用ELISA技术检测厦门口岸进境斑节对虾亲虾携带杆状病毒的情况

试验说明进境斑节对虾携带杆状病毒的情况相当严重,按批次计,１９批进境斑节对虾阳性数为１２批,占６８％（１２／１９）,按检测样品数算,４０份样品有１８份为阳性,占４５％（１８／４０）。同时对不同组织杆状病毒含量进行检测,发现淋巴液含量最高,其次为腮,而肝胰脏、肠、肌肉和性腺则为阴性。     

台湾进境日本对虾中检出斑节对虾杆状病毒

斑节对虾杆状病毒（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ－ｔｙｐｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ,ＭＢＶ）能危害斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ）、万氏对虾（Ｐ．ｖａｎｎａｍｅｉ）、长毛对虾（Ｐ．ｐｅｎｉｃｉｌａｔｕｓ）、短沟对虾（Ｐ．ｓｅｍｉｓｕｌｃａｔｕｓ）...     

进境斑节对虾亲虾及育苗期的疫病调查

1992年以来，福建省海水养殖虾类发病十分严重，同样的在育苗期内也出现虾病多，育苗成功率低的问题。为弄清此问题，现将我们近几年来对进境斑节对虾亲虾及育苗期内幼苗的疫病检疫、防治以及今后的防治对策分述如下，以供同仁参考。1材料和方法1．1材料1．1．1随机抽取近三年来捕自印尼、马来西亚、菲律宾、泰国等地深海区并经新加坡空运至厦门空港进境的斑节对虾亲虾、亲虾粪便和水体。1．1．2取自闽南地区育苗场内亲虾、育苗期内不同发育期的虾苗、病虾及水样。1．2方法1．2．五斑节对虾杆状病毒（MBV）的检测方法：1．2．1．l粪便中MB…     

用聚合酶链反应（PCR）检测对虾杆状病毒

用聚合酶苗反应（PCR），对36份养殖中国对虾，13份海水、虾池底泥、饵料生物及其它养殖环境中的甲壳动物进行了杆状病毒检测，共检出带毒虾23份，带毒海水1份。电子显微镜技术证实了检测的可靠性。     

Establishment of ELISA Detection Method for Neomycin in Import and Export Animal

This experiment used carbodiimide get egg albumin synthesis of artificial antigens coupling neomycin,through square test to determine the best antigen packaged concentration and antibody dilution ratio,mass concentration logarithm of neomycin as abscissa,inhibition rate of antibody as the ordinate drawing standard curve,established ELISA fast detection techniques of neomycin in edible animal for import and export.Methods of recovery and specific test had been done in further research.Results showed that the test dilution ratio of optimum synthetic antigen was 1:200,the best dilution multiple of antibodies was 1:2 000, half inhibitory concentration(IC₅₀) was 6.99 ng/mL;The minimum detection limit of the method was 40 ng/mL,and cross reaction rate of gentamicin, kanamycin, streptomycin,tobramycin,amikacin and dihydrostreptomycin were less than 0.1%,the average of recovery rate was 83.77%.The range of standarding curve in 1.5~40 ng/mL was linear,the correlation coefficient was 0.987,the equation of standarding curve was y=-37.66x+94.592;Compared with HPLC method,the operation was simple and fast.The test results showed that the enzyme-linked immunosorbent method of detecting neomycin was rapid,efficient and specific.     

进出口动物中新霉素ELISA检测方法的建立

应用碳二亚胺法合成人工抗原得到卵清蛋白偶联新霉素,通过方阵试验确定最佳抗原包被浓度与抗体稀释倍数,以新霉素质量浓度对数为横坐标、抗体抑制率为纵坐标绘制标准曲线,建立了进出口食用动物中新霉素ELISA快速检测技术,并对建立的方法进行了回收率和特异性试验。结果表明,建立的检测方法包被人工合成抗原的最适稀释度为1：200,抗体的最佳稀释度为1：2 000,半数抑制浓度（IC₅₀）为6.99 ng/mL;该方法的最低检测限达40 ng/mL,与庆大霉素、卡那霉素、链霉素、托普霉素、阿米卡星、双氢链霉素的交叉反应率均小于0.1%,平均加标回收率83.77%。标准曲线在1.5~40 ng/mL范围内是线性的,相关系数为0.987,标准曲线方程为y=-37.66x+94.592;与常规液相检测方法相比操作简单、快速。本研究建立了一种快速、高效、特异的新霉素ELISA检测方法。     

酶联免疫法检测生鲜乳中三聚氰胺的研究

用酶联免疫法对25个生鲜乳样品中的三聚氰胺残留进行检测,结果显示,离散系数小于10%,平均回收率高达97.7%,且所有生鲜乳样品的三聚氰胺含量均未超标。酶联免疫法可应用于生鲜乳三聚氰胺检测的筛选试验。     

