用低血清培养基和常规培养基培养细胞对FMDV增殖影响的比较

对15批用低血清培养基培养的细胞与用常规培养基培养的细胞进行口蹄疫病毒增殖培养对比试验,结果表明:两者之间在FMDV增埴指标上,LD50和TCID50无明显差别;低血清培养基比常规培养基病变时间短1h.     

昆虫细胞无血清培养基的研究

为开发昆虫细胞无血清悬浮培养基,以基础培养基Grace's Insect medium为基础,添加葡萄糖、水解乳蛋白、酵母粉和PF-68等组份后,分别接种Sf-21、Hi-five两种昆虫细胞进行无血清悬浮培养。结果显示:两株昆虫细胞生长均较好,均能够很好的全悬浮生长,Sf-21细胞最高密度可达(39.8±2.6)×105/ml,Hifive细胞最高密度可达(44.4±1.0)×105/ml。本研究为昆虫细胞培养提供一种无血清悬浮培养基配方,为我国利用昆虫细胞杆状病毒表达系统生产生物制品提供基础保障。     

柞蚕蛹卵巢原代细胞培养方法及培养基的选择试验

采用机械分散法和胰酶消化法,分别选取MGM-448、Grace、TC-100等3种培养基进行柞蚕蛹卵巢组织细胞的体外培养。在2个月的原代细胞培养期间,机械分散法获得的培养物在MGM-448培养基中贴壁效果好,细胞健康且生长旺盛;而在Grace和TC-100培养基中,细胞虽能贴壁,但生长较缓慢。胰酶消化法分散细胞的效果好,但在3种培养基中的细胞会出现轻微损伤而影响活力。综上认为,柞蚕蛹卵巢原代细胞的最佳培养方法为机械分散法,最佳培养基为MGM-448。     

黄牛卵母细胞在三种不同培养基中的成熟效果比较

用3种不同的培养基培养黄牛卵母细胞,结果表明,TCM-199基础型和商用Holding型培养基可使其成熟率达到80%,DMEM基础型尽管可使颗粒细胞生长良好,但卵母细胞的成熟率极低。     

籽粒苋品种比较试验

对8个籽粒苋品种的生长强度、鲜草产量、籽实产量、生育期及品种性状进行了研究比较,结果表明红苋R104和红苋M7生育期中等、穗形较松散、生长强度大、产量高,开花期一次性测产,鲜草产量分别为69334kg/hm2和66134kg/hm2,生长强度分别为1195kg/(hm2·d)和1181kg/(hm2·d),比目前推广的红苋K112分别增产26．4％和20．4％。红苋R104种子产量高达4466kg/hm2,比红苋K112高59．5％,是其它几个品种的1～3倍。比较而言,红苋R104生长强度和生产力水平明显高于其它7个品种。     

商品细胞培养基中谷氨酰胺和氨的浓度

氨基酸谷氨酰胺是培养细胞的一种必需营养成分。水溶液中被液体培养基谷氨酰胺自发地分解成氨。本研究检查了氨对两株不同细胞系的毒性作用。在鼠杂交瘤细胞培养物中，外源氨浓度达到１００μｍ时，活细胞数就减少。在人前髓细胞系中，外源氨浓度为３００μｍ时，活细胞数就减少。我们测定了１１种商品培养基在分装时的氨和谷氨酰胺的浓度。发现所有培养基所含谷氨酰胺明显低于规定的量，而氨浓度都高达１０００μｍ。在４℃和２０℃     

昆虫细胞无血清培养基研究进展

随着昆虫杆状病毒表达载体系统的广泛应用,昆虫细胞大规模无血清培养已成为一种发展趋势。目前的昆虫细胞培养基中主要有糖类、维生素、氨基酸、脂类、无机盐、有机酸等基础成分,此外还需要添加血清或酵母提取物和水解乳蛋白等血清替代物。然而使用血清会带来诸多难以解决的问题,因此开发使用血清替代物和无血清培养基已成为生物制品行业关注的主要方向。论文综述了昆虫细胞无血清培养基的研究进展,包括研究历程、研究现状、基础成分和其他添加物等。     

猪细小病毒CG-05株在ST细胞上的增殖规律研究

通过将猪细小病毒CG-05株同步接种于ST细胞,测定不同时间收获的病毒液的TCID50和HA,研究了CG-05株病毒在ST细胞上的增殖规律。病毒接种后镜检观察接毒细胞,在接种病毒后24 h,即可在细胞较少的区域看到非常轻微的病变。测定病毒TCID50,检测到接毒后培养17h病毒已经明显增殖;当培养到40h左右,其TCID50即接近高峰,达到10-7.2/0.1mL以上,并进入平台期;继续培养,TCID50最高可达到10-8.5/0.1mL,且直到122 h也不见明显降低。病毒HA价也出现同样的平台期,但比TCID50的平台期出现得晚,到50 h才进入平台期。结果表明,用ST细胞培养CG-05株病毒,接种病毒培养56～96 h后,如病变达到80%以上,且细胞脱落已形成20%以上空斑,此时收获病毒可获得高效价的病毒液。该研究可为制备高效价的PPV病毒抗原提供数据资料。     

