红树莓海尔特兹初代培养中防止外植体褐化的研究

以红树莓海尔特兹(Heritage)的健壮新梢为材料,研究了不同外植体类型、0.1%HgCl2溶液消毒时间、6-BA浓度、防褐化剂、暗培养时间对组织培养中外植体褐化的影响,探讨防止初代培养中外植体褐化的最佳方法。结果表明:以带芽茎段为外植体,用0.1%HgCl2灭菌处理300 s,在MS+6-BA 0.50～0.75 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.2 mg/L培养基中,添加1.5 g/L VC,暗处理5 d,对防止外植体褐化效果最佳。     

手掌参组织培养中外植体褐化的影响因素研究

为降低手掌参组培过程中外植体的褐化程度,从表面消毒剂和消毒时间、活性炭和VC的使用、暗培养、光照强度、转瓶间隔时间等方面对手掌参外植体的抗褐化方法进行了探索,以期为建立高效稳定的手掌参再生体系提供依据。结果表明:手掌参的芽部用75%酒精表面消毒20s→无菌水冲洗2次→用0.1%升汞消毒处理10min→无菌水冲洗6次→接种于MS+KT 0.5mg/L+ZT 0.5mg/L+NAA 1.0mg/L+AC 1.0g/L+VC2.0mg/L培养基中→暗培养5～10d(3d转瓶1次)→2 000lx光照条件下培养,其生长良好,褐化程度大大减轻,褐化率由93.33%下降为48.28%。     

降低茶树组织培养中外植体褐化程度的研究

为降低茶树组培过程中外植体褐化程度,从外植体表面消毒时间、切割方式、转瓶间隔时间、培养基类型、激素配比、抗褐化剂和吸附剂的使用方面进行了综合试验.结果表明:表面消毒最适时间为7～8 min;接种外植体带腋芽叶片保留2/5,3 d转瓶1次降低褐化的效果较好; 经此处理的外植体培养在1/2MS +BA 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L+Vc 1.0 g/L+AC 1.0 g/L的培养基中,生长良好,褐化率由86 %下降为41 %.     

'冬美人'愈伤组织诱导研究

以'冬美人'(Pachyveria pachyphytoides Walth)的外植体进行愈伤组织诱导,从不同外植体、消毒方式、激素浓度、光源等方面研究了'冬美人'外植体在诱导愈伤组织过程中适宜的培养条件与环境因素.结果表明,'冬美人'愈伤组织诱导最适宜的外植体为叶片;在消毒方式上,采用75％酒精中浸泡5s,0.1％HgCl2溶液浸泡10s,1.5％抗坏血酸溶液浸泡10s,可以大幅度减轻外植体褐化的程度,并且污染率也较低;不同类型光源,以日光灯培养效果最好,褐化程度也相对较轻;在激素配比上,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA1.0mg/L,诱导率为64％;在培养基中加入一定量的活性炭,可以少量减轻外植体的褐化程度.     

降低"雪青"梨的外植体褐化研究

以"雪青"梨为材料,以第6代茎尖愈伤组织为外植体,采用L9(34)正交设计,研究不同因素对降低外植体褐化的作用.3因素设为基本培养基(A)、培养基中巯基乙醇(B)和活性炭(C)浓度;每因素设3个水平,A分别为1/4MS,MS和1/2 MS无机盐浓度,B分别为0.5,0.1和0g/L,C分别为2.5,5和0g/L.外植体接种在不同的MS基本培养基中(均含2,4-D 2 mg/L,6-BA 0.1 mg/L,琼脂8g/L,蔗糖30g/L,pH=5.8),于25±1℃,2 000k光照培养,30d后统计褐化率.试验结果表明:降低外植体褐化的最优水平组合为A1B1C2,B,C对试验结果的影响达显著水平(P＜0.05),不同水平间差异显著(P＜0.05).以1/4 MS为基本培养基,并于1/4MS+MC 0.5g/L+AC 5g/L培养基中光照培养,褐化率可降至5%.     

降低"雪青"梨的外植体褐化研究

以"雪青"梨为材料,以第6代茎尖愈伤组织为外植体,采用L9(34)正交设计,研究不同因素对降低外植体褐化的作用.3因素设为基本培养基(A)、培养基中巯基乙醇(B)和活性炭(C)浓度;每因素设3个水平,A分别为1/4MS,MS和1/2 MS无机盐浓度,B分别为0.5,0.1和0g/L,C分别为2.5,5和0g/L.外植体接种在不同的MS基本培养基中(均含2,4-D 2 mg/L,6-BA 0.1 mg/L,琼脂8g/L,蔗糖30g/L,pH=5.8),于25±1℃,2 000k光照培养,30d后统计褐化率.试验结果表明降低外植体褐化的最优水平组合为A1B1C2,B,C对试验结果的影响达显著水平(P＜0.05),不同水平间差异显著(P＜0.05).以1/4 MS为基本培养基,并于1/4MS+MC 0.5g/L+AC 5g/L培养基中光照培养,褐化率可降至5%.     

