猪流行性腹泻病毒血清IgG间接ELISA检测方法的建立

以大肠杆菌表达系统制备的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中和抗原S1D(1μg/mL)每孔100μL进行包被,利用HRP-兔抗猪IgG(1∶20 000)建立了检测猪血清中抗PEDV IgG的间接ELISA方法。阴性判断临界值(M+2SD)为0.632,批内和批间检测的平均变异系数分别为2.3%和3.1%,该方法与商品化的PEDV抗体间接ELISA检测试剂盒同时检测50份临床血清样品,均为阳性,上述结果表明该方法可用于PEDV血清IgG的临床检测。     

猪流行性腹泻病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgG抗体的间接ELISA方法,以PEDV重组N蛋白和纯化全病毒为包被抗原,采用方阵滴定法优化反应条件,建立了2种检测猪血清中PEDV IgG抗体的间接ELISA方法。结果显示,纯化全病毒和重组N蛋白抗原的最佳包被浓度分别为1.00和4.92μg/mL,检测样品最佳稀释度分别为1∶100和1∶50,重复性试验的变异系数均小于10%,PEDV阳性血清的最低检测稀释倍数分别为1∶1 600和1∶800,对猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病毒等阳性血清均无交叉反应性,2种方法对临床样品检测符合率为95.92%。这表明2种方法均具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于检测和评价血清中特异性PEDV IgG抗体。     

IHA与ELISA法检测弓形虫IgG抗体的比较

目前．国内对弓形央特异性抗体的检测．大多采用间接红细胞凝集试验（IHA）。在检测中作者发现，同一份血清采用不同的检测方法其结果不尽相同，为此，作者采用IHA和酶联免疫吸咐试验（ELISA）进行比较，现将结果报道如下。三材料与方法正．五血清来源血清769份，其中638份来自湛江市区两间大医院产科门诊健康孕妇，131份来自本院附属医院临床科放疗和化疗前的恶性肿瘤患者。1．2试剂盒IHA试剂盒及IgG抗体ELISA试剂盒均购自兰州生物制品研究所，批号分别为：960725，961005。1．3方法每份血清分别用IHA、EI。ISA法按常现操作同…     

夹心ELISA法检测小鼠单克隆抗体试验

本试验用羊抗鼠抗体包被酶标板，建立一种用于多种含鼠抗成分的ＭｃＡｂ的检测方法。用１：１０００（２３．３μｇ／ｍｌ）的羊抗鼠抗体包被４０孔酶标板做夹心ＥＬＩＳＡ试验，检测抗沙门氏菌Ｈ抗原杂交瘤上清，其结果与用抗原包板的间接ＥＬＩＳＡ测得的阳性具有很高的符合率，可用于单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的初步检测。     

免疫球蛋白G(IgG)三种提取方法比较

比较3种提取猪血清中免疫球蛋白IgG方法的提取效果。分别用辛酸沉淀法,硫酸铵分步沉淀法,辛酸-硫酸铵沉淀法粗提猪血清免疫球蛋白IgG,并通过SDS-PAGE凝胶电泳、AlphaEaseFC凝胶成像分析软件、Bradford蛋白浓度测定法等比较3种方法的提取纯度和得率,同时比较3种方法的时效性和经济性。辛酸沉淀法提取IgG所用时间最短,只需1h,得率较高但纯度不高;硫酸铵盐析法提取的IgG纯度较高、得率也高,但时间较长;辛酸-硫酸铵分步沉淀法所得IgG纯度很高,但所用时间较长,得率也较低。3种提取方法各有特点,可根据不同的实验条件和目的选择不同的提取方法。     

羊初乳免疫球蛋白IgG稳定性的研究

研究了酸、碱、胃蛋白酶、胰蛋白酶对羊初乳中免疫球蛋白IgG稳定性的影响。结果表明,IgG在pH 值为5．0～10．0时十分稳定,在pH值低于5．0的条件下,随pH值降低,变性率急剧上升;正交试验结果表明,胃蛋白酶对IgG的影响因素为pH值>作用时间>酶液浓度;最佳条件为pH 4．0,作用时间1 h,胃蛋白酶的质量浓度为0．5 mg／mL;胰蛋白酶对IgG活性的影响相对较小。     

牛初乳IgG的特性及检测方法

主要介绍了牛初乳中IgG的理化特性和生理功能及其在胃肠内的抗降解特性,同时介绍了牛初乳IgG的提取及常用检测方法,并对牛初乳IgG作为保健产品和医疗药品基料的趋势作出展望。     

我国黄曲霉毒素高灵敏检测跃居国际领先

日前,从中国农业科学院油料作物研究所获知．该所李培武研究员带领农业部生物毒素检测重点实验室科研团队完成的黄曲霉毒素高灵敏检测技术研究获得重要突破．打破了发达国家对我国黄曲霉毒素高灵敏检测技术产品的垄断和制约．显著提升了我国农产品与食品检测仪器设备的自主装备能力．检测技术达国际领先水平。李培武研究团队成功选育出具有完全自主知识产权的黄曲霉毒素系列杂交瘤细胞株．研制出多个高亲和力抗体．     

基于汉赛巴尔通体外膜蛋白构建ELISA检测方法及其应用

汉赛巴尔通体是人类猫抓病的主要病原体,亦是艾滋病人及部分免疫低下人群杆菌性血管瘤的致病原。本实验利用汉赛巴尔通体外膜蛋白建立ELISA检测方法。通过平行检测实验证实本研究建立的ELISA方法检测效率与商品化免疫荧光(IFA)试剂盒具有较高一致性。运用本研究建立的ELISA方法初步对180个健康志愿者的血液样本和34个淋巴结病患者血液样本进行检测,结果发现25%的健康志愿者,41%的患者血清反应呈巴尔通体阳性感染。     

牛乳β-酪蛋白检测的ELISA方法

体外乳腺细胞培养是整体泌乳研究的有效补充,也在乳腺生物反应器的研究中发挥着重要作用.但乳腺细胞分离培养成功的标志不仅仅是细胞的形态特征及增殖特性,更重要的是细胞的生理功能及分化状态.β-酪蛋白为乳中所特有的蛋白质,其在乳中的含量仅次于α-S1酪蛋白居第二位,故可用这种蛋白做为乳腺细胞分化功能的指标.     

