g·L~(-1)。     

生防枯草芽孢杆菌210发酵工艺优化

采用响应面法,优化抗真菌的枯草芽孢杆菌210的发酵工艺,提高芽孢产量。结果显示,影响芽孢产量最主要的3个因素为玉米粉、蛋白胨和KH_2PO_4用量,最佳发酵培养基配方为:玉米粉10.75 g·L~(-1)、黄豆粉9.00 g·L~(-1)、蛋白胨6.97 g·L~(-1)、KH2PO40.66 g·L~(-1)、Na Cl 4.00 g·L~(-1)、MgSO_4·7H2_O 0.60 g·L~(-1)、Ca Cl_23.00 g·L~(-1)、MnSO_4·H_2O 0.60 g·L~(-1)。基于优化配方通过单因素优化试验,确定最佳发酵条件为:培养温度31℃、装液量30 m L·250 mL~(-1)、接种量4%。枯草芽孢杆菌210在上述优化后的条件下培养,芽孢产量达到1.64×10~(10)cfu·mL~(-1),较优化前提高6.5倍。     

山药组培快繁技术条件的优化

以‘明淮2号’山药为试验材料,进行山药快繁技术条件的优化研究。结果表明:初代培养的外植体以中部带芽茎段为好。最好的消毒方法是用70%的酒精浸泡10s,0.1%HgCl_2浸泡10min,污染率为15.0%,死亡率为6.7%。初代培养基为:MS+6-BA1.0mg·L~(-1)+NAA0.05mg·L~(-1)+PVP100mg·L~(-1)+VC 500mg·L~(-1)+AC0.5g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1),2周后转入相同配方的固体培养基中,褐化率为36.7%,诱导率为81.7%。增殖培养基为:MS+6-BA2.0mg·L~(-1)+KT1.0mg·L~(-1)+NAA0.05mg·L~(-1)+PP_(333)0.05mg·L~(-1)+琼脂粉4.0g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1),30d后增殖系数为2.97。生根培养基为:1/2MS+NAA0.3mg·L~(-1)+IBA0.2mg·L~(-1)+AC1.0g·L~(-1)+琼脂粉4.5g·L~(-1)+蔗糖20g·L~(-1),30d生根率达91.3%。组培苗炼苗2周,取出用多菌灵浸泡后移栽到草炭土穴盘中,成活率达70%以上。     

外源茉莉酸甲酯对灵芝多糖及灵芝酸含量的影响

[目的]探寻外源茉莉酸甲酯对灵芝多糖及灵芝酸含量的影响。[方法]用含有不同浓度的茉莉酸甲酯在不同的发酵时间对液体培养基中的灵芝进行诱导培养。[结果]在发酵培养的第4天,添加外源茉莉酸甲酯浓度为50μmol·L~(-1)时,灵芝菌丝体和菌液中灵芝多糖含量最高,菌丝体中灵芝多糖含量为398.98mg·g~(-1),是对照的1.83倍;菌液中的灵芝多糖含量为4.20g·L~(-1),是对照的1.56倍。添加外源茉莉酸甲酯浓度为100μmol·L~(-1)时,灵芝菌丝体及菌液中灵芝酸含量最多,灵芝菌丝体中灵芝酸为50.02 mg·g~(-1),是对照的1.93倍;菌液中灵芝酸含量为7.10mg·L~(-1),是对照的2.21倍。[结论]说明外源茉莉酸甲酯能够有效的促进灵芝多糖和灵芝酸的合成。     

粘红酵母RG-31产虾青素发酵条件优化

以粘红酵母RG-31为研究对象,通过单因素试验和正交试验对其合成虾青素的培养基和发酵条件进行初步的研究。试验结果表明:粘红酵母RG-31最适培养基为葡萄糖10 g·L~(-1)、牛肉膏3 g·L~(-1)、酵母粉5 g·L~(-1)、K_2HPO_4 1.5 g·L~(-1)、MgSO_4 0.5 g·L~(-1)、CaCl_2 0.2 g·L~(-1);最适培养条件为pH 6,培养温度28℃,转速240 r·min~(-1),培养时间60 h后,虾青素含量为7.41μg·mL~(-1),是优化前(2.84μg·mL~(-1))的2.61倍,生物量为20.5 g·L~(-1),是优化前(10.8 g·L~(-1))的1.90倍。     