PPV培养细胞的选择及在ST细胞中的增值规律

猪细小病毒毒株在不同细胞系上的生长情况不尽相同,如不能掌握其规律,将难以生产出优质的疫苗.本研究对PPV（M2株）在PK15和ST细胞上生长情况进行了研究,得出ST细胞更适合其生长。之后将PPVM2毒株同步接种于ST细胞,用测定HA和TCID50的方法研究了其在ST细胞上增殖的基本规律。病毒在接种后24h可在细胞较稀的区域看到非常轻微的病变,病毒TCID50测定结果也表明,接毒后17h,病毒已经明显增殖。当病毒培养到约40h,其TCID50即接近高峰,并进入平台期,病毒的TCID50已达到10^7.5／0．hmL以上。继续培养,最高可达到10^8.5／0．1mL以上,且直到122h,也不见明显降低。病毒培养40-122h,不管是用Gibco血清还是用Hyclone血清培养病毒,其差异都非常小,变异系数都在5％以内。病毒HA价也出现同样的平台期,但HA价的平台期出现比TCID50的平台期出现更晚。     

KAv-1 is Better Suited to Chick Fibroblast Culture than DMEM or 199 Media

Cultured cells are a useful resource for poultry scientists, since these cells allow scientists to evaluate biological responses to conditions such as infectious diseases in vitro while mimicking the whole-body response in birds. However avian cell culture requires an optimized basal medium, and there are currently relatively few options for this basal medium (medium 199 and KAv-1). This means that there is still room for the development of an optimal basal medium for avian cell culture. Here we compare KAv-1 medium, Dulbecco''s modified Eagle medium (DMEM) and medium 199 during the culture of chick fibroblasts and determine that KAv-1 remains the optimal medium for these assays. Our results show that DNA damage is reduced in fibroblasts cultured in the KAv-1 medium, when compared to both DMEM and Medium 199 and that these cells also display improved growth dynamics in KAv-1 medium when compared to both DMEM and medium 199. To the best of our knowledge, this is the first study to describe a comparative analysis of culture media for avian cells, which would provide useful information for poultry scientists.     

Vero细胞无血清培养基研究进展

Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的生产人和动物疫苗的细胞系。为了避免外来污染和血清中不确定成分对细胞生长及其下游工作带来的影响,用无血清培养基或化学成分明确的培养基培养Vero细胞已成为病毒疫苗生产的一个重要发展趋势。Vero细胞无血清培养基的组成包括基础培养基和添加因子两大部分,常见的添加因子有转铁蛋白、胰岛素、微量元素、生长因子和维生素等。论文对Vero细胞无血清培养基的研究进展做一综述,以期为Vero细胞的无血清培养基研制及疫苗的生产提供参考。     

动物细胞大规模培养中细胞凋亡检测方法的研究

为了探讨动物细胞大规模培养中细胞凋亡的检测方法,以不同浓度氯化铵诱导BHK-21细胞凋亡,每隔12 h收集细胞,采用台盼兰形态学排染法、吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法、FITC-Annexin V/PI双染色荧光显微镜观察法、原位缺口末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳、流式细胞术(FCM)法进行细胞凋亡的检测。通过比较发现,不同方法检测结果都存在着显著性差异,但吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法是一种简单、易行、准确、全面定性细胞凋亡的较为可靠的方法,而FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞仪能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞,是较为理想的凋亡定量检测方法。这2种方法的联合运用更适应于动物细胞大规模培养过程中细胞凋亡的检测。     

几种培养基对A型产气荚膜杆菌产毒效果的比较

本文以四种培养基，对同一A型产气荚膜杆菌分离株G3的生长曲线和培养液pH值变化进行了测定，并比较了四种培养基的产毒效果。结果表明：A型产气荚膜杆菌在四种培养基上的生长内线基本一致，但pH值变化有差异，其中以疱肉培养液的pH值变化幅度最小，且其毒素产量最多，活性最高。由此可见，疱肉培养基可作为A型产气荚膜杆菌的产毒培养基。     

不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量测定

虫草素和腺苷是蛹虫草的重要活性成分,通过高效液相色谱(HPLC)法测定不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量,筛选能生产高品质蛹虫草的培养基。测定结果表明,用不同培养基培育的蛹虫草子实体中,其虫草素和腺苷含量存在显著差异,总体表现为粳米+家蚕蛹浸提液培养基>糯米+家蚕蛹浸提液培养基>粳米培养基>糯米培养基,其中用粳米+家蚕蛹浸提液培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素和腺苷质量比分别高达15.37 mg/g和39.96 mg/g。此外,相同培养基培育的蛹虫草子实体、菌丝体和培养基质中的虫草素与腺苷含量存在极显著差异,总体表现为子实体>菌丝体>基质。试验结果表明,粳米培养基中添加家蚕蛹浸提液可显著提高蛹虫草中的虫草素和腺苷含量。     

Research Progress on Technology of Fed-batch in Animal Cell Culture

Nowadays, fed-batch culture becomes the predominant mode of the large-scale animal cell culture process.It is widely used in the production of biological products, and promotes the development of the modem biological industry.In the process of culture, the cells should be provided with nutrient for its metabolism and products synthesis.The by-produces of the cells should also be controlled to relief the contradiction between nutrient consumption and by-produces accumulation.The advantage of fed-batch culture is drawn forth from analyzing the characteristics.In this paper, we reviewed the cell metabolism coupled with gene regulation, the optimization of culture process and control strategies linked with on-line monitor in the fed-batch culture process.On the basis of above-mentioned survey, the existent problems and prospects for animal cell cultivation were discussed.     

动物细胞流加培养工艺研究进展

流加培养技术是动物细胞大规模生产中主流培养技术,被广泛应用于生物制品的生产,推动了生物技术产业的发展。流加培养过程中,需合理地向细胞持续提供所需营养物质,以满足其生长代谢和产物合成所需,控制代谢副产物的积累,缓解营养物耗竭和代谢副产物积累之间的矛盾。通过对流加培养的特性分析引出其优势,从培养过程中细胞代谢及基因调控、培养工艺的优化及流加过程的检测与控制等方面进行了阐述,最后提出了现如今流加培养技术存在的问题并进行了展望。