LH抗体间接ELISA检测方法的建立

以高纯度的促黄体素（LH）作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1500.该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素（FSH）阳性血清呈现阴性反应.结果表明,该法具有良好的特异性和重复性,可用于LH免疫后抗体水平检测.     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法与ELISA间接法检测小鼠肝炎病毒抗体的比较

用辣根过氧化物酶标记的抗小鼠肝炎病毒(MHV)单克隆抗体(McAb),建立了ELISA 双抗体夹心法,并与 ELISA 间接法检测小鼠血清中的 MHV 抗体进行了比较。发现两种方法在检出率、特异性、稳定性方面并无明显差异,但由于间接法操作更为简便,因此认为,检测血清中 MHV 抗体采用间接法较好。     

饲料中三聚氰胺的ELISA检测方法的探讨

试验利用BRAXIS试剂盒和自制（经气相色谱质谱法确证不含三聚氰胺）三聚氰胺添加量为2 mg/kg的配合料和浓缩料作为阳性对照样品,对100批次饲料产品的进行了三聚氰胺筛选,并将两种方法的筛选结果按照NY/T1372-2007中的气相色谱质谱法进行了确证和比较。试验结果表明：利用三聚氰胺添加量为2 mg/kg配合料和浓缩料为阳性对照样品,对样品的筛选结果,要比使用BRAXIS试剂盒的内制曲线筛选的结果,产生的假阳性少,准确率相对要高。     

黄曲霉毒素B1高灵敏定性定量免疫层析检测方法的建立

  目的  真菌毒素可污染农产品和动物源性食品,其中黄曲霉毒素B₁(AFB₁)毒性强、危害大,建立AFB₁快速、高灵敏和便捷的检测方法对于监测相关产品中AFB₁污染水平,保障人和动物健康均具有重要意义。基于侧向层析技术原理,采用竞争模式,优化建立免疫层析检测方法,以实现AFB₁的快速定性检测和定量分析。  方法  通过比较分析不同粒径金颗粒标记抗体效果,优化确定免疫层析各组分材料类型、相关缓冲液配方及最佳使用质量浓度,建立AFB₁高灵敏定性定量免疫层析检测方法。  结果  优化建立的AFB₁免疫层析检测法在实际样本中的定性和定量检测限分别为2.5和0.5 μg·kg?1,灵敏度高、特异性强,与其他常见真菌毒素无交叉反应,加标回收实验结果显示:该方法准确稳定,且对AFB₁天然污染样本的定量检测结果与商品化试剂盒及LC-MS/MS一致性较好。  结论  本研究制备的免疫层析检测法可用于样本中AFB₁污染的快速定性检测与定量分析,适合缺乏实验条件的基层检验检疫机构和农产品加工企业对大量样本进行快速筛查,样本检测结果疑似阳性再采用仪器法进行确认,可降低检测成本,提升检测效率,同时为建立其他病原微生物免疫层析检测方法提供参考。图9表2参26     

奶牛孕酮间接竞争ELISA检测方法的建立

[目的]为孕酮检测试剂盒的研制奠定基础。[方法]采用二环己基碳化二亚胺法制备检测抗原,建立了检测奶牛孕酮含量的间接竞争ELISA方法。[结果]检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA的最佳反应条件确定为:最佳包被浓度为100 ng/ml,碳酸盐缓冲液的包被效果较好,以4℃过夜+37℃2 h佳,最佳封闭液为2%山羊血清,酶标抗体的工作浓度为0.13μg/ml。建立的标准曲线方程为y=-1.844 4x-0.140 1(R2=0.981 7),检测范围为0~20 ng/ml,最低检测限为0.58 ng/ml。该标准曲线的批内变异系数和批间变异系数分别为2.22%和2.37%。[结论]该研究建立了定量检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA方法。     

羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板,用脱脂奶粉封闭酶标板,设置封闭时间分别为1.0,1.5和2h,再用不同稀释度的血清(1∶100,1∶200,1∶400和1∶800)与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性结果判定的临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行考察,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原,最佳包被抗原菌体密度为OD600=0.08,血清的最佳稀释度为1∶400,封闭时间为2h,阳性血清的临界值为0.329。该抗体检测方法可特异性地检测出伪结核阳性血清,羊口疮阳性血清、羊痘阳性血清、乳房炎阳性血清均呈阴性反应;组内,组间变异系数10%。该方法对临床样本的检测结果与实际患病状况一致。【结论】成功建立了伪结核抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性强、重复性好,可用于临床诊断和批量血清学检测。     

小鼠生物法与ELISA法检测麻痹性贝类毒素的比较

麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)是全世界分布最广、危害最大,也是最为大众熟知的一类赤潮藻毒素。本研究比较了小鼠生物法与酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测水产品中PSP的效果。结果表明,样品中PSP含量在350μg·kg-1以上时,2种检测方法结果吻合度较好;样品中PSP含量在40~350μg·kg-1时小鼠生物法无法检测到样品中PSP,而ELISA法可以快速检测样品中PSP;在PSP阴性样品中两者检测结果一致。通过比较研究,2种方法在快速筛选PSP时各有优缺点,日常检测工作中将2种方法适当结合可提高检测结果准确度。