用荧光染色法研究山羊瘤胃原虫对细菌吞噬速率的初报

 【目的】采用荧光染色标记细菌（fluorescence labeled bacteria,FLB）技术,研究山羊瘤胃中原虫对细菌的吞噬速率。【方法】利用4只装有永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊,采集瘤胃液以获取瘤胃原虫和细菌。试验设置清洗原虫祛除瘤胃自由细菌的荧光全标组（WFLB）及未清洗原虫保留瘤胃自由细菌荧光标记组（FLB）。【结果】WFLB组和FLB组的吞噬速率分别为398.4 cells/(cell•h)和230.4 cells/(cell•h),换算为细菌N为：2.15 pg N/(cell•h)/和1.24 pg N/(cell•h)。【结论】每天每头羊由原虫在瘤胃内循环中带出的细菌N损失在WFLB组和FLB组分别估计为103.2 mg N/(d•头)、59.5 mg N/(d•头),或者细菌蛋白损失为0.645 g/(d•头)和0.372 g/(d•头)。结果同时表明,荧光染色标记技术可以应用于瘤胃原虫对细菌吞噬速率的研究。     

体外法研究不同油脂对瘤胃原虫吞噬细菌微循环的影响

【目的】研究体外培养条件下,不同油脂对瘤胃原虫吞噬细菌微循环及微生物群体的影响。【方法】3头瘤胃瘘管山羊提供瘤胃液,分别以菜籽油(A)、豆油(B)、玉米油(C)和花生油(D)为底物培养瘤胃微生物,同时设空白对照组,培养10h时用荧光标记瘤胃细菌法进行原虫吞噬细菌试验。【结果】原虫密度以对照组最高,显著高于A、B、C组(P0.05);细菌密度以B组最高,为4.906×109cells·mL-1,显著高于对照组(P0.05);原虫蛋白在组间差异不显著(P0.05),细菌蛋白组以B组最高,B、C、D均高于对照组(P0.05)。各组原虫的吞噬速率分别为:267.6(对照组)、196.2(A组)、244.4(B组)、274.4(C组)、285.4(D组)cells/(cell·h),组间差异显著(P0.05)。吞噬细菌N的速率分别为1.445、1.059、0.320、1.482、1.541pgN·(cell·h)-1。【结论】估算每天每头山羊细菌蛋白循环量分别为121.64(对照组)、56.64(A组)、78.39(B组)、87.04(C组)和95.06(D组)mg蛋白·(d·头)-1,B组较低,仅为对照组的64.45%,且该组微生物量最大。在本试验的基础上认为4%的豆油对微循环的调控效应最好。     

瘤胃细菌、原虫和真菌降解植物细胞壁的相对贡献及其互作

采用体外产气量法 ,以球磨与未球磨玉米秸细胞壁为底物 ,对瘤胃微生物不同区系降解植物细胞壁的相对贡献和发酵特征进行了研究。用化学试剂和抗生素来分离瘤胃细菌、原虫和真菌 ,并设计下列微生物区系 :全瘤胃液 (WRF)、细菌 (B)、原虫 (P)、真菌 (F)、细菌 +原虫 (B +P)、细菌 +真菌 (B +F)、原虫 +真菌 (P +F)和负对照(CON)。结果表明 ,细胞壁经球磨后可以显著提高瘤胃微生物的产气量和降解率 (P <0 .0 1) ,但不改变发酵类型 ;不同微生物区系的产气量和降解率具有极显著的差异 (P <0 .0 1) ,WRF的产气量和降解率最高 ,其次是混合培养(B +P、P +F、B +F) ,而单培养 (B、P、F)的最低 (P <0 .0 1)。结果说明植物细胞壁在瘤胃内的降解是在细菌、原虫和真菌的协同作用下完成的 ,对植物细胞壁的降解程度可能不是某一种或二种微生物所能及第的。B +P的产气量和降解率仅次于WRF ,表明瘤胃细菌和原虫在降解植物细胞壁过程中存在协同效应 ,对细胞壁降解的贡献率较大。另外 ,随着产气量和降解率的提高 ,发酵液的pH值降低、总VFA、氨态氮和甲烷气体的含量升高 ,进一步证明植物细胞壁的发酵程度提高了。     

