葡萄扇叶病毒RT-PCR检测技术研究

以扇叶病株为材料,根据病毒编码外壳蛋白的核苷酸序列,设计特异引物P_1(1,064—1,083),P_2(762—781),建立了以RNA为模板的GFLV的RT-PCR检测体系。PCR产物电泳谱带明显,与预期的引物应扩增321 bp片段完全吻合。并利用建立起来的技术体系,对田间葡萄进行了随机取样检测,取得了很好效果。此方法操作简单,检测周期短,准确率高,具有广泛和更进一步的应用价值。     

甘肃葡萄扇叶病毒和卷叶病毒的检测

采用 DAS-ELISA 检测方法对甘肃地区的葡萄主要品种进行扇叶病毒和卷叶病毒的调查和测定。结果表明,这两种病毒病在甘肃地区的主要葡萄产区均有发生。兰州地区和一些老的葡萄产区葡萄带病毒病较严重。通过对比植株下部枝条的幼叶、幼茎、老叶和老茎病原的检测结果,说明植株下部幼嫩组织是卷叶病毒最适的检测部位。     

葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因克隆和植物表达载体的构建

用RT-PCR法从葡萄扇叶病毒杭州分离物(GFLV-H)基因组RNA中扩增了该病毒分离物的外壳蛋白基因cDNA片段,并克隆到质粒pGEM-T-easy Vector.序列分析结果表明,该基因含有1515个核苷酸,编码504个氨基酸,其核苷酸和推导的氨基酸与GFLV法国分离物F13的同源性分别为88%和95%.目前该基因已成功地克隆到植物表达载体pBI121,经三亲交配导入到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中.     

湖南省葡萄扇叶病调查及检测研究

对湘西北、湘南、湘中和湘西等葡萄主产区的扇叶病发病及危害情况进行了调查,并通过生物学和分子生物学的方法对各地区的疑似病株进行了检测。结果表明：在湖南的葡萄主产区,葡萄扇叶病的感病品种较多,在夏黑无核、红地球、金星无核和金手指等品种上均有发生,但湘西的刺葡萄表现出对葡萄扇叶病有一定的抗性;感病症状总体上表现为叶片褪绿、黄化,叶缘锯齿变尖锐或形状不规则,并严重影响葡萄植株的生长,导致树势减弱、产量下降、果实品质变差;生物学检测结果显示,采集的54个样品,其中有52%的样品在千日红和本氏烟草上表现出系统性斑驳和变形;而分子生物学检测结果显示,54个样品中有29个样品检测到葡萄扇叶病病毒,以金星无核和红地球两个品种的检出率较高。     

葡萄扇叶病毒外蛋白基因克隆和植物表达载体的构建

用RT－PCR法从葡萄扇叶病毒杭州分离物（GFLV－H）基因组RNA中扩增了该病毒分离物的外壳蛋白基因cDNA片段，并克隆到质粒pGEM-T-easy Vector。序列分析结果表明，该基因含有1515个核苷酸，编码504个氨基酸，其核苷酸和推导的氨基酸与GFLV法国分离物F13的同源性分别为88％和95％。目前该基因已成功地克隆到植物表达载体pBI121，经三亲交配导入到根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）LBA4404中。     

葡萄扇叶病研究进展

葡萄扇叶病是危害葡萄最为严重的一种病毒病害,它广泛存在于世界各葡萄产区的所有品种上。一般果园,发病率在20％以上,严重者达80％以上。因该病危害造成葡萄每年减产20％-80％,且果实着色差、糖分低、品质劣,严重地影响了品种风味和酿酒质量,已引起葡萄生产和加工者的广泛注意。     

葡萄扇叶病世界研究近况

本文叙述葡萄扇叶病的世界研究近况,对其症状学特点、病原病毒特性、诊断技术、传播规律以及当前对此病的控防措施和关键问题予以阐述。文末讨论葡萄扇叶病研究存在的问题及今后研究方向。文中也介绍一些国内、包括作者等的研究近况。     

