抗菌肽对抗生素耐药菌株的抑菌活性研究

[目的]研究抗菌肽对抗生素耐药菌株的抑菌活性。[方法]利用抗性平板划线法从腹泻病牛血便中筛选分离出1株耐药菌,通过16S rDNA序列进行鉴定,采用琼脂孔穴扩散法通过梯度盐酸壮观霉素（spectinomycin,Spe⁺）、氨苄青霉素（ampicillin,Amp⁺）、硫酸卡那霉素（kanamycin,Kan⁺）和氯霉素（chloramphenicol,Cm⁺）试验确定该菌药敏特性,并利用1种抗菌肽制剂对该菌株进行药敏试验。[结果]经BLAST比对分析该菌16S rDNA序列,鉴定该耐药菌为科氏葡萄球菌（Staphylococcus cohnii）,此菌对Amp⁺敏感,但对试验中其他抗生素均有耐药性,各梯度抗菌肽对该耐药菌均具有明显的抑菌活性。[结论]抗菌肽能有效抑制耐药科氏葡萄球菌的生长,有望在畜牧生产中代替抗生素使用。     

抗菌肽APSH-07与抗生素对常见致病菌的体外协同抗菌效果研究

抗菌肽APSH-07是通过高效定向诱导植物乳杆菌表达的一种具有抗菌活性的小肽类物质。试验旨在测定抗菌肽APSH-07对于常见致病菌的抑菌活性,以及与常见抗生素联用的抗菌效果。试验结果表明,APSH-07对常见致病菌有较强的抑菌活性,并且与阿莫西林、土霉素、硫酸庆大霉素、硫酸新霉素、盐酸强力霉素联用后有良好的抗菌效果。试验为APSH-07的实际应用提供了参考,体现了APSH-07作为抗生素替代品,成为新型饲料添加剂的较大潜力。     

大口黑鲈不同组织中抗菌肽粗提及抑菌活性测定

研究了大口黑鲈不同组织中抗菌肽的提取及其粗提物对不同菌种的抑菌作用。以新鲜的大口黑鲈为试验材料,用5％乙酸作为提取液,对大口黑鲈粘液、皮肤、肝脏、脾、卵、鳃组织进行提取,并对粗提物进行抑菌活性检测。结果表明大口黑鲈粘液、皮肤和肝脏组织提取物对嗜水气单胞菌有抑菌作用,皮肤和肝脏组织提取物对大肠杆菌有抑菌作用。肝脏组织抗菌肽提取物经SephadexG-25凝胶过滤层析柱分离后,其收集液对嗜水气单胞菌仍具有抑菌作用。大口黑鲈皮肤和肝脏组织提取物对嗜水气单胞菌、大肠杆菌均有抑菌作用。     

抗菌肽CJH对常见畜禽病原菌抑菌活性及与抗生素协同杀菌效应研究北大核心

抗菌肽CJH是从金环蛇毒液中提取出的一种抗菌活性极强的免疫活性多肽物质。试验测定了抗菌肽CJH对不同革兰氏阴性菌和阳性菌的抑菌活性及杀菌速率,并与常用抗生素的测定结果进行了对比;通过微量肉汤稀释棋盘实验法测定了抗菌肽CJH联用不同抗生素的杀菌效果。结果表明:相比几种常用抗生素,抗菌肽CJH具有广谱的抗菌活性,且杀菌能力较强;抗菌肽CJH与阿莫西林、土霉素联用有协同效应。试验为抗菌肽CJH的实际应用及为了探明其减少甚至替代抗生素成为新型饲料添加剂的潜力提供参考。     

人源抗菌肽LL-37对畜禽病原菌的抑菌活性及体外稳定性研究

测定LL-37对常见畜禽病原菌的抑菌活性及其体外稳定性,并与常用抗生素抑菌活性进行对比。结果表明,LL-37抗菌肽具有广谱的抑菌作用,能够有效抑制细菌生长,但在抑菌效果上弱于常用抗生素如阿莫西林等;LL-37的稳定性较差,在pH=8的碱性环境及消化酶作用的条件下,LL-37的抑菌效果大大降低。研究结果证明LL-37具有一定的抑菌效果,但其抑菌活性和稳定性还有待提高。     

抗菌肽BSN-37的抑菌活性及其稳定性分析

试验旨在研究抗菌肽BSN-37的抑菌活性和稳定性。采用微量倍比稀释法测定抗菌肽BSN-37的最小抑菌浓度(MIC),菌落计数法分析抗菌肽BSN-37对大肠杆菌CVCC1568的杀菌动力学特征,扩散法测定抗菌肽BSN-37的盐离子稳定性、酸碱稳定性、血清稳定性、胰酶稳定性、热稳定性、反复冻融稳定性、室温保持稳定性、药效保持时间稳定性。结果显示,抗菌肽BSN-37对革兰氏阴性菌(大肠杆菌和沙门氏菌)的MIC为1.5625～25μg/mL,对革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌)的MIC为1.5625～12.5μg/mL,对真菌(白色念珠菌)没有活性;抗菌肽BSN-37可在90min内完全杀灭大肠杆菌CVCC1568;除了Fe2+和胰酶会影响抗菌肽BSN-37的抑菌活性外,在75～100℃的高温、150～250mmol/L高浓度盐离子(Na+、K+、Ca2+和Mg2+)、20%～25%饱和浓度的Cu2+、pH 4～10、20%～25%的血清、10～12次的反复冻融、10～12d室温保存等条件下仍能保持较好的抑菌活性,药效保持时间可达7.5d。本试验结果表明,抗菌肽BSN-37具有替代抗生素成为新抗菌药物的潜力,为抗菌肽BSN-37的临床应用提供了理论依据。     