ISCA对瘤胃原虫和微生物蛋白质含量及氨基酸组成的影响

在6只装有瘤胃瘘管的绵羊上，观察了一种含铵的工业废液（ISCA）作为非蛋白氮饲料对瘤胃蛋白南代射的影响。采用自身对照，测定添喂ISCA前后瘤胃原虫、微生物细胞蛋白质含量和它们的氨基酸组成，并对血液及瘤胃内的一些理化指标进行了监测。结果表明，日添喂40ml ISCA，羊体温、呼吸、心率、血液细胞计数，血液和瘤胃内的氨氮、瘤胃pH等指标均在正常生理范围内变动；瘤胃液中的细菌和原虫的密度增加，菌体和虫体的蛋白质含量显著增高，且蛋白质组成中的必需氨基酸的比例升高。结果提示：ISCA对瘤胃内环境及机体无不良影响，能促进瘤胃内生物蛋白质的合成，并使蛋白质的生物利用价值升高。     

瘤胃原虫对反刍动物的影响

反刍动物瘤胃内栖生着大量微生物，主要包括细菌、真菌和原虫，它们对于饲料在瘤胃内的降解起着十分重要的作用。本文主要论述了瘤胃内原虫对瘤胃营养物质代谢的影响。研究发现，去原虫后，瘤胃发酵类型发生改变，丙酸产量增加，甲烷产量减少。并且去原虫后，可以改变淀粉及蛋白质的消化，有利于改善家畜的生产性能。     

体外共培养法研究瘤胃真菌对瘤胃细菌发酵的影响

采用体外厌氧共培养技术，研究了山羊瘤胃真菌对瘤胃细菌发酵的影响。结果表明：在瘤胃真菌与瘤胃细菌共培养24h内，瘤胃真菌对瘤胃细菌表现出一定的抑制作用，共培养组24h时底物稻草表观干物质消失率（5．85％）、总挥发性脂肪酸浓度（28．21mmol／L）及乙酸浓度（20．32mmol／L）显著低于瘤胃细菌培养组（10．49％、32．66mmol／L和24．39mmol／L）；而共培养组在48h和72h时稻草表观干物质消失率（24．37％、29．04％）均高于瘤胃细菌培养组（21．69％、26．41％）；试验结果同时显示，经灭菌处理的瘤胃真菌发酵液可显著降低瘤胃细菌对稻草片段的降解活力。     

半胱胺对小尾寒羊瘤胃原虫和养分消化率的影响

选择体重40 kg左右小尾寒羊40头,随机分为4组,每组10头,半胱胺的添加量分别为:1组1 g/头.d、2组2 g/头.d、3组3 g/头.d、对照组0 g/头.d,结果表明:①半胱胺能够激发瘤胃原虫的生长率和增长数量。②试验羊采食正常,各组间采食量无显著差异。试验3组的日增重达到0.234 kg,显著高于其它组(P<0.05,试验1组、试验2组和对照组间日增重无显著差异(P>0.05)。试验3组的耗料/增重显著低于其它各组(P<0.01)。试验3组的耗料/增重显著低于试验1组和对照组,试验1组和对照组间无显著差异(P>0.05)。试验3组的粗蛋白消化率显著高于对照组(P<0.05),粗脂肪消化率则极显著高于对照组(P<0.01);中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)消化率组间差异不显著(P>0.05)。     

瘤胃原虫的作用及分子生物学技术在其研究中的应用

原虫是瘤胃微生态系统中重要的微生物群体之一,其种群构成及与其他瘤胃微生物之间的相互关系是当代瘤胃消化代谢研究的一个热点,而关于瘤胃原虫保留与否的争论更是由来已久,文章对此进行了翔实的论述,并简要综述了分子生物学技术在瘤胃原虫研究中的最新进展。     