盐胁迫对热带假丝酵母菌株GY8降酚性能的影响

本文旨在检测不同浓度氯化钠胁迫对高效降酚菌热带假丝酵母菌株GY8降解苯酚性能的影响。通过在含有0.1,10,25,50,100 g·L~(-1)氯化钠的无机盐培养基中培养GY8菌,检测不同氯化钠浓度胁迫对菌OD_(600)值、降解苯酚速率,降酚关键酶的活性的影响。结果表明,GY8菌在含0～100 g·L~(-1)盐浓度培养基中均可生长,且都有降酚活性。但随着盐浓度增加,GY8菌OD_(600)值和降酚速率及邻苯二酚1, 2-双加氧酶酶比活力均呈现抑制趋势,苯酚羟化酶的活性先增强后抑制。当氯化钠浓度超过25 g·L~(-1)时,抑制作用明显增强。通过本研究可以得出GY8菌可耐受0～100 g·L~(-1)氯化钠,且氯化钠对GY8降酚活性具有梯度抑制作用。     

激素对冰灯玉露不定芽和不定根分化的影响

为了建立冰灯玉露组培快繁体系,以冰晶玉露的叶片为外植体,在含有不同激素的培养基上进行了不定芽诱导、茎的伸长培养和不定根的诱导。结果显示:在MS+BA 1mg·L~(-1)+IAA 0.5mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)分化培养基上培养60 d后,可以100%诱导出不定芽,每株产生的不定芽数量为30个;在MS+BA 0.25 mg·L~(-1)+IAA 0.5 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)茎伸长培养基上培养30 d后,茎长的最高,茎平均长度为3.4 cm;在MS+NAA 0.2mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)的生根培养基上培养30 d后,生根率100%,单株平均生根数最高(6.4个),根系粗壮(平均根长2.4 cm)。     

一组耐低温纤维素降解菌系培养条件优化及产酶分析

针对东北寒区冬季沼气发酵水解效率低下问题,从土壤中定向筛选一组耐低温纤维素降解菌系LTF-27。利用间歇试验,通过Box-Benhnken中心组合设计和响应面分析法(RSM),优化其稻秆水解培养条件。反应装置有效体积300 mL,底物唯一碳源为2 g·L~(-1)水稻秸秆,温度控制在(17±1)℃、摇床转速100 r·min-1,培养13 d。通过单因素和中心组合试验确定主要影响因素及优化组合为水稻秸秆2 g·L~(-1),(NH_4)SO_41.5 g·L~(-1),NaCl 5 g·L~(-1),酵母浸粉1 g·L~(-1),MgSO_40.057 g·L~(-1),CaCO_31.49 g·L~(-1),K_2HPO_40.75 g·L~(-1)。优化后低温条件下稻杆降解率可达64.51%,提高10.2%。利用分光光度法对复合菌系LTF-27产酶结果分析表明,该菌系可将纤维素降解为简单糖完整纤维素酶系,酶系中3种关键酶产酶过程相似,β-葡萄糖苷酶酶活(最大值3.4 IU·mL~(-1))较内切葡聚糖酶活(Cx)(最大值8.5 IU·mL~(-1))、外切葡聚糖酶活(C_1)(最大值7.9 IU·mL~(-1))活性低。     