葡萄微茎尖培养及葡萄扇叶病毒的ELISA和探针检测

在建立‘藤稔’等５个葡萄品种离体培养快速繁殖体系的基础上，通过热处理和微茎尖脱毒培养获得了再生植株；并经过ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ和长臂光敏生物素标记ＧＦＬＶ－ＣＰ基因ｃＤＮＡ探针检测．结果表明白天３８℃夜晚３５℃处理脱除ＧＦＬＶ效果最佳；多次继代培养也有脱除ＧＦＬＶ的作用．从而首次获得了‘藤稔’、‘红地球’、‘９３０７’３个葡萄品种的脱除ＧＦＬＶ的试管苗．ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ与探针平行检测的结果还表明，ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测以Ｐ／Ｎ＜１作为阴性标准更为可靠     

应用ELISA法检测天津红小豆病毒类型

<正> 近年来,随着天津郊县外向型农业的发展,在国际市场久享盛誉的天津红小豆种植面积逐年增加。同时影响红小豆产量的重要因素之一,红小豆病毒病的危害也日趋严重。据1985—1989年的田间调查,红小豆病毒病发生的普遍率达100%,轻病田减产60%,重病田减产86%,绝收率达25%,产量损失十分严重。因天津过去未开展这方面     

用PCR和ELISA方法分析奶牛血清和奶中类乙型肝炎病毒

用人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）ＥＬＩＳＡ试剂盒检测８５份奶牛血清和９３份奶样。结果测出３３份血清为ＨＢｓＡｇ阳性，其中４价亦为ＨＢｅＡｇ阳性；２２份奶样为ＨＢｓＡｇ阳性，其中１１份亦为ＨＢｓＡｇ阳性。７个双阳性的样本，用针对ＨＢＶ表面抗原基因不同部位的两对引物作ＰＣＲ分析，结果未能扩增出特异片段，排除了奶牛ＨＢＶ血清学阳性是由人ＨＢＶ感染所致。     

甜樱桃病毒病的ELISA检测研究

对陕西省甜樱桃病毒病发生情况进行了ＥＬＩＳＡ检测研究。查明了李属坏死环斑病毒（ＰＮＲＳＶ）、李矮缩病毒（ＰＤＶ）、苹果褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）和苹果花叶病毒（ＡｐＭＶ）在甜樱桃上的感染情况,即ＰＮＲＳＶ的感染率最高,ＣＬＳＶ和ＡｐＭＶ的发生也比较普遍,ＰＤＶ的感染率较少。老园的病毒感染率及混合感染类型比幼园高且复杂,说明病毒在樱桃园内可以相互传播。在较老的栽培园中,ＰＮＲＳＶ、ＰＤＶ、ＣＬＳＶ和ＡｐＭＶ的总感染率高达６４．５％。     

酶联免疫吸附试验检测鸭瘟抗体的研究和应用

应用提纯的鸭瘟病毒作为包被抗原，建立了用于检测鸭瘟抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）间接法。试验结果表明，该法特异性高（与鸭病毒性肝炎等１３种病的阳性血清不发生交叉反应），与血清中和试验的符合率为１００％但其敏感性比血清中和试验至少要高１０００倍，且重复性好，结果可靠，用于大批量样品的检测大约经６小时即可获得结果，是一种适合于血清流行病学调查、进出口鸭对鸭瘟的检疫和对鸭群进行免疫抗体水平检测的敏感、快速、准确性高、特异性强、重复性好且简便实用的方法。     

