枯草芽孢杆菌YT168-6产抗菌肽sublancin的发酵工艺优化及培养基筛选的研究

研究旨在探索枯草芽孢杆菌YT168-6产抗菌肽sublancin的最适发酵条件和最适培养基组成,以期提高发酵液中sublancin含量。试验先通过单因素试验筛选出最适发酵条件,确定发酵培养基需要的无机盐、碳源、氮源,再通过正交试验、最陡爬坡试验、Box-Behnken设计的响应面分析方法确定最适发酵培养基组成。结果表明：枯草芽孢杆菌YT168-6产抗菌肽sublancin的最适发酵条件为菌种接种量1.0%、发酵温度37℃、发酵液初始pH 7.0;最适发酵培养基为K₂HPO₄ 5 g/L、KH₂PO₄ 5 g/L、MgSO₄ 10 g/L、可溶性淀粉30.2 g/L、蛋白胨23.6 g/L、玉米浆18.2 g/L;优化后sublancin产量由756 μg/mL提到1 581 μg/mL,是优化前的2.09倍。综上所述,本研究所筛选的最适发酵条件和最适培养基可为枯草芽孢杆菌YT168-6菌株工业化生产sublancin提供技术参考。     

一株凝结芽孢杆菌的生物学特性及其有机酸相关研究

为了研究凝结芽孢杆菌的生物学特性及其产酸性能分析,试验对一株凝结芽孢杆菌进行生理生化和16S r DNA鉴定,通过耐酸、耐胆盐、耐高温及抗生素敏感性进行抗逆性检测,并采用高效液相色谱法针对发酵液中的有机酸含量进行测定。结果表明:此株菌是一株凝结芽孢杆菌,其营养体对抗生素敏感,具有一定的耐酸耐胆盐能力,同时耐高温。此株菌可产生多种有机酸,乙酸含量最高由24小时的794.70μg/mL上升到36小时的1 372.58μg/mL;琥珀酸在24小时的含量为519.02μg/mL,但36小时时降至407.62μg/mL;戊酸产量最低;其他酸则处于中间值。说明此株菌为抗逆性强、营养体对抗生素敏感且产酸能力强的凝结芽孢杆菌。     

蜡样芽孢杆菌、产色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌三重PCR检测方法建立与应用

针对蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的hblA基因、产色葡萄球菌(S.chromogenes)的sodA基因和肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)的khe基因,建立了三重PCR检测方法。结果显示,退火温度为54℃,BC-hblA、SC-sodA和KP-khe引物浓度分别为0.6、0.2、0.1μmol/L为最佳扩增条件;对B.cereus、S.chromogenes和K.pneumoniae的基因组DNA最低检测限分别为35.8、6.3、40.2 pg/μL,菌液最低检测限分别为9.9×10³、1.1×10³、1.0×10⁴ CFU/mL。特异性试验显示,除这3种菌以外,大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、产气荚膜梭菌和腐败梭菌检测结果均为阴性。14份临床乳房炎乳样的检测结果显示,三重PCR方法B.cereus、S.chromogenes和K.pneumoniae的阳性率分别为35.7%(5/14)、14.3%(2/14)和7.1%(1/14),其中蜡样芽孢杆菌的PCR检测阳性率高于细菌分离鉴定阳性率(...     

嗜酸乳杆菌LA-Y26高密度培养工艺条件优化

嗜酸乳杆菌(Lactobacilus acidophilus)是一种重要的益生菌,具有改善肠道健康、调节免疫、减轻肥胖、治疗肠道疾病等众多益生功能,在食品、药品及饲料添加剂中均有应用,市场需求巨大。本试验采用单因素试验及正交试验对嗜酸乳杆菌LA-Y26培养基及培养条件优化,结果表明：最适培养基配方为乳糖20.0g/L,大豆蛋白胨20.0g/L,天冬氨酸1.5g/L,吐温801.0mL/L,磷酸氢二钾2.0g/L,乙酸钠5.0g/L,柠檬酸三铵2.0g/L,硫酸镁0.2g/L,硫酸锰0.05g/L;最适培养条件为初始pH6.0,接种量3.0%,温度37.0℃,转速50r/min,培养时间20h;经多次发酵罐验证,活菌数最高达82.1×10⁸CFU/mL,较传统MR S培养基高约40倍。     