添喂不同剂量气溶胶OT对绵羊采食、瘤胃原虫和细菌数量的影响

选取4只2岁龄、体重约50kg、装置了永久性瘤胃瘘管的小尾寒羊公羊,采取4×4拉丁方设计,在粗料型和精料型日粮条件下给绵羊添喂气溶胶OT(0,0.4,0.8,4.0g/kg日粮),以研究不同剂量气溶胶OT对绵羊采食、瘤胃原虫和细菌数量的影响。结果表明,添喂气溶胶OT 0.4,0.8,4.0g/kg日粮,在粗料型日粮条件下绵羊的自由采食量分别提高13.2%(P0.01),30.7%(P0.01)和-5.3%(P0.01),瘤胃原虫数量分别减少33.9%(P0.01),54.2%(P0.01)和86.3%(P0.01),细菌总数分别增加33.6%(P0.01),46.9%(P0.01)和-23.5%(P0.01);在精料型日粮条件下绵羊的自由采食量分别提高7.1%(P0.01),16.3%(P0.01)和-5.6%(P0.01),瘤胃原虫数量分别减少30.1%(P0.01),56.2%(P0.01)和89.0%(P0.01),细菌总数分别增加44.7%(P0.01),59.4%(P0.01)和-19.8%(P0.01)。本研究表明,添喂适量的气溶胶OT可以同时减少绵羊瘤胃原虫数量和增加细菌总数,提高绵羊采食量。     

半胱胺对小尾寒羊瘤胃原虫生长和饲料利用率的影响

生长激素（GH）是动物体内的一种重要激素,具有促进蛋白质合成、刺激生长、增加脂肪分解、增强免疫的作用。它在体内的分泌主要受到生长抑素（SS）的抑制。半胱胺（CS）通过直接打开生长抑素的硫键使之失活,从而间接提高生长激素（GH）的水平,达到促进动物生长的作用。半胱胺（CS）还是较强的多巴胺-β-羟化酶抑制剂,导致多巴胺的蓄积,促进下丘脑GH的合成和分泌,所含的活性成分能起到改善机体的营养吸收和转化,     

波尔山羊对徐淮山羊改良效果研究

通过对饲养一年的同批次的波杂一代山羊(F1)和本地山羊(徐淮山羊)共36只的生长发育性能进行测定比较,研究了波尔山羊对徐淮山羊的改良效果。波尔-徐淮山羊的杂交一代山羊除管围与本地山羊的差异不大外,体重从初生起就与本地羊保持着显著差异,同时在体长、体高以及胸围等方面也得到了显著的改善。结论表明,用波尔种羊对盐城地区的本地徐淮山羊进行杂交改良,可明显提升山羊的生产性能。     

不同碳水化合物结构组成日粮在徐淮白山羊消化道内降解利用的研究

[目的]研究不同SC/NSC比例日粮对徐淮白山羊消化道内碳水化合物消化率的影响。[方法]选取4只体况良好,体重(32±2.5)kg的徐淮白山羊,安装永久性瘤胃瘘管、十二指肠近端瘘管和回肠末端瘘管,采用4×4拉丁方试验设计,饲喂4种不同碳水化合物结构组成日粮,其结构性碳水化物与非结构性碳水化合物的比例(SC/NSC)分别为3.52(Ⅰ)、2.06(Ⅱ)、1.28(Ⅲ)和0.84(Ⅳ)。[结果]降低SC/NSC比例,可以一定程度上提高徐淮白山羊瘤胃内和肠道内干物质(DM)、有机质(OM)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)及淀粉的消化利用率。随着SC/NSC的比例降低,DM与OM消化率显著升高,其中Ⅳ组极显著高于Ⅰ组(P0.01);NDF消化率表现为先升高后降低,Ⅲ组极显著高于Ⅰ组(P0.01);ADF与淀粉在整个消化道的消化率也表现为先升高后降低的趋势,但ADF消化率各组间差异不显著,而Ⅰ和Ⅱ2组的淀粉消化率则显著高于Ⅲ组(P0.05),并极显著高于Ⅳ组(P0.01)。[结论]日粮SC/NSC为1.28时,可以提高徐淮白山羊能量利用效率。     

