我国部分地区奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌血清型及毒力调查

为了解我国奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌(S.aureus)流行血清型和不同血清型菌株的毒力情况,本研究采用玻板凝集和双重PCR方法分别对北京、山西、内蒙古、山东、浙江和新疆奶牛乳房炎乳样中分离的191株S.aureus进行血清分型并从各血清型中随机选取100株菌以小白鼠进行毒力测定.结果表明:这些地区牛源S.aureus中,336PS型为流行血清型,占60.2％(115/191),CP8型占19.4％(37/191),CP5型占11.5％(22/191),未分型菌株占8.9％(17/191).毒力测定显示:336PS、CP8和CP5型菌株中强毒力菌株分别占65.1％、62.9％及61.9％,未分型菌株中强毒力菌株为22.2％.该调查为我国奶牛乳房炎S.aureus疫苗菌株的筛选提供了依据.     

乳房炎奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及PFGE分型研究

作者针对临床及亚临床乳房炎奶牛乳汁中金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因进行检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因分型,比较2种类型乳房炎金黄色葡萄球菌分离株的差异.无菌法采集奶样,采用国际标准方法从中分离金黄色葡萄球菌,用多重PCR方法扩增nuc基因和mecA基因以确证金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).进一步用PCR方法检测SA的各种毒素基因(SEs、ETs、TSST 1和PVL基因等).利用限制性内切酶Sma Ⅰ对SA基因组DNA进行酶切和PFGE分析,最后利用BioNumerics软件进行聚类分析.结果:19.3％(23/119)的临床乳房炎奶样和14.8％(26/176)的亚临床乳房炎奶样确定为金黄色葡萄球菌阳性样品,分别从中分离鉴定出43株和26株金黄色葡萄球菌,其中临床乳房炎分离株中有5株为mecA基因阳性.临床乳房炎奶牛奶样中检测到SA的SEA、SEB、SED、SEJ和PVL毒素基因,检出率分别为3.8％(1株)、11.5％(3株)、19.2％(5株)、7.7％(2株)和31.2％(10株);亚临床乳房炎奶牛乳样中仅检测到SA的SEA和PVL毒力基因,检出率分别为7.0％(3株)和84.1％(37株).表明临床与亚临床乳房炎奶牛乳汁中SA菌株携带的毒素基因不一样,SEs可能是临床乳房炎菌株的重要致病基因,PVL可能是亚临床乳房炎菌株的重要致病基因.69株SA使用Sma Ⅰ酶切分型后,可分为7个大簇、50个基因型,来源相同的SA分型后大部分位于同一簇内.临床乳房炎奶牛乳汁中检测到MRSA菌株,PVL基因在亚临床乳房炎中的检出率为临床乳房炎的2.7倍.PFGE方法能较好的区分临床乳房炎和亚临床乳房炎的SA分离菌株.     

乳房炎源性金黄色葡萄球菌生物被膜检测及药敏试验

金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎的最主要病原之一,由其引起的奶牛乳房炎发病率高、防治困难,常常会给奶业造成巨大经济损失,对食品安全造成巨大威胁.以新疆阿克苏地区奶牛乳房炎性金黄色葡萄球菌分离株为研究对象,详细观察了菌株在刚果红培养基上的形态,并通过K-B扩散法分析了5株金黄色葡萄球菌乳房炎分离株对19种抗生素的耐药情况.结果表明,5株金黄色葡萄球菌均具有生物被膜形成能力,且对青霉素、链霉素、氨苄西林和四环素等常用抗生素完全耐药,对万古霉素、环丙沙星、诺氟沙星、阿米卡星等抗生素中度敏感,而对恩诺沙星、头孢西丁和头孢噻肟3种抗生素高度敏感.研究结果提示,乳房炎性金黄色葡萄球菌具有较强的耐药性,而这种耐药性可能与其生物被膜形成有关.     