用cDNA点杂交及ELISA测定大麦黄矮病毒及分子间互作

本文比较了ｃＤＮＡ点杂交与酶联免疫吸附试验在大麦黄矮病毒的鉴定、检测及病害诊断中的应用特点及价值，并利用这两种技术研究在混合侵染中不同病毒（株系）间所发生的一些互作。通过使用适当的抗体或。ｃＤＮＡ探针，这两种检测技术均能特异地测定大麦黄矮病毒。尽管ｃＤＮＡ点杂交具有更高的灵敏度，但酶联免疫技术是目前最理想的病毒快速检测方法。这两种方法结合后所产生的另一技术－免疫杂交技术可成功地检测自然条件下受混合侵染病株内病毒或株系间的相互作用，这些相互作用包括＂表型混合现象＂和＂反式壳体化＂等。本文还对自然条件下检测这种病毒间相互作用的意义进行了讨论。     

用酶联免疫吸附试验检测马铃薯卷叶病毒

本文介绍用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法快速检测马铃薯叶片及块茎内的马铃薯卷叶病毒(PLRV),检测叶片的最高稀释倍数为1/128,检测块茎的最高稀释倍数为1/64。马铃薯病株的顶部叶片和底部叶片的病毒含量不同,而又没有一定的规律性。马铃薯感染PLRV后可表现为底叶卷叶、部分全株卷叶或顶叶卷叶,有的品种无症;还有一部分植株虽然表现出各种卷叶症状,但并不是由PLRV所致。我院马铃薯育种圃内常用的杂交亲本的带毒率为31.21％;在黑龙江省的几个主栽品种上均可检测到PLRV。     

RT-PCR检测菊花B病毒的研究

根据菊花B病毒（CVB）的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织5和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,结果从感病组织中扩增出与预期的776bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将PCR产物插入pGEM-T载体克隆并测序,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到85％;将感病组织总RNA以10x梯度稀释成不同浓度,测出RT－PCR检测CVB的灵敏度为10^-4x;PCR产物克隆作为RT－PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT－PCR鉴定和检测技术。     

RT-PCR检测菊花B病毒的研究

根据菊花B病毒(CVB)的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,结果从感病组织中扩增出与预期的776bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将PCR产物插入pGEM-T载体克隆并测序,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到85%;将感病组织总RNA以10 x梯度稀释成不同浓度,测出RT-PCR检测CVB的灵敏度为10-4x;PCR产物克隆作为RT-PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT-PCR鉴定和检测技术.     

分子杂交检测核型多角体病毒

<正> 核型多角体病毒是昆虫病毒中研究最广泛的一个类群。作为有效的生物杀虫剂和很有潜力的真核生物基因工程载体,它受到人们普遍重视。为了更充分地开发,害虫生物防治新病毒资源和更有利地保护益虫,长期以来人们一直在寻找一种快速、准确、灵敏的检测核型多角体病毒的方法,目前一般应用的方法有:光镜法、电镜法和放     

小麦抗条点花叶病毒鉴定的症状学与ELISA测定技术

小麦不同生长阶段接种条点花叶病毒（ＷＳＭＶ）试验表明，利用寄主的症状反应和酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定小麦品种的抗病性是一致的；初次证明了ＢＷ１５５对耐病品种；其苗期与成株期抗病性均高于其它品种，对小麦生育后期感染ＷＳＭＶ产生的枯死斑过敏反应症状进行生物学接种试验，ＥＬＩＳＡ测定及超薄切片的电镜观察，表明枯死斑症状是寄主妻制病毒向健康绿色组织进一不扩展的保护性反应，枯斑大小及扩展速度与品种的抗     

应用间接酶联免疫吸附试验检测人参软腐细菌

通过间接酶联免疫吸附试验可以检测参土、田间腐烂参根和潜伏在外观无病参根内的软腐细菌。对人参软腐细菌检出的灵敏度为4×10~5细胞/ml。病、健参根组织提取液的稀释度为1/1000-1/2000。免疫球蛋白最适浓度为10μg/ml。应用人参细菌性软腐病菌株Ecc和Ps.c.分别免疫家兔得到相同效价(1:1280)的抗血清。