应用酶联免疫吸附测定技术检测香蕉束顶病毒

为探讨快速而准确的检测香蕉束顶病毒的方法,采用本所制备的香蕉束顶病毒多克隆抗体ＩｇＧ和台湾的香蕉顶病毒单克隆抗体２Ｈ６,用酶联免疫吸附测定技术双抗体夹心法测定了漳州市天宝的香蕉束顶病病株。试验结果表明,多抗和单抗相结合的ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ法能检测到病组织汁液的最大稀释度为１：６４０,而单独使用单抗的最大稀度为１：１０。     

香蕉束顶病毒PCR检测技术研究

建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ）,并报道了ＢＢＴＶ免疫捕捉ＰＣＲ（ＩＣ－ＰＣＲ）和直接结合ＰＣＲ（ＤＢ－ＰＣＲ）检测方法,ＩＣ－ＰＣＲ和ＤＢ－ＰＣＲ分别能从４μｇ和０．４ｍｇ香蕉叶组织中检测到ＢＢＴＶ。     

香蕉束顶病毒分子生物学的研究进展

对香蕉束顶病毒核酸的性质、基因组的结构及其功能、病毒在寄主体内的复制机理、病毒的分类地位以及基因的体外表达等方面进行了较为全面的综述,并对需要进一步研究的问题进行了探讨。     

血清学检测甘薯病毒制样技术研究

以甘薯叶片、叶柄和茎作样本，分别用研磨提取液和印渍法制样，采用ＮＣＭ－ＥＬＩＳＡ方法检测ＳＰＦＭＶ。结果表明３个品种的叶片提取液法平均阳性率为２９．３％，用叶柄印渍法可提高到９３．３％。后者明显提高了检测效果和可靠性，达到嫁接指示植物法的检测水平，而且采样制样简便快速，更适宜大量样本检测。     

海南香蕉束顶病和花叶病的PCR检测

用CTAB法从感染束顶病（BBTV）的海南香蕉叶片组织中提取DNA,以此为模板分别用特异引物对BBTV的组分Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ进行扩增并测序,结果得到大小分别为607、490和326bp的特异片断;用CTAB法从感染花叶病（CMV）的病叶组织中提取RNA,反转录成cDNA,以此为模板用特异引物进行扩增测序,结果得到大小为557bp的特异片断。用PCR方法可从相当于100ng的叶片组织中检测到BBTV和CMV。     

香蕉抗束顶病株系的筛选

通过田间调查，从闽南地区束顶病发生较为严重的台湾蕉和天宝蕉的蕉园中，分别选出４株和３株优良单株．取优良单株吸芽进行试管培养离体繁殖．试管苗用带毒的香蕉叶片汁液传毒和病健株混合培养，经血清学检测表明，并不会传毒．网室蚜虫传毒使绝大多数的健株在网室或在后来移入田间种植后，染上束顶病病毒．从蚜虫传毒的处理组合中选出一个有希望的抗束顶病株系，５ａ来生长结果正常     

香蕉束顶病毒Rep蛋白特性分析及纯化体系的建立

以香蕉束顶病毒海口分离物DNA1(Accession NO. FJ463042)的Rep蛋白为研究对象,利用生物信息学软件对该蛋白的理化性质、结构组成、信号肽、磷酸化、二级结构、三级结构与功能结构域等作了较为详细的分析与预测,并配置了相关纯化试剂。将含重组质粒pET32b-Rep的E.coli BL21(DE3),接种到LB液体培养基,在20℃、0.1 mmol/L IPTG条件诱导4 h,产生大量的可溶性重组蛋白,经AKTA Explorer 100系统亲和层析柱后,用不同梯度的Washing buffer洗脱杂蛋白并对各阶段产物进行12% SDS-PAGE分析,确定了100 mmol/L咪唑的Washing buffer洗脱浓度,最终获得大量高纯度的重组蛋白。以His*Tag Monoclonal Antibody为一抗,Western blot鉴定结果表明纯化重组蛋白即为His-Rep融合蛋白。该纯化体系的建立为研究BBTV Rep蛋白的结晶奠定了基础,也为今后ABTV、FBNYV、MVDV、PNYDV等病毒的相关复制蛋白纯化提供了重要数据。     