大花香水月季(Rosa odorata var. gigantea)茎段组织培养的抗褐化研究

以大花香水月季(R. odorata var. gigantea)单芽茎段为外植体,研究了不同培养基、抗褐化剂以及不同时长黑暗低温预处理对组培过程中褐化的影响。结果表明:WPM培养基为适合的基本培养基;添加有3 g/L活性炭(AC)的培养基中褐化率降至最低的9%,但外植体萌发率远低于2 g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)下的78%,硝酸银(AgNO3)未达到预期效果;24 h的黑暗低温预处理可减轻褐变。试验表明:大花香水月季外植体于4℃下黑暗低温处理24 h后,接种于含有2 g/L PVP的WPM+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基上,3周后褐化率为15%,萌发率可达83.3%。     

珍稀濒危植物掌叶木愈伤组织诱导与褐化抑制研究

以掌叶木[Handeliodendron bodinieri (Lévl.) Rehd.]的叶片、茎段为外植体,在含有不同植物激素的培养基上诱导愈伤组织。结果表明,最佳诱导培养基为MS+2,4-D1.0mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L,最佳增殖培养基为3/4B5+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+VC0.1%。2,4-D与NAA联合使用利于诱导率的提高;适量的6-BA、KT利于愈伤组织质量的改善;6-BA加KT的双因子组合没有单因子的诱导效果显著;采用B5培养基代替MS培养基,且将大量元素降为3/4,外加VC0.1%,并进行暗培养,能有效抑制愈伤组织的褐化。     

茶条槭组织培养防止外植体褐化的方法研究

为探索克服茶条槭在组培过程中外植体褐化的最佳方法,以茶条槭当年生萌条为试材,进行了不同外植体类型、不同消毒方式、不同取材时间和不同抗褐化剂对茶条槭初代培养过程中外植体褐化的影响试验。结果表明,采用当年生萌条进行组织培养,其茎段较茎尖褐化严重;先将外植体用1 000 mg/L VC溶液处理30 min,再用0.1%升汞溶液消毒为最佳消毒方法;外植体取材时间在5月,其组培污染率、褐变率、死亡率相对较低;在一定浓度范围内,聚乙烯吡咯烷酮(PVP)200 mg/L与活性炭(AC)2 g/L配合使用防褐化效果较好;初代培养时,先弱光培养7 d再转入光照培养,有利于抑制褐变的发生。由此说明,选用幼嫩的顶芽为外植体、浓度0.1%升汞溶液为消毒剂、MS为基本培养基、添加聚乙烯吡咯烷酮200 mg/L和活性炭2 g/L进行初代培养,防止其褐化的效果最佳。     

春剑花梗离体培养研究

[目的]研究一种或多种适合春剑(Cymbidum longibracteatum)愈伤组织诱导的方法,并试图找到有效控制褐化的措施。[方法]以春剑花梗为外植体进行离体培养,通过正交设计研究不同基本培养基及激素配比对花梗培养时褐化、生长和愈伤组织发生的影响;同时研究不同防褐化处理对花梗切段褐化率的影响。[结果]不同基本培养基及激素配比对花梗培养的影响显著,不同处理方式对花梗褐化控制效果显著。花梗切段愈伤组织诱导的最佳配方为B5+2,4-D 2.0 mg/L+TDZ 0.6 mg/L+GA30.5 mg/L,诱导率为7.32%。当花芽长度为2.0 cm时,花梗褐化率较低;当花梗切割厚度为8.0 mm时,花梗褐化率较低;PVP、VC、CA、8-HQS对花梗切段褐化均有显著的抑制作用,其中以8-HQS效果最好。[结论]建立了春剑花梗离体培养技术体系,为春剑快速繁殖和遗传育种奠定基础。     