秋石斛离体快速繁殖技术研究

以秋石斛‘三亚阳光’幼芽为外植体,采用丛生芽诱导途径,并利用正交设计法,探讨基本培养基(花宝1号、改良1#、改良2#、改良3#)、植物生长调节剂(6-BA、NAA、IBA)、白糖等对其丛生芽诱导、增殖、生根等关键环节的影响,以期建立秋石斛‘三亚阳光’丛生芽组培快繁技术。结果表明:各试验因素对秋石斛丛生芽增殖影响的主次关系为基本培养基6-BANAA白糖;筛选出丛生芽适宜的增殖培养基配方为改良2#+6-BA 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.2mg·L~(-1)+白糖30.0g·L~(-1)+琼脂粉3.0g·L~(-1)+卡拉胶3.0g·L~(-1),50d平均增殖系数达6.25;筛选出适宜生根的培养基配方为改良3#+NAA 0.3mg·L~(-1)+IBA 0.5mg·L~(-1)+活性炭0.5g·L~(-1)+香蕉泥100.0g·L~(-1)+白糖20g·L~(-1)+琼脂粉3.6g·L~(-1)+卡拉胶3.6g·L~(-1),生根率为100.0%;试管苗移栽60d成活率达96.5%。     

文心兰杂种胚培养研究

以文心兰‘红狐狸’与‘百万金币’杂种胚为外植体,采用种胚→原球茎→完整植株→移栽的途径,探讨植物生长调节剂、有机添加物等因素对文心兰杂种胚萌发、原球茎分化、生根等各阶段的影响,建立文心兰杂种胚离体培养及植株再生技术。结果表明,适宜萌发的培养基为花宝+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+CM 150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖20g·L~(-1),培养90~100d后相对萌发率为155.6%,原球茎基本不增殖,利于叶的分化;适宜分化的培养基为花宝+6-BA 0.1mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1),分化率显著最高,为87.8%,添加马铃薯泥能显著提高分化率,促进芽苗的粗壮;将分化的芽苗在花宝+NAA 0.2mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.5g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1)培养基上培养40d后生根率为100%,且根系发达,植株健壮;生根苗炼苗后以水苔作为基质,移栽成活率达91.7%。     

淡水砂梨离体快繁技术研究

为建立淡水砂梨离体培养体系,以淡水砂梨品系香水梨为试验材料,以MS为基本培养基,研究生长调节剂不同组合和浓度对腋芽诱导、增殖培养的影响,以及不同生长调节剂的种类和浓度对生根培养的影响。结果表明,香水梨腋芽诱导的最佳培养基配方为MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1),诱导率为71.7%;增殖最适宜的培养基配方为MS+6-BA 3.0mg·L~(-1)+NAA 0.20mg·L~(-1),增殖系数为3.2;生根培养基配方为1/2MS+IBA 0.3mg·L~(-1),香水梨生根率为63.3%。研究表明MS为基本培养基添加生长调节剂适于淡水砂梨的离体快繁。     

盆花文心兰丛生芽组培快繁技术研究

以文心兰‘豹斑宝石’花梗为外植体,采用丛生芽诱导途径,利用正交设计法,探讨基本培养基(MS、花宝1号、改良1号、改良2号、改良3号)、植物生长调节剂(6-BA、NAA、IBA)、水解酪蛋白(CH)等对其丛生芽诱导、增殖、生根等关键环节的影响,以期建立文心兰‘豹斑宝石’丛生芽组培快繁技术。结果表明:各试验因素对文心兰丛生芽增殖影响的主次关系为6-BA基本培养基NAACH;筛选出丛生芽适宜的增殖培养基配方为改良1号+6-BA 3.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+CH 0.5g·L~(-1)+白糖30g·L~(-1)+琼脂粉5.0g·L~(-1),50d平均增殖系数达5.8;筛选出适宜生根的培养基配方为改良3号+IBA 0.5mg·L~(-1)+活性碳0.5g·L~(-1)+白糖20g·L~(-1)+琼脂粉3.6g·L~(-1)+卡拉胶3.6g·L~(-1),生根率为100.0%;试管苗移栽6个月成活率达96.8%。