22味中草药对创伤弧菌和灿烂弧菌体外抑菌作用筛选

研究了22味中草药对创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和灿烂弧菌(V.splendidus)的体外抑菌作用。结果显示,22味中草药对其均有不同程度的抑制作用;其中,黄连和连翘对创伤弧菌的抑菌和杀菌效果最好,最小抑菌浓度分别为0.49mg/mL和1.95mg/mL,最小杀菌浓度与最小抑菌浓度相同;黄连、黄芩、连翘和黄柏对灿烂弧菌的抑菌和杀菌效果较好,最小抑菌浓度分别为0.98、1.95、1.95和3.90mg/mL,最小杀菌浓度分别为0.98、1.95、1.95和7.81mg/mL。     

十六种中草药提取物对鳗弧菌体外抑菌作用的研究

研究了十六种中草药对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的体外抑菌作用。结果显示:十六种中草药提取物对鳗弧菌有不同程度的抑制作用,其中大黄、五倍子、黄连的水提物和醇提物的抑菌效果最好,且两种提取物的MIC值相同,分别为1.95 mg/mL、0.98 mg/mL和1.95 mg/mL。     

常用中草药对4种病原弧菌体外抗菌效果的研究

采用琼脂扩散法(打孔法)测定了五倍子等18种中草药对鳗弧菌、副溶血弧菌、河口弧菌及霍乱弧菌等4种病原弧菌的抑制作用。结果表明,五倍子、苏木、地锦草、石榴皮、黄芩、虎杖和山楂等7种中草药对病原弧菌具有较好的抑菌效果,而金银花等11种中草药抑菌作用较弱;同时采用试管连续稀释法,测定了五倍子等抑菌效果较强的7种中草药对4种病原弧菌的抑菌和杀菌浓度。结果表明,苏木、五倍子、地锦草和石榴皮4种中药具有较好的抑菌和杀菌作用,此4种中药对鳗弧菌、副溶血弧菌、河口弧菌及霍乱弧菌等4种病原弧菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.78～6.25mg/ml,最小杀菌浓度(MBC)为3.12～12.5mg/ml。     

5种海洋致病弧菌对34种中草药敏感性的测定

采用纸片扩散(K-B)法,测试了溶藻弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌对34种中草药的敏感性,结果表明:试验菌株对中草药乌梅、黄连、木瓜、五味子、五倍子、马齿苋、白头翁、地榆、公丁香、大黄具有较高的敏感性。采用倍比稀释法,测定10种敏感性较好的中草药对5种海洋致病弧菌的抑菌试验,并测定了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:五倍子抑菌和杀菌能力最强,五倍子对溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌的MIC和MBC均为1.56 mg/ml,对哈氏弧菌的MIC和MBC为3.125 mg/ml;其次是黄连,对溶藻弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌的MIC和MBC分别为3.125 mg/ml和6.25 mg/ml,对哈氏弧菌、副溶血弧菌的MIC和MBC分别为6.25 mg/ml和12.5 mg/ml;乌梅对5种弧菌有相同的抑菌和杀菌作用,其MIC和MBC均为12.5 mg/ml。最终确定五倍子和黄连可以作为防治水产养殖动物弧菌病的首选中草药药物。     

30种中草药对鲟鱼源海豚链球菌的体外抑菌作用

为研究黄连等30种中草药对鲟鱼源海豚链球菌的抑菌、杀菌作用,通过水煎煮法对30种中草药进行提取,采用牛津杯打孔法,在观察鲟鱼源海豚链球菌对30种中草药敏感性的基础上,进一步采用二倍稀释法测定中草药对鲟鱼源海豚链球菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度。试验结果表明,鲟鱼源海豚链球菌对黄连、黄芩、连翘、丁香高度敏感,其中黄连的体外抑菌效果最佳,抑菌圈直径为(28.35±0.65) mm;对秦皮、山楂、女贞子、苦楝皮、石榴皮等均中度敏感;对丹参、猪苓、苍术、茯苓、贯众和生首乌低度敏感。黄连、黄芩、连翘、丁香、秦皮对鲟鱼源海豚链球菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度分别为1.95 mg/mL和3.90 mg/mL、1.95 mg/mL和15.62 mg/mL、3.90 mg/mL和7.81 mg/mL、3.90 mg/mL和15.62 mg/mL、7.81 mg/mL和7.81 mg/mL,其余中草药对病原菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度均高于15.62 mg/mL和31.25 mg/mL。综上可知,黄连、黄芩、连翘、丁香、秦皮对鲟鱼源海豚链球菌具有较好的防治效果。     

