外源激素处理供体奶牛活体采卵生产胚胎的研究

选择6头3～6岁健康荷斯坦、空怀母奶牛随机分为3组,每组2头,分别用外源激素孕马血清促性腺激素（PMSG）、促卵泡素（FSH）、空白对照处理供体奶牛,4 d后应用B型超声波导引采卵, 以研究外源激素对活体采卵效率和体外生产胚胎的影响.试验结果表明：FSH组每头次平均可采卵泡12.07个,获可用卵母细胞5.57枚,与PMSG组比较差异显著（P＜0.05）,与对照比较差异极显著（P＜0.01）;PMSG组每头次平均可采卵泡为6.63个,获可用卵母细胞数2.96枚,与对照组比较差异不显著（P＞0.05）;各组活体采集的卵母细胞体外受精分裂率、囊胚率也无显著差异.表明可用外源激素处理供体奶牛活体采卵生产胚胎,但以FSH处理效果较好.     

二花脸FSH的高量表达对大白公猪睾丸的影响

促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)是一种动物垂体前叶嗜碱性细胞合成分泌的糖蛋白类促性腺激素.FSH在雄性动物体内的主要作用是刺激精子发生.本研究以15d和成年F1代转二花脸FSH公猪(Susscrofa)及其同日龄全/半同胞野生型公猪睾丸为材料,分析了其绝对重量和相对重量,制作了睾丸苏木精-伊红(HE)染色石蜡切片,统计了相关指标,通过qRT-PCR分析了生殖相关基因在睾丸中的表达量,与此同时,检测了睾丸中FSHβ和FSHR的甲基化率.睾丸绝对重量和睾丸脏体比分析结果表明,二花脸FSH的高量表达对大白公猪睾丸重量没有显著影响.睾丸HE染色石蜡切片分析结果显示,二花脸FSH的高量表达可以增加大白公猪睾丸中生殖母细胞的数量,对大白公猪睾丸组织结构无显著影响.qRT-PCR分析结果表明,二花脸FSH的高量表达没有影响内源生殖相关基因的表达.甲基化水平检测结果发现,二花脸FSH基因的高量表达对大白公猪睾丸中FSHβ和FSHR的甲基化水平没有显著影响.本研究结果表明,二花脸FSH的高量表达可以增加大白公猪睾丸中生殖母细胞的数量,从而提高大白公猪的生精能力,为研究精子发生过程提供参考依据.     

水牛促卵泡素受体(FSHR)基因5''''端侧翼序列的克隆与分析

促卵泡素(FSH)是动物脑垂体分泌作用于卵巢卵泡生长、发育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透过细胞膜,FSH必须与靶细胞膜上的促卵泡素受体(FSHR)结合,经过受体介导将信息传递到靶细胞内,才能发挥其生物学功能.目前国内外已对牛、山羊等多种动物的FSHR基因的Cdna序列进行了克隆测序,但是关于水牛FSHR基因5'端侧翼序列还未见报道.本研究对水牛FSHR基因5'端序列进行克隆和序列分析,其目的是寻找水牛FSH受体基因的SNP突变位点,从而为以后进行FSH受体基因的多态性分析和探索该受体基因在水牛繁殖中的可能作用打下基础.     

不同激素对高产荷斯坦奶牛超排效果的影响

比较不同激素对高产荷斯坦奶牛超数排卵效果的影响,结果发现:供试的3种促卵泡素(FSH)制剂中,加拿大生产的制剂(FOLLTROP IN-V)超排效果比中国科学院动物研究所、澳大利亚生产的FSH好,可用胚胎比率达94.2%,平均每头可用胚胎数达9.84±4.76枚;加拿大生产的FSH(FOLLTROP IN-V)进行荷斯坦奶牛超排处理效果好于美国S igm a公司生产的孕马血清(PM SG)(可用胚胎数,9.06±2.78枚/头vs 4.54±2.12枚/头);超排母牛授精后注射促排卵素3号(LHRH-A 3),Ⅰ级胚胎比率可达57.3%,明显高于促黄体素(LH)、绒膜促性腺激素(HCG)两组(Ⅰ级胚胎分别为17.4%和19.3%),表明LHRH-A 3可提高胚胎质量。     