金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖的提取纯化及生物学特性研究

<正>金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为环境常在菌,是人和动物的重要致病菌,是奶牛乳房炎的主要致病菌之一。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离到的致病菌近一半是金黄色葡萄球菌,这些分离菌株中94%~100%含有荚膜多糖(Cp)[1]。金黄色葡萄球菌荚膜多糖共有11种血清型,其中5型和8型荚膜多糖约占金黄色葡萄球菌临床分离菌株的     

上海地区奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为了获得上海地区奶牛乳房炎病原菌及其药物敏感性的系统资料并为指导临床合理用药和提高奶牛乳房炎防治效果提供理论依据,本研究对在上海郊区4个奶牛场采集的临床型和隐性乳房炎患牛的126份奶样进行细菌培养、分离鉴定和药敏试验.共分离到萄葡球菌,无乳链球菌,大肠杆菌3种主要病原菌107株,其中金黄色葡萄球菌74株,占分离菌株的69.16%;无乳链球菌27株,占分离菌株的25.23%;病原菌单独感染率为48.78%,其中金黄色葡萄球菌的单独感染率达39.02%;病原菌混合感染率占51.22%,多为金黄色葡萄球菌和无乳链球菌混合感染.主要病原菌对头孢拉定、环丙沙星、庆大霉素敏感,对大多数抗菌素产生了不同程度的耐药性,对氨苄青霉素产生了完全耐药性.     

奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌溶原性噬菌体的诱导及其裂解能力分析

为研究奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌中溶原性噬菌体的存在情况及其裂解能力,对采集的45份临床型乳房炎乳样进行金黄色葡萄球菌分离及PCR鉴定,通过丝裂霉素C对分离出的金黄色葡萄球菌进行诱导溶原性噬菌体,对诱导出的噬菌体进行纯化并测定其裂解能力.结果表明分离到了16株金黄色葡萄球菌,分离率为35.56％(16/45);诱导出了...     

生产群奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因检测及PFGE分型研究

隐性乳房炎患牛与健康牛外观无异,不易判断,对奶牛业造成的损失严重.金黄色葡萄球菌是引起隐性乳房炎的重要病原菌,准确判断金黄色葡萄球菌型隐性乳房炎是预防和控制乳房炎的重要途径.目前国际上普遍采用乳中体细胞数(SCC)作为检测隐性乳房炎的主要指标,但是约40％的金黄色葡萄球菌型乳房炎牛乳汁中SCC低于20万/mL.笔者依据相邻两月SCC差值高低,采集两个奶牛场荷斯坦牛生产群第一胎泌乳牛奶样65头份,从中检出有6头份含金黄色葡萄球菌.用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的特异基因nuc和mecA,结果发现,nuc基因检出率为100％(12/12),未检测到mecA基因.进一步用多重PCR方法检测金黄色葡萄球菌各种毒素基因,其中PVL基因在高SCC与低SCC奶样中的检出率分别为33.3％和100％,差异显著,这可能与PVL破坏白细胞有关.PFGE分型结果表明,所检测到的金黄色葡萄球菌可分为4个簇、5种类型,其中P2型(PVL)为流行株.结果提示,在荷斯坦牛生产群中,如果奶牛产奶量有所下降而SCC也不高时,应辅以分子检测手段来判断是否患有金黄色葡萄球菌型隐性乳房炎.     