不同抗褐变剂组合对海南龙血树组织培养及抗褐变效果的影响

[目的]探讨不同抗褐变剂及其组合对海南龙血树组织培养及抗褐变效果的影响,为其种苗的快速繁殖提供参考依据.[方法]采用3种抗褐变剂处理海南龙血树外植体嫩茎,开展愈伤组织诱导与抗褐变试验;在基本培养基MS中添加不同浓度的6-BA和NAA组合,检测其对海南龙血树愈伤组织分化不定芽和丛生芽形成的影响.[结果]海南龙血树嫩茎在0.1 g/L半胱氨酸(Cys)溶液中浸泡10 min后接种于含0.1 g/L维生素C(Vc)的培养基中,褐变率比对照(CK)低,仅20.5%,愈伤组织诱导率最高,为75.5%;适宜龙血树嫩茎愈伤组织诱导的植物生长调节剂组合为6.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为75.5%;适宜龙血树芽增殖的植物生长调节剂组合为4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,增殖倍数为3.3.[结论]采用Cys和Vc两种抗褐变剂组合处理可适当减轻龙血树组培过程中嫩茎的褐变程度,促进愈伤组织诱导;培养基中适当添加6-BA和NAA可促进愈伤组织的不定芽分化和丛生芽形成.     

闽楠微扦插繁育体系的建立

  目的   以闽楠Phoebe bournei近成熟胚为外植体,采用多种方法建立闽楠微扦插繁殖体系。  方法   探究不同子叶切除强度对胚褐化的影响,以及抗褐化剂和吲哚丁酸（IBA）对近成熟胚萌发和无菌苗微扦插生根的影响。  结果   闽楠近成熟胚褐化的主要部位为子叶,子叶切除后胚可以萌发但不能正常生长,添加聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）对抑制子叶褐化有明显效果且不影响胚的萌发。近成熟胚萌发最佳培养基为1/2MS+0.2 mg·L-1 IBA+2 g·L-1 PVP,萌发率最高可达89.71%。无菌苗微扦插最佳生根培养基为1/2MS+1.5 mg·L-1 IBA+2 g·L-1PVP,顶芽生根率为100%,平均生根数为3.86条,平均根长1.56 cm;侧芽生根率为60.27%,平均生根数为1.55条,平均根长0.85 cm。筛选出的3号株系的繁殖系数达24.40。  结论   研究结果可为闽楠良种繁育提供参考。     

牡丹组织培养若干影响因子研究

以‘太平红’牡丹为材料,研究了不同灭菌方式、抗褐化物质、激素配比、培养基、生根培养条件对牡丹组织培养的影响。结果表明:以0.1%升汞液消毒8 min,再用7%次氯酸钠溶液消毒8 min灭菌效果最佳,鳞芽、土芽和种子的污染率分别为0、4.5%和22.0%;在改良MS培养基中联合添加PVPP 0.5 g/L和AC 0.5 g/L可有效减少牡丹外植体的褐化;改良MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA 0.3 mg/L+CH 0.5 g/L+PVPP0.5 g/L+AC 0.5 g/L适宜牡丹鳞芽的诱导;MS+BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+PVPP 1.0g/L适宜于牡丹芽的增殖;1/2MS+IBA 5 mg/L+AC 0.5 g/L适用于牡丹试管苗生根。     

甜叶悬钩子植物组织培养褐化现象控制研究

[目的]寻求甜叶悬钩子组织培养中的最佳抗褐化剂。[方法]以甜叶悬钩子的茎和叶为外植体,必MS为基本培养基,加入不同浓度的抗褐化剂（20％Na2S2O3、Vc和AC）,研究不同抗褐化剂对甜叶悬钩子组织培养的影响。[结果]AC和Vc都能对不同外植体起到抗褐化作用,在加入20％Na2S2O3的培养基上,外植体的褐化程度与Na2S2O3的浓度成正比,培养基中20％Na2S2O3的添加量达20ml时,外植体褐化最为迅速;在加入Vc的培养基上,随着Vc添加量的增加,培养基变成液体或半固体培养基,接入的外植体容易死亡;在加入AC的培养基上,AC的添加量为5g／L时,外植体的褐化率可控制在5％以下。抗褐化控制处理后,可以在诱导愈伤组织的培养基上培养出大量的愈伤组织。1结论IAC是较为理想的抗褐化剂,用量为5g／L。     

香港四照花外植体的抗褐化处理与诱导培养

以香港四照花Dendrobenthamia hongkongensis嫩叶、茎段和带芽茎段为外植体,研究外植体类型、消毒时间、基本培养基、预处理方法、抗褐化剂种类及质量浓度对香港四照花褐化的影响以及6-苄基腺膘呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）和2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）对3种外植体诱导培养的影响。结果表明:香港四照花外植体的最佳消毒时间为1.0 g·L-1氯化汞消毒5 min;最适基本培养基为木本植物用培养基（woody plant medium,WPM）;用1.0 g·L-1聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浸泡3.0 h,3种外植体褐化率明显下降;1.0 g·L-1柠檬酸（CA）是嫩叶的最佳抗褐化剂,褐化率为27.4%;2.0 g·L-1 PVP为茎段和带芽茎段的最佳抗褐化剂,其褐化率分别为13.3%和16.7%;嫩芽的最佳愈伤组织诱导培养基为WPM+1.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-12,4-D;茎段和带芽茎段最佳诱导培养基均为WPM+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1 2,4-D。     