PCR 技术在黄淮白山羊瘤胃产甲烷菌检测中的应用1）

为了建立黄淮白山羊瘤胃甲烷菌快速检测的PCR方法,采集安徽本地黄淮白山羊瘤胃内容物,进行瘤胃甲烷菌的分离培养,利用瘤胃甲烷杆菌的保守基因甲基辅酶M还原酶基因（MCR）进行引物设计,并且优化PCR扩增条件。结果表明：所设计的引物具有特异性、专一性,优化的PCR扩增条件符合瘤胃甲烷杆菌扩增要求,扩增产物在140 bp的位置出现单一明亮条带。由此可见,利用PCR技术,可以快速、准确检测黄淮白山羊瘤胃甲烷杆菌。     

崇明白山羊和徐淮山羊体重与体尺的相关和通径分析

分析了崇明白山羊和徐淮山羊成年母羊的若干体尺指标与体重的相关性及其直接和间接作用,建立了体重．体尺最优回归模型。结果表明：角基周长可作为预测崇明白山羊成年母羊体重和选择的主要体尺因素,胸深与肩宽则可作为徐淮山羊的相应体尺因素。崇明白山羊成年母羊的体尺-体重最优回归模型为Y=-14．5244＋1．91．62X5＋0．3862X4;徐淮山羊的体尺-体重最优回归模型为Y=-47．4653＋1．7264X2＋2．0831X8。     

徐淮山羊多能性转录因子mRNA制备及在成纤维细胞中的表达

【目的】克隆徐淮山羊多能性转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc的CDS片段,构建pMD19-T-oct4、pMD19-T-sox2、pMD19-T-klf4和pMD19-T-c-myc重组质粒,随后构建含T7启动子的pcDNA3-oct4、pcDNA3-sox2、pcDNA3-klf4和pcDNA3-c-myc重组质粒,通过体外转录,获得该4种多能性转录因子的mRNA,并使其在徐淮山羊成纤维细胞中稳定表达。【方法】应用RT-PCR方法分别从徐淮山羊睾丸组织、皮肤组织、小肠组织中扩增多能性转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因编码全序列,将该4种基因分别克隆到pMD19-T载体,构建pMD19-T-oct4、pMD19-T-sox2、pMD19-T-klf4和pMD19-T-c-myc重组质粒。然后将pcDNA3.0载体和pMD19-T重组载体双酶切后用T4连接酶连接,构建含有T7启动子的真核表达载体pcDNA3-oct4、pcDNA3-sox2、pcDNA3-klf4和pcDNA3-c-myc重组质粒。各重组质粒分别用限制性内切酶XhoI、XbaI单酶切,酶切后质粒模版按照体外转录试剂盒说明体外转录获得各多能性转录因子的mRNA,并对获得的mRNA进行检测,确定其稳定性和浓度。按照脂质体（体积）﹕mRNA（质量）为1﹕1的比例用脂质体2000转染。转染24 h后,利用Western blot技术、间接免疫荧光实验检测徐淮山羊多能性转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因的mRNA在成纤维细胞中的表达。【结果】①克隆得到的徐淮山羊Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因编码序列全长分别为1 083、962、1 434和1 320 bp,并经TA克隆测序验证,其CDS 序列与绵羊、人、牛和猪等的序列相似性在89%以上;②体外转录获得的4种多能性转录因子的mRNA经脂质体转染徐淮山羊成纤维细胞,在成纤维细胞中均定位于细胞核;③4种多能性转录因子的mRNA在徐淮山羊成纤维细胞中表达的蛋白与预期大小一致,分别为38、34、50和48 kd。【结论】成功克隆了徐淮山羊Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因,该4种多能性转录因子的mRNA能够在徐淮山羊成纤维细胞中稳定表达,为进一步研究Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因的功能和山羊体细胞的重编程奠定基础。     