表皮生长因子对卵泡刺激素促进的小鼠胚胎卵巢卵泡发育和雌二醇分泌的影响

FSH、EGF是参与卵巢功能调节的重要因素，关于EGF对FSH促进的胚胎卵巢卵泡发育和类固醇激素发生的影响报道甚少。本实验经单个卵巢的总卵泡数、生长卵泡数和5个最大卵母细胞的平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标，利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究EGF对FSH促进的小鼠胚胎卵巢卵泡发育和分泌雌二醇的作用。结果发现：①EGF＋FSH＋雄烯二酮（A）处理组的胚胎卵巢总卵泡数在培养第7－9d显著高于FSH＋A处理组，而且生长卵泡数和卵巢内5个最大卵母细胞平均直径在培养后期也显著高于FSH＋A处理组（P＜0.05);②FSH＋A处理组的胚胎卵巢在培养第7－9d分泌大量雌二醇，而GF和FSH联合使用时胚胎卵巢的培养早期雌二醇分泌水平显著低于FSH＋A处理组（P＜0.05）。结果提示EGF协同FSH促进小鼠胚胎卵巢卵泡体外生长发育；同时EGF抑制SH诱导的雌二醇分泌，其促卵泡发育作用可能与雌二醇的合成不相关联。     

家兔超数排卵的研究

为了寻求家兔合理的超排方案,构建获得家兔卵子和胚胎的实验平台,进行3个试验:Ⅰ比较不同剂量(40、50、60、70、80和90 IU)的孕马血清促性腺激素(PM SG)对家兔超排效果的影响;Ⅱ比较不同的促卵泡素(FSH)处理方法(恒量法和递减法)对超排效果的影响;Ⅲ比较手术后重复超排对家兔超排效果的影响。结果显示:(1)经过80 IU的PM SG超排处理后,日本长耳白兔卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数都显著高于40、50、60、70和90 IU组(P<0.05);(2)用FSH递减法、恒量法和80 IU PM SG超排处理时,日本长耳白兔卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数的差异不显著(P>0.05);(3)进行一次手术后重复超排,手术后重复超排的新西兰兔与术前超排效果相比,卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数的差异不显著(P>0.05);(4)激素处理不同品种的家兔,左右两侧卵巢排卵点数和平均回收卵子数的差异均不显著(P>0.05)。结论:(1)应用PM SG进行母兔超排处理时,80 IU剂量的超排效果比较好;(2)应用FSH时,采用递减法和恒量法得到的结果差异不显著,在实践中两种方法均可用;(3)适宜的PM SG剂量(80 IU)对兔子的超排效果与FSH相似,在兔子超排处理时,可用PM SG代替FSH;(4)两次手术过程并不会影响超排效果。     

玻璃化冷冻牛胚胎的分割移植实验初报

1 材料 供体牛为河北省临漳县狄丘牛场的西杂母牛和河北省邯郸市牛奶公司的中国荷斯坦母牛.受体牛为中国北方黄牛和中国荷斯坦青年母牛.促卵泡生成素(FSH)由中国科学院动物研究所产纯化FSH(批号:980001).玻璃化溶液为含40 %乙二醇、18 %聚蔗糖和0.3 mol蔗糖的mPBS液,即EFS40. 冲卵液为mPBS液.胚胎分割仪为瑞士产Leiz分割仪.     