18种中草药煎液对温和气单胞菌的抑、杀菌效果

采用琼脂扩散法(打孔法)测定了五倍子等18种中草药对2株病原温和气单胞菌(Aerom onas sobria)的抑制作用,并采用试管2倍稀释法测定抑菌效果较强的中草药对这2株温和气单胞菌的抑菌和杀菌浓度。结果显示:五倍子、苏木、地锦草、石榴皮、黄芩、虎杖和山楂对病原温和气单胞菌的抑菌效果较强;苏木、五倍子、地锦草和石榴皮4种中药对2株温和气单胞菌的最小抑菌浓度(M IC)为1.56～6.25 mg/mL之间,最小杀菌浓度(MBC)为3.12～12.5 mg/mL之间,其中五倍子的抑菌和杀菌浓度最低,分别为1.56 mg/mL和3.12 mg/mL;而金银花等11种中草药抑菌作用较小。结果表明,所选取的18种中草药中五倍子对防治由温和气单胞菌感染引起的水产动物疾病最为有效。     

五倍子对3种致病菌的体外抑菌和急性毒性试验

采用试管两倍稀释法测定五倍子水煎煮液对3种鱼类常见致病菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）,并进行了对鲤鱼的急性毒性试验.结果表明,五倍子煎煮液对温和气单胞菌、爱德华氏菌、柱状屈挠杆菌的最小抑菌浓度分别为6.250 mg/mL、3.125 mg/mL、0.781 mg/mL;最小杀菌浓度分别为12.500mg/mL、12.50.mg/mL、3.125 mg/mL.五倍子对鲤鱼的48 h半致死浓度为1.1015g/kg,安全浓度为0.1102g/kg.五倍子具有较好的杀菌防病效果.     

大鲵温和气单胞菌的药物敏感性试验

为研究从患病大鲵内脏组织中分离出的温和气单胞菌对药物的敏感性,采用奈替米星等20种西药和五倍子等22味单方中草药及由单方组合而成的57味复方药进行了体外抑菌试验。结果表明:该菌对奈替米星等16种西药敏感,其抑菌圈直径为21.50~36.75 mm;对五倍子等11味中草药高度敏感,抑菌圈直径为20.20~37.25 mm;其中,抑菌效果位居前6位的五倍子、苦地丁、乌梅、五味子、诃子、黄芩等6味单方中草药(1 g/m L)的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.98、7.81、7.81、7.81、15.63、15.63 mg/m L,最小杀菌浓度(MBC)分别为1.95、15.63、15.63、15.63、31.25、31.25 mg/m L;对由该6味单方中草药按相同质量分数组成的54种复方药高度敏感,其中敏感性较强的复方1(五倍子、苦地丁、五味子、诃子、黄芩)、复方2(五倍子、苦地丁)、复方3(五倍子、苦地丁、黄芩)和复方4(五倍子、诃子、黄芩)的MIC分别为0.24、0.49、1.95、1.95 mg/m L,MBC分别为0.49、0.98、3.91、3.91 mg/m L。     

氟苯尼考对六种海洋致病弧菌的体外抗菌活性研究

测定了氟苯尼考等4种抗菌药对6种常见海洋致病弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。测试结果显示,氟苯尼考对6株弧菌的MIC值范围为2～4μg／mL,氯霉素为1～32μg／mL,土霉素为4～128μg／mL,恩诺沙星为0．125～1μg／mL;对多数弧菌氟苯尼考与氯霉素的抗菌活性相似。氟苯尼考对6株弧菌的MBC／MIC值范围为2-4,而氯霉素为2～16,表明氟苯尼考的杀菌效果优于氯霉素。对照药物恩诺沙星、土霉素的MBC／MIC值分别为1-2和2-8,恩诺沙星显示出优良的抗菌和杀菌活性。随着接种菌量增加,所测3种抗菌药的MIC随之升高;当接种量达到10^7ufu／mL时．药物对多数弧菌显示出微弱的作用。     