饲用枯草芽孢杆菌SR096产孢培养基及培养条件的优化

试验旨在为了降低枯草芽孢杆菌SR096的工业生产成本和提高发酵液的芽孢含量,采用单因素试验和响应面法试验设计对菌株SR096的培养条件和发酵培养基组分优化,优化后的培养基组分为:葡萄糖7.5 g/L、玉米粉15.7 g/L、黄豆粉45.0 g/L、柠檬酸钠4.5 g/L、碳酸钙2.0 g/L、硫酸镁1.0 g/L,经验证在5 L发酵罐中以接种量3%、37℃、250 r/min条件下培养30 h,枯草芽孢杆菌SR096发酵液的活菌含量为1.67×10^10 CFU/mL,芽孢含量为1.56×10^10 CFU/mL,芽孢率为93.3%,为枯草芽孢杆菌SR096后期的产业化放大和推广应用奠定基础。     

响应面法优化地衣芽孢杆菌S6产角蛋白酶培养基

试验利用响应面法对地衣芽孢杆菌S6产角蛋白酶的培养基进行优化.单因素试验表明:(K2HPO4/KH2PO4)、NaCl和MgSO4最佳水平分别为1.4/0.7、0 3和0.1 g/L,响应面优化地表芽孢杆菌S6培养基最佳组成为麦芽糖0.03 mol/L、半胱氨酸0.02 mol/L和生物素28.17μg/L,与基础发酵培养基相比,角蛋白酶活力最高值提高了2 822 4倍,为210.55 U/mL.     

一株产抗单增李斯特菌细菌素的枯草芽孢杆菌C3产芽孢条件的优化

枯草芽孢杆菌C3可产抗单核细胞增生李斯特菌的细菌素,有良好的抗逆性,具备开发为微生态饲料制剂的潜力。为提高该菌的芽孢数量和产孢率,对其产芽孢条件进行优化。通过单因素试验及正交试验对枯草芽孢杆菌C3的产孢培养基和培养条件进行研究。结果表明,优化后的产芽孢培养基为麸皮1.0%,花生饼粉1.0%,CaCl_2 1.0%,pH 7.5;优化后的培养条件为装液量50 m L/250 m L,接种量2.0%,摇床温度40℃,160 r/min,培养时间36 h。在优化条件下,芽孢数达41.60亿CFU/m L,产孢率为91.42%。     

一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化

通过正交优化试验对一株枯草芽孢杆菌的发酵培养基进行优化,结果发现,当培养基中豆粕液为20 g/L,葡萄糖浓度为5 g/L,玉米粉浓度为2 g/L时,在接种量为5 %的情况下,采用此种配比的发酵培养基37 ℃培养24 h,活菌数最高,可达4.0×109 CFU/mL.     

枯草芽孢杆菌发酵条件的优化

采用单因素及正交实验法对枯草芽孢杆菌的培养基在摇瓶中进行优化,优化后的培养基为葡萄糖15g/L、酵母浸出物5g/L和MgSO45g/L;并通过单因素实验法确定了最佳培养条件为温度35℃,初始pH6.0,接种量3%,装液量20mL/250mL,发酵时间12h。     

枯草芽孢杆菌发酵黄芪提取液培养基优化研究

为了研究枯草芽孢杆菌发酵黄芪提取物的最佳培养基以及防腐剂对枯草芽孢杆菌存活率的影响,试验采用正交设计对培养基配方进行优化,并进行了扩大培养试验;用单因子试验法测定了枯草芽孢杆菌存活率。结果表明:培养基黄芪生药含量为0.5 g/mL,每100 mL培养基中含豆粕2.0 g、玉米2.0 g、麸皮2.5 g时枯草芽孢杆菌活菌数最多,可达到8.34×10~8cfu/mL,芽孢率大于90%。与摇瓶培养相比,发酵罐培养可以明显提高枯草芽孢杆菌的活菌数,为1.86×10~9cfu/mL。发酵液中添加一定量的防腐剂,经长时间保存后枯草芽孢杆菌的存活率均较高,约为95%。     