水牛促卵泡素受体(FSHR)基因5′端侧翼序列的克隆与分析

促卵泡素(FSH)是动物脑垂体分泌作用于卵巢卵泡生长、发育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素。由于是生物大分子,不能透过细胞膜,FSH必须与靶细胞膜上的促卵泡素受体(FSHR)结合,经过受体介导将信息传递到靶细胞内,才能发挥其生物学功能。目前国内外已对牛、山羊等多种动物的FSHR基因的cDNA序列进行了克隆测序,但是关于水牛FSHR基因5′端侧翼序列还未见报道。本研究对水牛FSHR基因5′端序列进行克隆和序列分析,其目的是寻找水牛FSH受体基因的SNP突变位点,从而为以后进行FSH受体基因的多态性分析和探索该受体基因在水牛繁殖中的可能作用打下基础。由水牛血液中提取DNA,与根据牛FSH受体基因序列设计的特定引物进行PCR反应,以合成FSHR 5′端侧翼调控区,扩增的该片断经分离、回收和纯化后再插入到pMD18-T质粒中,筛选阳性克隆,将插入了FSHR 5′端侧翼端片断的质粒纯化后进行序列测定和分析,弄清核苷酸序列和假定的氨基酸顺序并通过GeneBank进行同源性分析。结果表明,PCR扩增获得的片段为939 bp,与中国西门塔尔牛该段序列相比,同源性为97.44%,在-720 bp处的1个碱基缺失;与山羊的FSHR基因比较,同源性为94.78%,在-625~-619 bp处有7个碱基的插入;在此激素反应元件3′端一段序列(-530~-526 bp)水牛和山羊的相同均为TGACC,而西门塔尔牛为CGACC,但三者5′端一段序列(-679~-675 bp)没有突变并且相同,均为GGTCA;与人和大鼠FSHR基因不同的是,在牛、水牛和羊的FSHR基因启动子区检索出了TATA盒基元和多个类CAAT盒序列,且在水牛、山羊和牛之间没有碱基差异。因此,对水牛FSHR基因转录启动和表达调控值得进一步研究。     

生殖激素与卵巢卵泡颗粒细胞凋亡

本文综述了促性腺激素释放激素、促卵泡激素、马绒毛膜促性腺激素、雌激素、雄激素、生长激素等生殖激素对动物卵巢卵泡颗粒细胞凋亡的影响。     

人促红细胞生成素基因和AcGFP1共表达真核表达载体的构建

人促红细胞生成素(human erythropoietin,hEPO)是一种由肾脏分泌的酸性糖蛋白激素。它是一种红细胞造血刺激因子,在医学临床,主要用于治疗肾性贫血,对其它各种疾病和     

硫酸铜对西门塔尔牛发情周期生殖激素分泌的影响

选用16头18月龄、体况良好、体重380±14kg的西门塔尔牛育成母牛,采用完全随机区组设计分为4组,研究日粮添加硫酸铜(0、8、16和24mg铜/kg)对母牛发情周期生殖激素分泌规律的影响。结果表明:与对照组比较,8mg/kg组发情周期促黄体素(LH)、促卵泡素(FSH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)水平显著提高(P<0.05);16mg/kg组有提高趋势,但差异不显著(P>0.05)。添加8mg铜/kg的硫酸铜对母牛发情周期生殖激素分泌有促进作用,加上基础日粮的含铜量,建议日粮以硫酸铜为铜源时铜水平为13.87mg/kg。     

GnRH主动免疫对雄性大鼠垂体-睾丸轴功能的影响

本研究用GnRH并列体二聚物(GnRH-TDK)主动免疫SD雄性大鼠观察其对大鼠垂体-睾丸轴功能的影响,以探讨GnRH主动免疫去势的分子机理.24只性成熟SD雄鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组雄鼠于12周龄时初免,8周后加免,对照组雄鼠不做任何注射.每两周采集血液放免法检测血清抗体滴度及激素含量变化.加免后4周脱颈处死所有雄鼠,收集垂体、睾丸实时荧光定量PCR分析相关生殖基因mRNA的变化.结果显示,GnRH主动免疫后12只免疫雄鼠中11只血清GnRH抗体滴度显著上升,血清LH、FSH及睾酮(T)均极显著下降到检测限附近或以下(p＜0.01),同时睾丸严重萎缩,其重量及体积下降到对照组睾丸的20％(p＜0.01),组织切片显示,曲细精管上皮组织严重受损,管内仅有少数退化的精原细胞.与对照组相比,GnRH主动免疫极显著下调雄鼠垂体GnRH受体、LH-β、FSH-β和睾丸LH受体及FSH受体mRNA表达水平(p＜0.01).由此可见,GnRH主动免疫可通过下调垂体GnRH受体、促性腺激素亚基及睾丸LH、FSH受体基因表达,影响垂体-睾丸轴的功能.     