黄淮白山羊舌黏膜组织结构及神经纤维分布研究

[目的]运用组织学方法对黄淮白山羊舌黏膜组织结构及神经纤维分布进行观察。[方法]选用健康黄淮白山羊3只,通过颈动脉放血致死,立即取其舌尖、舌体、舌根、舌圆枕各部组织,经4%多聚甲醛溶液固定24 h后脱水、包埋、切片、HE及银氨染液染色后显微镜观察。[结果]舌黏膜主要包括黏膜层、黏膜下层和舌肌,在光镜下各层分界明显,黏膜上皮为复层扁平上皮细胞,舌尖部黏膜层上皮组织相对较薄,黏膜层中可见明显的味蕾,舌尖处神经纤维主要分布于黏膜表面相邻乳头之间的凹陷处,舌乳头黏膜层较少观察到神经纤维;舌体和舌圆枕黏膜层较厚,可观察到较多的乳头突入黏膜层,舌根黏膜层最薄,突入到黏膜层的乳头结构少。舌体和舌根处的黏膜层可观察到较多平行排列的神经纤维。[结论]黄淮白山羊舌尖部黏膜层最薄,舌体和舌根处最厚,舌尖和舌体及舌根部肌纤维为骨骼肌。神经纤维主要分布于黄淮白山羊舌黏膜层。     

绵羊、山羊采食不同种类多纤维粗饲料时瘤胃发酵参数的比较研究

采用安装永久性瘤胃瘘管的纯种辽宁绒山羊和东北细毛羊各３只,通过２×３析因试验设计,在低水平补饲、自由采食粗饲料的条件下,研究了羊草、玉米秸秆和杨树叶３种化学成分和纤维结构不同的多纤维粗饲料对绵羊、山羊瘤胃发酵的影响。试验结果表明,山羊瘤胃的氨态氮（ＮＨ３－Ｎ）浓度高于绵羊,ｐＨ值和挥发性脂肪酸（ＶＦＡ）浓度低于绵羊。瘤胃氨态氮浓度和挥发性脂肪酸浓度在３种日粮间是不同的,其顺序基本相同为：羊草日粮组＞秸秆日粮组＞树叶日粮组,ｐＨ值则刚好相反。瘤胃各发酵参数在羊种与粗饲料间有显著的互作效应。     

应用DGGE分析秸秆日粮对奶牛瘤胃细菌群落的影响

【目的】通过与苜蓿日粮比较,揭示秸秆日粮模式下瘤胃固液相细菌群落的独特结构。【方法】选择12头健康且体重相似的装有永久瘤胃瘘管的中国荷斯坦奶牛,分别饲喂以玉米秸秆（CS）和苜蓿、羊草、青贮玉米三者混合物（MF）为粗饲料组成的日粮,正饲期第13周连续3 d分12个时间点采集瘤胃固、液相内容物样品。提取微生物DNA后,利用PCR结合变性梯度凝胶电泳技术（DGGE）分析细菌群落结构,并进行聚类分析及差异条带的测序分析。【结果】与MF组相比,CS组奶牛瘤胃固、液相细菌DGGE图谱条带的数目和光密度均有一定差异,两处理组都各有一些稍显优势的条带,CS组优势条带要少于MF组。与MF组相比,CS组液相细菌的香浓多样性指数无差异（P＞0.05）,固相细菌香浓多样性指数显著降低（P＜0.01）;通过对差异条带进行测序,发现与MF组相比,CS组中瘤胃细菌Prevotella sp.、Acetivibrio ethanolgignens和Clostridium sp.减少,并且大量来源于Bacteroidetes、Firmicutes、Tenericutes和Proteobacteria等菌门的未培养细菌有所变化。【结论】秸秆日粮条件下奶牛瘤胃存在独特的细菌群落结构,细菌多样性较低。     

波尔山羊×宜昌白山羊F_1代杂种羊生产性能的测定

[目的]提高宜昌白山羊的生产性能。[方法]通过人工授精,利用波尔山羊精液对宜昌白山羊进行改良,研究F1代杂交山羊的生长性能、屠宰性能和板皮性能。[结果]在相同的饲养管理条件下,F1杂种山羊初生重,2、4、8、12月龄体重均明显高于宜昌白山羊,差异极显著(P<0.01)。F1代杂种山羊2、4、8、12月龄体长分别比宜昌白山羊提高32.46%、30.00%、32.05%和26.57%,胸围分别提高26.41%、23.68%、29.39%和19.73%。12月龄F1代杂种山羊的平均胴体重比宜昌白山羊高7.52 kg,屠宰率(47.26%)比宜昌白山羊高6.67个百分点。F1代杂种山羊鲜皮重、板皮面积均比宜昌白山羊显著提高。[结论]利用波尔山羊杂交改良宜昌白山羊的生产性能是可行的,值得推广。