一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化

采用正交试验对1株枯草芽孢杆菌的发酵培养基进行优化。确定了最佳的培养基配方为:葡萄糖25g/L,豆粕粉60g/L,玉米浆8g/L,在接种量为2%的情况下,发酵温度37℃,发酵时间24h,所获得活菌数约为5.3×109CFU/mL。     

纳豆芽孢杆菌的液体发酵条件研究

试验采用PB液体培养基测定纳豆芽孢杆菌生长曲线,确定了最佳接种时间为14h。对碳源和氮源分别采用单因子试验,对无机盐和培养条件分别采用L9(34)正交试验,筛出最佳液体发酵培养基配方为:葡萄糖2g/L、豆饼粉20g/L、氯化猛0.1g/L、磷酸氢二钾2g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁1g/L;发酵温度33℃,初始pH值8.0,接种量为7%,250mL三角瓶的装量为40mL,芽孢数量为19.5亿/mL。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与培养基筛选

从陕西省关中地区患多发性浆膜炎和关节炎猪场的32个样品中分离到6株细菌,并对其进行了形态观察、菌落纯培养、生化特性鉴定、PCR检测等,最终确定分离菌株均为副猪嗜血杆菌.该结果表明,关中地区存在副猪嗜血杆菌病流行;对副猪嗜血杆菌分离株最适培养基进行了筛选,将分离菌株分别接种于LB、TSA、巧克力琼脂等固体培养基上,接种12 h后通过观察菌落大小,筛选出最适合副猪嗜血杆菌生长的固体培养基TSA(加0.1 g/L NAD和50 mL/L的犊牛血清)和固体培养基巧克力琼脂(加0.8 g/L NAD).同时,将副猪嗜血杆菌分离菌株接种于LB、TSB等液体培养基中,培养至16h后,每隔4h分别取样,通过与麦氏比浊管对比确定菌液中的菌数,筛选出最佳液体培养基为TSB(加0.1 g/L NAD和50 mL/L的犊牛血清).     

枯草芽孢杆菌发酵菌糠制备饲料微生物添加剂的研究

试验旨在优化枯草芽孢杆菌发酵金针菇菌糠的条件进而制备饲料微生物添加剂。试验采用L1(645)正交试验,测定枯草芽孢杆菌发酵金针菇菌糠的培养温度(A)、外源氮水平(B)、初始pH值(C)、发酵时间(D)、菌液接种量(E)5个因素对芽孢数的影响,同时测定发酵产物的有毒、有害物质含量。结果表明,枯草芽孢杆菌的最适发酵条件为培养温度35℃、棉粕添加量3%、初始pH值7.5、发酵时间48 h、菌液接种量10%。对其发酵结果的影响程度依次是外源氮水平>初始pH值>发酵时间>接种量>培养温度。此添加剂中的黄曲霉毒素B1以及重金属砷、铅、汞、镉的含量均符合国家饲料添加剂卫生指标。在此条件下固态发酵菌糠,枯草芽孢杆菌的芽孢数为8×109cfu/g(干重),对其发酵后产品烘干即得到饲料微生物添加剂。     

牛源复合芽孢杆菌混合发酵条件的优化

为了提高复合芽孢杆菌混合发酵的芽孢菌数,试验采用外加碳源、氮源及无机盐单因素试验及4因素3水平正交试验对培养基进行优化,并对发酵参数进行了研究,测定了活菌数及芽孢菌数。结果表明:培养基最佳配比为玉米粉20 g/L、豆粕粉40 g/L、KH2PO41.5 g/L、K2HPO41.5 g/L、Mn SO42 g/L;混合发酵的最适条件为37℃、p H值7.0、500 m L三角瓶中装入200 m L培养液,160 r/min摇床培养26 h,此条件下芽孢菌数可达4.91×1010cfu/m L。     