抑制素A对牦牛颗粒细胞FSH、LH及其受体表达的影响

为了探明抑制素A(INHA)对牦牛卵泡颗粒细胞中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)与其受体结合发挥的作用,通过体外培养牦牛卵泡颗粒细胞,采用免疫荧光技术(IF)检测促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在颗粒细胞中的分布情况,用不同浓度外源性INHA(0、1.25、2.5、5、10、20 ng·mL^-1)作用12 h后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测颗粒细胞中FSHβ、LHβ、FSHR、LHR基因的表达情况,采用酶联免疫分析试验(ELISA)检测细胞内外FSH、LH的含量。结果显示,FSHR和LHR在颗粒细胞质与细胞核中均有表达。FSHβ和LHβ基因在颗粒细胞中的表达随INHA浓度的增大呈先降后升的趋势;INHA浓度接近5 ng·mL^-1时,FSHβ表达最低;INHA浓度接近10 ng·mL^-1时,LHβ表达最低;FSHR和LHR基因的表达与INHA浓度呈负相关。INHA浓度接近5 ng·mL^-1时,颗粒细胞内外FSH含量最低;INHA浓度接近10 ng·mL^...     

促花生长调节剂(Ethrel、PP333)和夏剪成花机理的初步研究

应用放射免疫法测定了IAA、ABA、CTK和C_2H_4等4种内激素的含量。结果表明,促花生长调节剂和夏剪处理的成花机理之一是造成枚条茎尖有利于花芽分化的激素环境,即CTK类物质和内源乙烯含量较高,ABA适中,生长物质(IAA—GA_3)含量下降,建立了一种以促花激素占优势的激素平衡系统。此结果为进一步揭示果树花芽分化机理和制定控制花芽分化的技术措施提供了重要的科学依据。     

促性腺激素及卵泡液协同对牛腔前卵泡体外发育的影响

将100个φ100～150μm牛腔前卵泡,随机分成8组,每组12～13个卵泡,在McCoy's 5a无血清培养系统研究了促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)有、无两种情况下,添加0、10%、15%及20%牛卵泡液(BFF)对牛腔前卵泡的体外生长、发育、存活及雌二醇(E2)分泌的影响.结果显示,在无促性腺激素下,添加不同浓度BFF对牛腔前卵泡体外发育无明显促进作用(P>0.05),但可刺激体外培养腔前卵泡的E2分泌.当有10 ng/mL LH和50 ng/mL FSH存在下,培养不同时间腔前卵泡的发育率、存活率,各卵泡液组均高于对照组,其中10%BFF组腔前卵泡培养6 d时发育率为(78.52%)与对照组(49.28%)差异显著(P<0.05),培养12 d腔前卵泡φ增长值33.7±4.8μm,显著高于对照组及其它处理组(P<0.01),同时在培养9 d时,有一枚卵泡成腔;各添加卵泡液组的E2测定值更高,其中添加10%BFF组中φ>100μm腔前卵泡在培养6 d时其E2分泌量达最高值48.96±1 1.54 pg/mL.表明FSH、LH存在下,培养液中加入10%BFF可显著提高腔前卵泡在体外的生长、发育、存活和E2分泌及诱导卵泡腔的形成.     