中草药抑制及杀灭水产病原维氏气单胞菌效果研究

为筛选出对水产病原维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)有抑制效果的中草药,通过琼脂打孔法研究石榴皮、黄柏、五倍子、苦地丁等42味中草药对维氏气单胞菌的抑制作用,并采用试管二倍稀释法测定对维氏气单胞菌抑制效果较强的11种中草药的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果表明,地榆、诃子、赤芍、白芍、五倍子、石榴皮、乌梅、女贞子、黄柏、木瓜和青黛等11种草药,对维氏气单胞菌的抑制作用较强,其中维氏气单胞菌对诃子、地榆及赤芍高度敏感,其抑菌圈直径分别为(19.75±0.74),(17.83±2.42)和(15.25±0.76)mm。诃子、地榆、赤芍三味中草药对罗氏沼虾维氏气单胞菌抑制及杀灭作用最强,其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为31.25和62.50 g/L。     

二氟沙星对3种海洋弧菌的抗菌后效应研究

采用试管二倍稀释法测定二氟沙星对鳗弧菌W-1、副溶血弧菌1614和溶藻弧菌1833的最小抑菌浓度(MIC);采用菌落计数法测定二氟沙星对鳗弧菌、副溶血弧菌和溶藻弧菌的抗菌后效应(PAE)。结果显示,二氟沙星在1×MIC、2×MIC和4×MIC浓度时,对鳗弧菌W-1、副溶血弧菌1614和溶藻弧菌1833的PAE分别为:0·64、1·09和2·16h;0·74、1·73和2·64;0·54、1·08和2·05h。二氟沙星对这3种弧菌具有明显的抗菌后效应,并且随着二氟沙星浓度的增加,抗菌后效应的时间也明显延长。     

麻醉剂丁香酚对鳗弧菌抑菌效果初步研究

水产麻醉剂丁香酚具有良好的抑菌和杀菌作用,不仅对食源性致病菌具有良好的抑制作用,也对水产致病菌具有潜在的抑菌效力。为探讨丁香酚对水产养殖业主要致病菌的抑菌作用,文章初步开展了丁香酚对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的抑菌效果研究。丁香酚质量浓度为6 400μg·mL^-1时,鳗弧菌培养平板中抑菌圈直径为(21.13±0.74) mm,表明鳗弧菌对此浓度的丁香酚表现为极敏。吸光度测定结果显示微孔中丁香酚质量浓度≥400μg·mL^-1时弧菌没有生长,表明丁香酚对鳗弧菌的最低抑菌浓度(MIC)为400μg·mL^-1。取400μg·mL^-1、800μg·mL^-1和1 600μg·mL^-1微孔中溶液涂抹于培养平板继续培养24 h,质量浓度≥800μg·mL^-1时鳗弧菌没有生长,表明最小杀菌浓度(MBC)为800μg·mL^-1。研究结果表明丁香酚对鳗弧菌具有良好的抑菌作用。     

两种弧菌对菲律宾蛤仔代谢途径影响的比较研究

采用基于核磁共振波谱技术的代谢组学技术,探索菲律宾蛤仔在受到鳗弧菌和灿烂弧菌感染的代谢物变化特征,构建菲律宾蛤仔对弧菌感染后的代谢网络调控图谱,并比较两种弧菌毒性效应的差异。试验结果表明,3种代谢物葡萄糖、谷氨酸、苏氨酸在两种弧菌感染时均发生了变化,表征鳗弧菌感染的代谢物为牛磺酸、精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸;而表征灿烂弧菌污染的代谢物为甜菜碱、二甲基甘氨酸、胆碱、谷氨酸、亚牛磺酸。     

Occurrence of Vibrio cholerae and Vibrio parahaemolyticus among milkfish farms in Zanzibar