新抗菌肽RL-8的抑菌活性及致大肠杆菌胞内物质泄露

为了解抗菌肽RL-8的抑菌活性及抗大肠杆菌的作用机制,应用生物信息学工具分析了抗菌肽RL-8的理化特征和二级结构,通过微量稀释法测定抗菌肽RL-8对部分细菌和真菌的抑菌活性,采用菌落计数法测定抗菌肽RL-8对大肠杆菌CVCC1568的杀菌动力学,利用分光光度法分析抗菌肽RL-8对大肠杆菌CVCC1568细胞壁和细胞膜的破坏作用。结果表明:抗菌肽RL-8为阳离子型α螺旋形两亲性多肽,对革兰阴性菌(大肠杆菌、沙门菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、绿脓杆菌)的最小抑菌浓度(MIC)为6.25～200.00 mg/L,对革兰阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、屎肠球菌、短小芽孢杆菌)的MIC为3.12～400.00 mg/L,对白色念珠菌的MIC为200.00 mg/L。抗菌肽RL-8能在60 min内杀灭99.99%的大肠杆菌CVCC1568,可破坏大肠杆菌的细胞壁和细胞膜,造成胞内紫外吸收物质泄露。文章研究结果为抗菌肽RL-8的进一步研究和临床应用提供参考。     

猪源抗菌肽PR-39对畜禽常见病原菌的抑菌活性及与抗生素协同杀菌效应研究

实验旨在测定猪源抗菌肽PR-39对常见病原菌的抑菌活性,以及其与常用抗生素的协同杀菌效应。实验结果表明:PR-39对常见畜禽病原菌均有一定的抑菌活性,但对革兰氏阳性菌的敏感性较差;将PR-39与阿莫西林、土霉素、硫酸链霉素联合使用效果良好。研究结果为PR-39的实际应用提供理论数据,同时体现出PR-39替代抗生素开发成新型饲料添加剂的巨大潜力。今后可重点研究PR-39的杀菌机制以及联合不同抗生素协同杀菌的相关机理,为抗菌肽在新饲料配方中的使用奠定实验基础。     

蝇蛆抗菌肽粗提的优化及其抑菌活性研究

为了提高蝇蛆抗菌肽粗提成功率,探讨其抑菌活性,本试验采用不同方法进行蝇蛆抗菌肽的提取,对大肠杆菌和沙门菌诱导的抗菌肽粗提液的抗菌活性及其在-20℃和-80℃下的抑菌效果进行了测定。结果显示,大肠杆菌和沙门菌诱导的蝇蛆抗菌肽浓度和抑菌圈直径均大于庆大霉素对照组;-20℃浸提匀浆液和-80℃冷冻保存过上清的蝇蛆抗菌肽对各种菌的抑菌效果显著高于其他温度。提示,经大肠杆菌和沙门菌诱导蝇蛆活体、-20℃浸提匀浆液和-80℃冷冻保存蝇蛆抗菌肽粗提液等条件均能明显提高蝇蛆抗菌肽的获得率和抑菌活性。     

抗菌肽的抑菌及免疫调控功能

所有生物的免疫防御系统在受到外界病原体侵染时都会产生一类生物非特异性免疫应答产物--抗菌肤,它具有阳离子性、分子量小、抗菌谱广、热稳定性好等优点,使抗菌肽在医学领域的开发与应用成为一种可能.研究表明,很多抗茵肤除了具有抗茵活性外,还对先天性、获得性免疫具有广泛的调节功能.     

重组猪蛔虫抗菌肽cecropin P1在毕赤酵母中的表达及抑菌活性

根据已发表的蛔虫抗菌肽cecropin P1基因编码序列设计引物,采用RT-PCR方法从猪肠道蛔虫中扩增出cecropin P1基因,并将其插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽下游的SnaBⅠ和NotⅠ位点之间,构建成cecropin P1基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/cecropin P1。载体经SalⅠ酶切线性化,电转化到组氨酸缺陷型的酵母宿主菌GS115中,然后利用以葡萄糖为碳源的培养基（MD）和以甲醇为碳源的培养基（MM）筛选出组氨酸His＋型和甲醇利用正型（Mut＋）酵母重组体,再经G418加压筛选得到高拷贝cecropin P1基因的重组酵母。经PCR检测证明cecropin P1基因已整合到毕赤酵母的染色体中。重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,通过Tricine-SDS-PAGE检测,重组酵母能够分泌表达重组cecropin P1,同时表达的cecropin P1对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌活性。     