哺乳动物原始卵泡生长启动的调控

哺乳动物卵泡发育是一个被众多内分泌、旁分泌和自分泌因素精确调控的生理过程。原始卵泡生长启动可能受卵巢内在因子，如生长因子等的调控，而不是通常认为的FSH(促卵泡素)；原始卵泡细胞连接和原始卵泡的细胞(卵母细胞和颗粒细胞)之间相互作用也参与调节原始卵泡的生长启动     

日粮不同硒水平对公猪繁殖及精浆营养生化参数的影响

选择年龄、体重、精液质量较一致、正在使用的健康壮年长白公猪5头,采用5×5正交拉丁方试验设计,在不同阶段分别饲喂含硒量为0.05mg·kg-1(处理1)、0.15mg·kg-1(处理2)、0.25mg·kg-1(处理3)、0.35mg·kg-1(处理4)、0.45mg·kg-1(处理5)日粮,研究硒对公猪繁殖参数、精浆生殖激素、精浆营养生化参数的影响。结果表明:(1)处理1公猪精子畸形率显著高于处理4公猪精子的畸形率(P<0.05);(2)处理4公猪精浆促卵泡生成素(FSH)、睾酮(T)的浓度显著高于处理1公猪精浆FSH、T的浓度(P<0.05);(3)处理4公猪精浆的谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性显著高于处理1公猪精浆的GSHPx活性(P<0.05);(4)采精量、精子密度、精子活率、精液pH值、精浆促黄体生成素(LH)浓度、精浆尿素含量、精浆总蛋白含量,在不同处理条件下均没有显著的差异(P>0.05);(5)精子活率、精子畸形率、精浆FSH浓度、精浆LH浓度、精浆T浓度、精浆尿素的含量、精浆的GSHPx活性与日粮硒含量之间均存在着一定的规律性:即在一定范围内(0.35mg·kg-1),它们的变化随日粮硒含量的增加而增加或降低,超出该范围则降低或升高;(6)综合上述结果,长白公猪日粮硒含量以0.35mg·kg-1较为适当。     

猪卵母细胞在不同条件下的体外成熟培养

研究了不同时间段添加外源激素及不同基础培养液和血清有无对猪卵母细胞体外成熟的影响。实验包括（1）猪卵母细胞以TCM199＋10％FBS＋10IU／mL pregnant more serum gonadotrophin（PMSG）＋10IU／mL human chorion gonadotrophin（hCG）＋2．5IU／mL follicle stimulate hormone（FSH）为成熟培养液体外培养44h，前22h在培养液中加激素，后22h不加激素及前22h不加激素，后22h添加激素和添加激素连续培养44h；（2）以实验（1）中激素添加的方案在体外添加激素连续培养44h，对不同基础培养液（TCM199粉剂、TCM199原液和改良TCM199（mM199））对猪卵母细胞体外成熟进行了研究；（3）以实验（2）中筛选出的mM199组为成熟培养液对比血清有无对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明，实验（1）中3种激素添加不同时间段其成熟率分别为45．67％、45．29％和46．07％，对猪卵母细胞体外成熟无显著影响（P〉0．05）；实验（2）中，mM199组的成熟率（54．10％）高于TCM199粉剂组的成熟率（46．16％）及TCM199原液组的成熟率（47．14％），但差异不显著（P〉0．05）；实验（3）中无血清组的成熟率（67．10％）高于有血清清组的成熟率（52．22％），差异显著（P〈0．05）。由此表明，mM199＋10IU／mL PMSG＋10IU／mL hCG＋2．5IU／mL FSH是一种适合于猪卵母细胞体外成熟的培养液，体外成熟率达67．10％。     

赛乐硒对西门塔尔母牛发情周期生殖激素分泌的影响

以赛乐硒为硒源,研究了日粮(混合精料+玉米秸秆)添加不同水平硒(0、0.3、0.6和0.9mg/kg)对西门塔尔牛育成母牛发情周期生殖激素分泌的影响。结果表明,赛乐硒提高了母牛发情周期LH、FSH、P4、E2水平,0.3和0.6mg/kg组显著高于0.9mg/kg和对照组,0.9mg/kg组显著高于对照组(P<0.05)。由此推断0.6mg/kg处理对发情周期生殖激素分泌有显著促进作用,兼顾基础日粮含硒量,建议日粮硒水平为0.67mg/kg。