ABSTRACT

Fishing is among the main economic activities of the people of Zanzibar. Few fish dealers are transforming this sector into mariculture. Among the farmed fish is milkfish. Diseases are among the limiting factors in the development of the mariculture industry. Among other zoonotic diseases, vibriosis is caused by bacteria from the genus Vibrio. This study aimed to establish the occurrence of Vibrio cholerae and Vibrio parahaemolyticus among milkfish farms in Zanzibar. A total of 380 milkfish were sampled. Swabs were collected from gills, intestine, and kidney of each sampled milkfish. Preliminary identification of V. cholerae and V. parahaemolyticus was done by biochemical tests. PCR was run on 16S rRNA, outer membrane protein W, and collagenase genes to confirm Vibrio species, V. cholerae, and V. parahaemolyticus respectively. Almost one-third (32.1%) of all sampled milkfish were found to contain targeted Vibrio; 18% and 29.5% of the sampled milkfish were positive for V. cholerae and V. parahaemolyticus respectively.     

灿烂弧菌和创伤弧菌的不同保存方法比较

比较了琼脂斜面、穿刺石蜡保存法和甘油冷冻冻存法保存灿烂弧菌和创伤弧菌的效果。结果表明,甘油冷冻冻存法和穿刺石蜡保存法的保存期显著比琼脂斜面法长,保存12月后各保存方法细菌的毒力都有不同程度的下降,甘油冷冻冻存法显著好于其它2种保存方法。     

鳗弧菌、溶藻胶弧菌外膜蛋白的分离及特性

分别用SDS、Sarkosyl及PMSF法分离制备鳗弧菌（Vibrio anguillarum）、溶藻胶弧菌（Vibrio alginolyticus）主要外膜蛋白（MOMP），通过SDS-PAGE分析比较2种弧菌主要外膜蛋白的组成结构。结果表明，SDS、Sarkosyl和PMSF法分离提取的鳗弧菌和溶藻胶弧菌外膜蛋白中，SDS-PAGE电泳图谱不同，鳗弧菌外膜蛋白分子量为27-138kD；溶藻胶弧菌外膜蛋白分子量为27-104kD，其中，45kD、30kD和27kD外膜蛋白为鳗弧菌和溶藻胶弧菌所共有。经比较，Sarkosyl法对2种弧菌外膜蛋白的提取效果较好。对3种方法提取的2种弧菌的主要外膜蛋白进行SDS PAGE后，分别与吸附后的兔抗鳗弧菌、抗溶藻胶弧菌血清的Western-blotting印迹显示，兔抗鳗弧菌血清与其菌株的外膜蛋白主要有3条免疫反应带，其分子量分别为97kD、51kD和30kD，说明其可能与鳗弧菌抗原的特异性有关；兔抗溶藻胶弧菌血清与其菌株的外膜蛋白主要有2条免疫反应带，其分子量分别为51kD和27kD，说明可能与溶藻胶弧菌抗原的特异性有关，而51kD外膜蛋白可能是2种弧菌共有的特异性抗原。     

抗哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌三联卵黄抗体的制备及体外抑菌效果的研究

为研究三联特异性卵黄抗体对哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌的体外抑菌效果,通过制备哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌三联灭活疫苗,免疫蛋鸡。收集鸡蛋制备卵黄抗体并检测其效价、纯度和特异性。通过免疫荧光、扫描电镜和体外抑菌实验初步探究其制备的三联特异性卵黄抗体对三种弧菌的体外抑菌效果。结果显示,ELISA检测特异性卵黄抗体效价高达1:51200,并维持5周;SDS-PAGE对分离纯化的卵黄抗体分析显示,随着纯化步骤的进行,卵黄抗体中的蛋白杂带逐渐减少,纯度变高。免疫荧光和免疫印迹实验表明,特异性卵黄抗体与抗原的结合具有较高的特异性。扫描电镜进一步观察发现,相比非特异性卵黄抗体,特异性卵黄抗体处理过的弧菌,菌体互相黏附在一起,菌体细胞表面粗糙,细胞壁破损。在体外抑菌实验中,特异性卵黄抗体对弧菌具有明显的抑制效果,且抑制作用呈现剂量依赖性。综上所述,本研究制备的三联特异性卵黄抗体能够与哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血弧菌发生特异性结合,通过体外实验发现,卵黄抗体通过凝集和黏附,破坏菌体细胞的完整性,从而发挥抑菌作用。