副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与应用

为了快速检测临床上副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)感染,根据Gen Bank中Hps的16S rRNA基因保守区序列,设计1对特异性引物,利用PCR方法检测Hps,并进行特异性、敏感性及临床检测。结果显示:PCR反应选择58℃为最适退火温度,0.5μL(20μmol/L)为最适引物量,模板浓度为7.2×10~(-6)μg/mL时即可扩增出814 bp特异性目的片段,与细菌分离结果一致。结果表明:该方法敏感、快速、特异,可用于临床上Hps感染的快速检测。     

MTT-分光光度法快速测定地衣芽孢杆菌发酵液活菌数的研究

试验以地衣芽孢杆菌发酵液为研究对象,旨在建立1种快速、稳定、灵敏度高的活菌计数方法,并探讨MTT-分光光度法用于活菌计数的可行性。试验筛选显色反应终止液最适浓度、最适反应波长、最适反应时间、最适菌液浓度等,考察不同培养基、培养液保存后和其他干扰物对测定结果的影响,并对比MTT-分光光度法与稀释平板法测定发酵菌液中地衣芽孢杆菌活菌数结果的关系。结果显示,在最大吸收波长550 nm处测定OD值,反应时间为1 h,反应终止液为1.0 mol/L盐酸,MTT添加量为0.2 mL,新鲜的地衣芽孢杆菌发酵液OD值>0.04。菌液浓度为10⁸～10⁹ CFU/m L时,OD_{550 nm}值与稀释平板法得到的活菌数具有很好的线性对应关系,当菌液浓度<10⁸ CFU/mL时对应关系不再成立。研究表明,活菌量>10⁸ CFU/mL时,MTT-分光光度法不受地衣芽孢杆菌生长阶段的影响,可准确计量地衣芽孢杆菌发酵液活菌量相对应的吸光度,从而快速、准确地检测活菌数。     

地衣芽孢杆菌产芽孢培养基和培养条件的优化

本研究以地衣芽孢杆菌CICC 20514为对象,芽孢数和芽孢率为目标参数,采用单因素、正交试验方法对培养基配方进行筛选,并在此配方基础上对培养条件进一步优化。结果表明：最终产芽孢发酵培养基的最佳组合为20 g/L果糖、20 g/L豆粕、5 g/L K₂HPO₄、7 g/L NaCl、0.8 g/L CaCO₃和0.8 g/L MgSO₄;产芽孢最佳培养条件为37℃,220 r/min,接种量5%,装样量20%,初始pH 6.5～7.5,发酵培养时间48 h。优化后的地衣芽孢杆菌CICC 20514培养基芽孢数及芽孢率均具有良好的稳定性,发酵液芽孢数达5.8×10⁹CFU/mL,比优化前提高了58倍。     

微生物检测法测定安来霉素发酵液生物效价

根据安来霉素对革兰阳性细菌能产生有效抑制的原理,采用微生物抑制法试验,做出抑菌圈直径对应安来霉素效价的标准曲线。试验以枯草芽孢杆菌为工作菌,用杯碟法测定安来霉素的效价。结果表明:标准曲线的工作范围为1700～1.33万μg/mL,安来霉素的最低检出限为21.47μg/mL,平均回收率均超过97.5%,并且检测时间仅需16h。该法能快速检测安来霉素效价且灵敏度高,操作简便,回收率高。     

饲用纳豆芽孢杆菌AJ138生产工艺研究

以纳豆芽孢杆菌AJ138为材料,在摇瓶水平,考察改变营养条件及培养条件对纳豆芽孢杆菌高密度培养及芽孢形成率的影响,并最终确定纳豆芽孢杆菌的最优工艺条件:葡萄糖15、大豆饼粉10、(NH4)2SO45、Na2HPO4 1、NaH2PO4 1、NaCl 5、FeCl2 0.02、MgCl2 0.2、MnCl2 0.15和CaCl20.2 g/L,初始pH7的培养基,培养温度37℃,接种量4%。在该工艺条件下,50 L发酵罐,装液量75%,培养时间36 h,纳豆芽孢杆菌AJ318细胞数达30.5亿CFU/mL,芽孢数29.8亿CFU/mL,芽孢率达到97.7%。