奶牛乳房炎疫苗研究进展

奶牛乳房炎是奶牛乳腺组织炎症，主要为乳腺组织感染病原微生物所致，是奶牛的常见病、多发病。引起奶牛乳房炎的致病菌约为一百五十多种，以金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌为主，约占整个奶牛乳房炎病例的９０％以上。利用疫苗来控制传染性疾病是一种经典的预防手段。利用疫苗防治奶牛乳房炎有很多优点：首先，没有乳汁残留问题；其次，疫苗有助于降低乳腺感染的严重程度，控制亚临床型乳房炎；最后是操作简便，费用低廉。１ 金黄色葡萄球菌疫苗、在乳房炎致病菌中金黄色葡萄球菌在最为广泛，在乳腺组织防御系统中，中性粒细胞对金黄色…     

宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性分析

为了解宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药情况,采用药敏纸片扩散法,测定了50株奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌对常用的17种抗茵药物的耐药性.同时采用产色头孢菌素法进行β-内酰胺酶的检测,并采用苯唑西林纸片法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检测.结果表明,所有菌株除了对利福平、万古霉素100％敏感以外,对其他15...     

石河子地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的主要致病菌之一,为调查引起新疆石河子地区规模化奶牛场奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的感染情况及其对常用药物的敏感性,于石河子地区部分奶牛场采集85份临床型或隐性乳房炎奶牛的奶样进行金黄色葡萄球菌的分离、鉴定及耐药性试验。结果表明:从85份奶样中分离到9种共计127株细菌,经选择性培养基培养、生化试验和16S rRNA PCR鉴定,其中60株为金黄色葡萄球菌,占47.24%;还有腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌属、假单胞杆菌属、肠球菌属等。药敏试验结果表明:所有菌株对杆菌肽、青霉素、头孢氨苄和强力霉素高度耐药,耐药率分别为100%、71.67%、66.67%和76.67%;对氯霉素、氟苯尼考和阿米卡星的敏感率分别达80.00%、83.33%和66.67%;除此之外也有一些菌株对新霉素表现为既不明显耐药也不敏感现象。     

新疆部分地区奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

[目的]为了解本地区奶牛乳房炎大肠杆菌的流行及耐药情况。[方法]对新疆部分地区奶牛乳房炎大肠杆菌进行分离培养、染色镜检、荧光PCR鉴定,并用纸片法对分离菌株开展药物敏感试验。[结果]从200 份奶牛乳房炎样品中分离出63 株大肠杆菌,分离率为31.5%。分离菌株对青霉素耐药率最高,达到了93.65%,对美罗培南敏感率最高,达到了98.14%,对其他抗生素均有不同程度的耐药。[结论]新疆部分地区奶牛乳房炎中大肠杆菌广泛流行,具有较高的耐药性。     

新疆库尔勒市某奶牛场奶牛隐性乳房炎情况调查

为了检测和调查新疆库尔勒市某奶牛场泌乳奶牛乳房炎的发病率,对该奶牛场养殖的32头泌乳期奶牛用凝乳法进行了隐性乳房炎检测。结果表明,隐性乳房炎奶牛阳性率为40.63%,且乳房炎阳性率随奶牛使用年限的增加而增加;用挤奶机器挤奶的奶牛乳房炎阳性率高于手工挤奶,后乳区的乳房炎阳性率高于前乳区。     

新疆垦区奶牛乳房炎致病菌的调查

本试验选取新疆垦区七个试验牛场,临床调查和试剂诊断,检测奶牛712头,采集奶牛乳房炎阳性乳样314份。其中,奶牛隐性乳房炎阳性检出率平均为36.3%,临床性奶牛乳房炎为16.7%;采集阳性奶样经试验分离鉴定,革兰氏阳性菌仍是引起奶牛乳房炎的主要致病菌,但金色葡萄球菌已基本取代链球菌成为主要的致病菌,其检出率为78.98%。另外,常见环境性致病菌如沙门氏菌、大肠杆菌已明显减少,检出率仅为21.1%和9.24%。相反,绿脓杆菌和蜡样芽孢杆菌的检出率明显增加,其检出率为5.41%和11.15%,而且绿脓杆菌和隐球菌已经成为引起临床性乳房炎爆发的两种新的病原,其中隐球菌已经成为造成顽固性乳房炎的又一种新型病原。     