斑点法检测柑桔黄龙病, 香蕉束顶病

 用改进的斑点法检测柑桔黄龙病类细菌、香蕉束顶病毒(BBTV),均获满意结果.阳性反应在硝基纤维转移膜上形成深浅不等的褐色斑点.检测健康柑桔、香蕉粗汁液,获阴性结果,在上述固相载体上不形成有色物质.在缓冲液TBS中加入2%TritonX-100和1%国产蛋白片,作为改进后的封闭缓冲液,封闭硝基纤维转移膜上未结合抗原部位,效果较好.斑点法检测活体香蕉束顶病样品及-30℃冷冻保存6个月香蕉束顶病样品,同样获满意结果.斑点法快速、准确、简单、灵敏度高、特异性强,可用于植物检疫,存在于硝基纤维转移膜上的检疫结果可长期保存.     

香蕉束顶病的研究 Ⅱ.病害的症状、传播及其特性

香蕉束顶病病株叶片边缘轻度黄化,略向上卷曲,叶背或叶片主脉背面和叶柄上出现断断续续的浓绿色条斑,即“青筋”,长短不一,短的不到1mm,长的尤其是叶片主脉和假茎上的可达30-50cm或更长,病后植株长出的叶片一片比一片小,病株外观矮化,呈束顶。病害的潜育期与侵染时蕉株大小和温度高低有关,最短的19d,最长的可达216d,病害由香蕉交脉蚜传播,最短获毒时间30min,最短接毒时间15min,循回期在ld左右,一次获毒后可保毒14d.带病吸芽也能传病。汁液摩擦和土壤不能传播,病健根部自然交接和菟丝了均没有传播成功     

香蕉束顶病的研究 Ⅰ.病害的发生、流行与分布

香蕉束顶病广泛分布于福建省漳州、厦门、泉州、莆田、福州及龙岩等地(市)所辖的大部分县(市)的香蕉产区,达23个县(市、区)之多,分布北界已达福州,且有继续向西、向北推移之势。发病率因地区、年份不同以及是否采取防治措施等而有差异,从零星发病至30％—50％不等,严重者达70％-80％,甚至不得不毁园再植或改种其它作物。该病发生一般以4～6月份最烈,系发病高峰期。病害发生的轻重与品种类型、蕉苗质量、种植年限、生育龄期、蕉蚜数量、栽培管理措施、气候、土壤和地理位置等均有关系。大量种植带病蕉苗是病区迅速扩展的直接原因;介体蕉蚜活动猖獗和管理粗放是病害严重发生和流行的主导因素。     

香蕉无束顶病毒种苗快速繁殖的工艺流程

 采用抗香蕉束顶病毒(BBTV)单克隆抗体(McAb)和抗血清,用酶联免疫吸附技术(ELISA)双抗体夹心法(DAS)测定获得无病毒香蕉茎尖.以该茎尖作外植体,接种在改良的MS培养基,从茎尖环状腋芽处诱导出不定芽.分切继代培养诱导新丛芽.丛生小植株分切成单株转入附加活性碳的MS基本培养基促根壮苗,生根试管苗移栽沙土或垤石基质的营养钵内,保湿成活.采用该工艺污染控制在10%以下,繁殖系数3～4倍/月,生根率90%以上,移栽成活率90%以上.种苗在生产上应用无病健壮.建立了香蕉无毒种苗规模化生产技术.     

香蕉束顶病毒NS株系DNA组分6的克隆及序列分析

通过常规的基因克隆技术，对香蕉束顶病毒NS株系代表分离物的DNA组分6进行了克隆和序列分析，并将该分离物这个组分的序列与先前报道的广州天河分离物（属NSP株系）的该组分序列进行比较，结果表明：该组分全序列，ORF及其编码的氨基酸序列在2个分离物间的变异率分别为3.4%,17%t 2.6%,表明该组分在2个株系代表分离物间存在较显著差异，从而进一步支持了广东BBTV存在2个株系的结论，此外，NS株系代表分离物DNA组分6的全序列，ORF及其编码的氨基酸序列与澳大利亚分离物的变异率分别为14．4％，7．5％和7．1％。