直干桉超级苗组培快繁技术体系研究

以直干桉超级苗茎段为外植体,分别采用正交试验、两因素全因子试验和单因素试验逐一探讨直干桉外植体消毒、腋芽诱导、不定芽增殖、生根培养、移栽等组培快繁主要环节中各自的最佳处理,构建直干桉超级苗组织培养的技术体系。结果表明,外植体联合消毒的最佳处理为75%酒精消毒20s,1%洁尔灭消毒2min和0.1%升汞消毒5min,在控制污染率的同时,成活率极显著高于其他处理;暗培养在降低外植体褐化率、提高成活率方面具有极显著效应;腋芽诱导的最佳体系为改良的MS培养基、0.6mg/L6-BA和0.5mg/LNAA,在提高腋芽萌发率的同时,可使芽长、芽壮且结果稳定;不定芽增殖的最佳处理为改良的H培养基、1.0mg/L6-BA和0.1mg/LIBA,不但增大增殖系数,同时还缩短了增殖培养时间;生根培养的最佳处理为改良的White培养基、0.3mg/LIBA和0.1mg/LNAA,可极显著提高生根率、缩短生根时间且结果稳定;移栽培育的适宜基质组成为珍珠岩∶腐殖土∶草炭=1∶1∶1,成活率显著高于其他基质组成。     

I-72杨再生体系的建立

以水培I-72杨（Populus euramericana San Martino）的叶片和叶柄为外植体,探讨了I-72杨植株再生的方法。结果表明：I-72杨愈伤组织诱导和不定芽分化的最佳培养基为MS＋BA 0．5mg／L＋NAA0．1mg/L,愈伤组织诱导率为97．0％,不定芽分化率为91．1％;在诱导培养基中添加Vc（150 mg／L）能有效地抑制叶片的褐变,褐变降低率达25．0％;不定芽在MS＋BA 0．3mg／L＋NAA 0．05mg／L培养基中继代增殖系数为6．3;添加0．8mg／L GA3对继代培养中不定芽的伸长和增殖有显著效果;在生根培养基1／2MS＋NAA 0．05mg／L＋IBA0．2mg／L上,生根率达93．5％。     

长蕊万寿竹野生资源开发利用的组织培养研究

[目的]为长蕊万寿竹的大规模生产和进一步研究提供技术支持和参考依据。[方法]以长蕊万寿竹茎段为外植体,灭菌后将带芽茎段剪成1~2 cm的小段,接种于培养基中。研究外源激素的种类与配比对诱导生根和丛生芽的影响。[结果]启动培养时,外源激素为6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IBA 1.0 mg/L的培养基的效果最好,启动率达到85.20%。1/2 MS添加外源激素NAA 1.0 mg/L+AC 5 g/L的培养基的生根效果极显著地高于其它处理,生根率达到96.13%。适合丛生芽诱导的培养基是6-BA 0.5mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L,丛芽增殖系数达到6.1。[结论]建立了以长蕊万寿竹茎段为外植体的组织培养技术体系,可有效地启动培养,诱导生根和丛生芽。     

尾叶桉的组织培养与快速繁殖

[目的]为尾叶桉资源开发及其转基因研究奠定基础。[方法]以尾叶桉无菌苗的下胚轴为外植体,研究不同激素种类及配比对其愈伤组织诱导、芽分化和增殖的影响,并分析不同浓度IBA对其生根的影响。[结果]不同激素组合对愈伤组织的诱导形成均有显著影响,诱导率为35.0%~95.0%。诱导尾叶桉愈伤组织形成的最适培养基为MS+6-BA0.60 mg/L+2,4-D0.10 mg/L,诱导芽分化的最适培养基为MS+NAA0.10 mg/L+TDZ2μmol/L,诱导芽增殖的最适培养基为MS+6-BA0.40 mg/L+NAA0.05 mg/L。尾叶桉再生苗的最适生根培养基为1/4 MS+0.50 mg/LIBA。生根苗在自然环境中炼苗9 d后再移栽,其成活率在90%以上。[结论]接种初期暗培养5 d再转入光照培养和添加50.00~100.00 mg/L Vc,均可有效防止尾叶桉愈伤组织的褐化,提高诱芽率。