应用单克隆抗体ELISA阻断试验快速检测兔出血症病毒抗体的研究

利用抗兔出血症病毒(RHDV)的特异性单克隆抗体(McAb)建立了ELISA阻断试验用以检测血清抗体,并与血凝抑制(HI)和琼脂扩散试验(ID)进行了比较。结果ELISA阻断试验敏感性超过HI,更远胜于ID,具有灵敏、特异、准确等优点,适于大批血清样品的快速检测。     

ELISA一步法快速检测牛奶中三聚氰胺的研究

在制备三聚氰胺单克隆抗体的基础上建立了一种用于检测牛奶中三聚氰胺含量的间接竞争酶联免疫检测方法,采用一步法操作,评估了方法的回收率、准确度、精密度和特异性,并利用液相色谱―串联质谱法进行了盲样确证试验。结果显示,该方法的线性检测范围为10~810 ng/mL,灵敏度为10 ng/mL,回收率为84.0%~90.0%,同类似物交叉反应率均小于0.1%。本试验建立的ELISA一步法能满足牛奶中三聚氰胺的检测要求。     

南美白对虾死后组织自溶规律的研究

为区别生前病变和死后变化,确定南美白对虾病理组织取材的有效时间,对南美白对虾组织自溶的规律进行了研究。分别于死后0,0.5,1,2,3 h和 4 h取材作常规组织学切片。在光学显微镜下观察,发现死后 2 h脑、触角腺以及肝胰腺的自溶较为明显,而其他器官在死后 4 h 仍未见明显的自溶现象。研究表明南美白对虾病理组织取材时间在死后2 h内为宜。     

副猪嗜血杆菌OMP P5间接ELISA抗体检测方法优化

利用副猪嗜血杆菌(HPS)OMP P5基因表达并纯化复性后蛋白作为包被蛋白,通过对最佳加样作用时间的确定和最佳酶标二抗反应时间等条件的探索优化,建立针对副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5(OMPP5)的间接ELISA抗体检测方法,通过对进行和未进行HPS免疫的健康猪血清的检测,证实了建立的间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强、反应快速准确等特点,可用于HPS的快速诊断     

Establishment of Indirect ELISA Detection Method for Porcine Epidemic Diarrhea Virus

Porcine epidemic diarrhea (PED) is an acute, highly contagious enteric disease of pigs. Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) is the causative agent of PED. PED has caused significant economic losses to the pig industry. In this study,the purified PEDV as the coating antigen, by optimizing the ELISA reaction conditions,the indirect ELISA antibody detection method was established. The optimized reaction conditions were as follows: Antigen working concentration was 20 μg/mL; Serum sample dilution was 1:500;It was coated at 4℃ overnight; The plates were blocked by 5% calf serum incubated at 37℃ for 1 h; The secondary antibody was diluted at 1:10 000,incubated at 37℃ for 1 h. It was judged as positive when the cutoff value D_{450 nm}≥0.289,as negative when D_{450 nm}≤0.236,and as suspicious between 0.289 and 0.236.It could not react with the positive sear of other six viruses such as porcine respiratory and reproductive syndrome virus,porcine circovirus 2, classical swine fever virus, porcine parvovirus,pseudo rabies virus and foot-and-mouth disease virus. The variation coefficient of repeated test was less than 10%.74 pig serum samples from Jiangsu, Jiangxi, Fujian and Guangdong were detected,and the positive rate was 84%.It indicated that this method could be used for PEDV epidemiological surveys and diagnosis in the future.     

猪流行性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪的一种急性、高度传染性肠道疾病,给养猪业造成了严重的经济损失。本研究以纯化的PEDV 为包被抗原,通过优化 ELISA 反应条件,建立了间接 ELISA 抗体检测方法,其反应条件为：抗原最佳包被浓度为 20 μg/mL,血清标准品最佳稀释度为 1：500,包被时间为4℃过夜,5%小牛血清37℃封闭1 h,二抗 1：10 000稀释,37℃作用1 h,抗体临界值为 D_{450 nm}≥ 0.289判为阳性,D_{450 nm}≤ 0.236判为阴性,介于二者之间为可疑。检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、细小病毒和口蹄疫病毒标准血清抗体均为阴性,重复试验变异系数均小于10%,对江苏、江西、福建、广东地区74份猪血清样品进行检测,抗体阳性率达84%,表明该方法具有较好敏感性、特异性和重复性,可用于 PEDV 抗体检测和流行病学调查。     

BSA对牛结核抗体ELISA检测的影响

分别研究了封闭液、血清稀释液及酶标二抗稀释液中BSA成分对牛结核抗体ELISA检测的影响。结果显示酶标二抗稀释液中BSA的存在使ELISA检测值普遍偏低，且BSA的含量越高，检测值越低；结果提示，为了提高ELISA检测值，使其达到理想检测效果，必须提高酶标二抗的使用浓度。结论：BSA中可能存在的牛血清抗体杂质对酶标二抗起到了“中和”作用，降低了酶标二抗与目标抗体结合的实际浓度，使检测结果普遍偏低。