新疆卡拉库尔羊梅迪/维斯那病毒感染的病理学观察

对来自3个自然感染梅迪/维斯那病毒羊场的7只新疆卡拉库尔羊进行病理学研究。在临床观察期间,试验羊仅出现轻微的与梅迪/维斯那病毒有关的临床症状。病理组织学观察表明,5例血清学阳性羊发生了不同程度的乳腺病理学变化,与其他器官的组织切片观察比较,未见到淋巴组织样间质性肺炎(LIP)、脉管炎、关节炎及滑膜炎病变,表明乳腺是最敏感的靶器官。根据邓普辉等对乳腺炎严重度和分型的描述,新疆卡拉库尔羊乳腺炎病变的严重度均低于其他毒株感染的乳腺炎,从病理学上证实新疆卡拉库尔羊为梅迪/维斯那病毒的低敏感品种。     

不同地区3个奶牛场临床型乳房炎细菌病原种类分析

本试验通过对不同地区3个奶牛场临床型乳房炎细菌病原的分离鉴定,分析其种类和感染情况,并结合牧场环境状况和管理方式,提出控制乳房炎的建议.从中国福建、新疆、重庆3个不同规模化奶牛场采集61份临床型乳房炎乳样,采用传统微生物鉴定方法与PCR技术进行细菌分离鉴定.结果表明,61份临床型乳房炎乳样中单一感染44份(72.13%),混合感染15份(24.59%);共分离到细菌80株,经传统微生物鉴定方法与PCR技术鉴定主要为大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌,其中传染性微生物13株(16.25%)、环境性微生物46株(57.50%)、机会性微生物11株(13.75%)、其他微生物10株(12.50%);3个奶牛场临床型乳房炎仍以单一感染为主,混合感染占有一定的比例,传染性致病菌和环境性致病菌为主要致病菌.在实际生产中,规模化牧场可以通过对乳房炎病原菌的分离鉴定来摸清牧场奶牛乳房炎的感染情况和致病菌种类,结合生产实际有助于了解牛群管理情况,发现问题并加以改善,更好的控制乳房炎的发生.     

新疆克拉玛依地区奶牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定

用兰州乳房炎检测试剂(Lanzhou mastitis test,LMT)对克拉玛依规模化奶牛场进行了奶牛隐性乳房炎流行病学调查。结果显示,该地区奶牛隐性乳房炎的发病率为70.43%(543/771)。对543份阳性牛乳样品进行了病原菌的分离鉴定,结果发现,阳性乳样品中细菌分离率达89.13%(484/543),葡萄球菌、链球菌、肠杆菌和棒状杆菌为主要致病菌,且多为几种致病菌的混合感染。     

Analysis of Clinical Mastitis Pathogenic Bacterial Species in Three Dairy Farms of Different Areas

In order to control mastitis,clinical mastitis pathogenic bacterial species of three dairy farms in different areas were isolated and identified.The types and infection condition of pathogenic bacteria,environmental conditions and management methods of the farms were analyzed.61 clinical mastitis milk samples from three different large-scale dairy farms in Fujian,Xinjiang,and Chongqing were collected for bacterial isolation and identification using traditional microbial identification methods and PCR technology.Among clinical mastitis milk samples collected in this trial,single infection sample was 44 (72.13%)and mixed infections sample was 15 (24.59%).80 bacteria were isolated,mainly E.coli,Staphylococcus and Streptococcus,including 13 strains of infectious microorganisms (16.25%),46 strains of environmental microorganisms (57.50%),11 strains of chance of microorganisms (13.75%),10 strains of other microorganisms (12.50%).Clinical mastitis in three dairy farms were still given priority to single infection,and mixed infection occupies certain proportion,with infectious pathogens and environmental pathogens as the main pathogenic.In the actual production the dairy cow mastitis infection and pathogen species could be carried out through the isolation and identification of mastitis pathogens in large-scale dairy farms.It was helpful to identify the herd management problems and make improvements to better control the occurrence of mastitis combining with the actual production conditions.     