Spinigerin α抗菌肽的分离纯化及其活性研究

Spinigerinα抗菌肽是一种源于白蚁的线性抗菌肽,包括25个氨基酸,不含半胱氨酸,呈α-螺旋结构。本研究采用凝胶加热-层析法,对Spinigerinα抗菌肽样液通过水浴加热至100℃保持20³0 min,除去不耐热的部分蛋白,经葡聚糖凝胶SephadexG-25脱盐层析分离得到Spinigerinα抗菌肽提纯物。根据SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱绘制分子质量标准曲线,计算Spinigerinα抗菌肽的分子质量。试验结果表明:SDS-PAGE电泳表现为单一条带,其分子质量为2.74 ku;Spinigerinα抗菌肽对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,最小抑菌浓度分别为0.5 mg/mL、0.3 mg/mL、0.2 mg/mL。     

抗菌肽对猪源大肠杆菌和猪链球菌体外抑菌活性研究

<正>1材料和方法1.1材料(1)试验菌株。8株猪大肠杆菌(E.coil)分离自大肠菌感染的猪体,8株猪链球菌株分离自感染的病猪,均来源于河南省内猪场,由河南农业大学牧医工程学院传染病实验室自行分离保存。(2)试剂和药物。抗菌肽和牛肉膏(生化试剂)购自北京奥星生物技术有限公司,批号20070720;蛋白胨(生化试剂)购自北京奥星生物技术有限公司,批号20081102;氯化钠(分析纯)购自天津北方天医化学试剂厂,批号20080924;磷酸氢二钾(分析纯)购自上海恒信化学试剂有限公司,批号20080602。     

抗菌肽的作用机制、应用及改良策略

抗菌肽是一类具有抑菌活性的多肽物质,具有多种优点,包括安全无毒、抗菌谱广、稳定性好、杀菌浓度低、分子质量小、致敏性弱等,成为了生物领域的研究热点之一。本文介绍了抗菌肽的研究现状以及应用情况,分析了目前抗菌肽存在的问题及改良策略,并对应用前景进行了展望。     

一种新型家蝇幼虫抗菌肽基因(MDAP-2)的真核表达及抑菌活性检测

利用毕赤酵母表达系统表达新型家蝇抗菌肽MDAP-2基因(Musca domestica antimicrobial peptide,MDAP-2),为其作为新型抗菌物质应用于临床提供实验依据。根据已有的MDAP-2的氨基酸序列,采用PCR技术扩增获得MDAP-2基因,构建真核重组表达质粒pPIC9K-MDAP-2,将线性化的重组质粒电击转入毕赤酵母(P.pastoris)感受态GS115细胞内,将PCR鉴定为阳性的重组酵母菌进行甲醇诱导表达,并采用Tricine-SDS-PGAE检测表达产物的大小,经镍柱亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白,采用管碟法检测重组蛋白的生物学活性。结果显示,重组质粒pPIC9K-MDAP-2获得高效表达,蛋白分子量为7.8 kD,管碟法检测重组蛋白对大肠杆菌与沙门氏菌均具有体外抑菌活性。MDAP-2基因的成功表达为进一步研究表达产物的生物学及免疫学活性奠定基础。     

猪血中白细胞抗菌肽的提取及体外抑菌研究

为了研究猪血液白细胞抗菌肽对大肠杆菌、鸡源沙门杆菌等的体外抑菌活性,试验采用乙酸萃取、Superdex 30 PG凝胶层析纯化,收集组分并检测抑菌活性。结果表明:猪血液中抗菌肽对大肠杆菌、鸡源沙门杆菌均有良好的抑菌活性。说明该方法可用于猪血白细胞抗菌肽的提取并可抑制上述致病菌。     

蝉新型抗菌肽Cryptonin在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法合成改造后的Cryptonin基因片段。基因克隆到pPICZα-C质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pPICZα-C-Cryptonin。pPICZα-C-Cryptonin通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞X-33内。PCR检测Cryptonin基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在AOX(醇氧化酶)启动子调控下,Cryptonin蛋白获得分泌表达,其相对分子质量约为2700。表达产物耐热性强,在100℃条件下10min内抗菌活性不变,煮沸30min以上仍具有活性。琼脂糖孔穴扩散法检测显示表达产物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有很好的抑菌活性。     

灭活沙门菌处理黄粉虫抗菌肽的粗提及其抑菌活性测定

为了探究灭活沙门菌诱导黄粉虫的效果,试验采用灭活沙门菌液针刺和饲喂黄粉虫幼虫,然后粗提抗菌肽,测定其浓度及药物敏感性。结果表明:饲喂、针刺组诱导的抗菌肽浓度分别为6.644,6.832 mg/mL,两者不存在显著性差异(P>0.05),但都极显著高于对照组(浓度为1.746 mg/mL,P<0.01);黄粉虫菌饲和菌刺组的平均抑菌直径分别为14,16 mm,对照组的平均抑菌直径为11 mm。说明灭活沙门菌处理黄粉虫幼虫能产生大量的抗菌肽,并且对沙门菌具有抑制作用。