新疆石河子地区某规模化奶牛场乳房炎患病率调查

对新疆石河子地区某规模化奶牛场的712 头澳系荷斯坦泌乳牛进行乳房炎患病率调查。调查结果显示,40 头奶牛患临床型乳房炎,患病率为5.62%。从剩余的未表现出临床乳房炎症状的672 头奶牛中随机选出180 头奶牛,共682 个乳区（720 个乳区中有38 个瞎乳头）,分别进行兰州乳房炎检测（LMT）和乳样体细胞数（SCC）检测。经LMT诊断发现,180 头奶牛中有56 头患隐性乳房炎,患病率为31.11%;经SCC检测发现,180 头奶牛中有60 头患隐性乳房炎,患病率为33.33%。数据分析发现：各乳区患乳房炎阳性率差异不显著（P>0.05）,说明各乳区阳性率之间没有必然规律;6岁以上奶牛的乳房炎患病率与2~3岁、4~5岁的患病率相比差异显著（P<0.05）,说明6岁及以上奶牛乳房炎的患病率要高于2~3岁、4~5岁奶牛;6胎及以上的奶牛乳房炎患病率与其他胎次之间差异极显著（P<0.01）,说明6胎及以上奶牛的乳房炎患病率要远高于1胎、2胎、3胎、4胎、5胎奶牛。     

新疆褐牛乳房炎抗性相关基因的表达及生物信息学分析

文章旨在分析新疆褐牛乳房炎抗性相关基因的分子生物学功能，为分子标记辅助育种工作在新疆褐牛乳房炎抗性性状中的研究奠定理论基础。试验采用DAVID 6.8软件对课题组前期研究及相关文献报道的乳房炎抗性相关基因（共20个基因）进行功能GO富集及KEGG信号通路分析。采用String 10.0数据库进行蛋白相互作用网络分析，结合生物信息学分析和相关文献的研究结果，挑选出JAK2和STAT5A基因，通过使用实时荧光定量PCR技术检测JAK2、STAT5A基因在不同乳房健康程度的新疆褐牛血液中的相对表达量。GO富集分析得到，20个基因主要涉及细胞膜、免疫应答和调节防御反应等生物过程；KEGG富集分析发现，这些基因主要参与JAK-STAT信号通路、趋化因子信号通路、ErbB信号通路等；PPI分析发现，20个基因中有8个基因之间存在直接或间接联系；实时荧光定量试验发现，JAK2、STAT5A基因在健康新疆褐牛血液的表达量极显著或显著高于患乳房炎新疆褐牛（P<0.01；P<0.05）。通过生物信息分析和实时荧光定量试验，进一步从分子水平探讨了不同乳房健康程度的新疆褐牛与JAK2、STAT5A基因表达之间的内在联系。     

金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎多价疫苗的研制和免疫效果评价

为研制用于预防金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的免疫疫苗,使用4株血清型为外膜多糖336型(336PS)、荚膜多糖5型(CP5)和荚膜多糖8型(CP8)强毒力金黄色葡萄球菌试制出金黄色葡萄球菌多价疫苗,并通过抗体水平监测、攻毒保护试验以及两个牧场的田间试验对免疫效果进行了评价。抗体水平监测显示,首免后30 d即可产生较高的抗体水平,二次免疫后有效抗体水平可持续到产后210 d;人工攻毒保护试验显示,疫苗对金黄色葡萄球菌引起的临床型乳房炎的保护率为89%;田间试验结果表明,该疫苗对奶牛临床型乳房炎的保护率在75.2%～83.3%之间,对隐性乳房炎的保护率在49.9%～52.2%之间,免疫组日产奶量较对照组平均提高1.26 kg以上。上述结果表明,所试制的疫苗可以显著降低泌乳牛金黄色葡萄球菌引起的临床型和隐性乳房炎发病率并提高产奶量。