超微技术对铁皮石斛粗多糖浸出的影响

通过苯酚-硫酸法测定铁皮石斛超微粉与铁皮石斛常规粉水溶性粗多糖的含量,探讨超微技术对铁皮石斛粗多糖浸出的影响。结果表明,铁皮石斛超微粉中水溶性粗多糖含量为484.6 mg/g,常规粉水溶性粗多糖含量为370.2 mg/g,铁皮石斛超微粉水溶性粗多糖含量比常规粉水溶性粗多糖含量高30.9%,二者的差异具有统计学意义(P<0.05)。超微技术有助于铁皮石斛粗多糖的浸出。     

不同添加物对铁皮石斛组培幼苗生长的影响

以铁皮石斛试管小苗为材料,以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+6 g/L琼脂为基础培养基,采用正交试验设计方法研究3种不同添加物(普通香蕉汁、食用马铃薯汁、活性炭)对铁皮石斛幼芽生长的影响。结果表明,香蕉汁对铁皮石斛的鲜质量、根数、茎高有促进作用,在促进茎的伸长方面效果较为显著;马铃薯汁对铁皮石斛的根长、茎粗影响不大,但在鲜质量和茎高等方面有显著性促进作用;添加一定量的活性炭可以促进铁皮石斛根的生长。在基础培养基里添加30%香蕉汁、10%马铃薯汁、0.6 g/L活性炭,有利于铁皮石斛的壮苗生根;添加10%马铃薯汁、0.2 g/L活性炭,有利于铁皮石斛原球茎的增殖和芽的分化。     

铁皮石斛开放式组织培养体系的建立

为降低铁皮石斛组织培养成本、简化组织培养程序,以铁皮石斛原球茎为试验材料,采用开放式组织培养方法研究MS固体培养基添加不同浓度代森锰锌和链霉素对铁皮石斛原球茎组织增殖、分化、生根及抑菌效果的影响。结果表明:在培养基中,添加0.3g/L代森锰锌+1.5g/L链霉素有利于铁皮石斛原球茎增殖;添加0.3~0.5g/L代森锰锌+1.5g/L链霉素的抑菌效果较好,并能促进分化幼苗生长;添加0.5g/L代森锰锌+1.5~2.0g/L链霉素有利于再生植株生根。     

铁皮石斛内生真菌的分离鉴定及其促宿主生长作用

利用微生物学传统分离培养方法从野生铁皮石斛根部分离内生真菌,依据形态学和真菌18SrDNA ITS序列分析对菌株进行分类,并采用正交设计法优化菌丝体液体培养基,考察发酵液对铁皮石斛组培苗生长的影响,以期为人工种植铁皮石斛提供优良菌肥。结果显示,共分离到4株内生真菌,其中TPSH1、TPSH2、TPSH3为镰刀菌属(Fusarium),TPSH4为柱霉属(Scytalidi-um)。优化后确定培养液的组分为:麦麸25g/L,土豆20g/L,蔗糖10g/L,1/2MS。菌株发酵液分别喷施铁皮石斛组培苗8周后,与对照(1/2MS)相比,以TPSH4菌株液体发酵8d,对铁皮石斛生长促进作用明显,成活率提高30.43%,植株高度增加了31.21%,鲜质量增加40.61%。TPSH4为具有促宿主生长作用的新菌株,其发酵液可作为菌肥,用以促进人工栽培铁皮石斛的生长。     

龙陵铁皮石斛花色苷的提取工艺及抑菌活性研究

以云南龙陵铁皮石斛为试验材料,用溶剂浸提法提取铁皮石斛花色苷。通过单因素试验考察乙醇体积分数、料液比、提取温度、p H、提取时间对铁皮石斛花色苷提取率的影响,以正交试验进行工艺优化得到最佳提取工艺条件。并考察铁皮石斛花色苷对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑制作用。结果表明,溶剂浸提法提取铁皮石斛花色苷的最佳工艺条件为:60%乙醇、料液比为1 g:20 m L、提取温度40℃、p H 3、提取时间120 min、提取次数为2次,花色苷含量为3.12 mg/g FW。其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的最低抑菌质量浓度分别为9.75 mg/L、4.88 mg/L和1.22 mg/L,最低杀菌质量浓度分别为9.75 mg/L、4.88 mg/L、2.44 mg/L。     

不同商品有机肥对铁皮石斛产量和品质的影响

为研究不同商品有机肥对铁皮石斛产量和品质的影响,本研究以三年生铁皮石斛为材料,探讨金福伊农生物有机肥、百泰微生物肥料、大汉rutom MIX 1这3种商品有机肥对铁皮石斛生长、开花特性和多糖含量的影响,以期筛选出合适铁皮石斛有机栽培的底肥,为铁皮石斛有机栽培肥料施用提供依据。结果表明,667 m²施用金福伊农生物有机肥160 kg,能够显著促进铁皮石斛新芽萌发、茎秆伸长、多糖含量增加;百泰微生物肥料有利于铁皮石斛叶片生长;相较于前两者,大汉rutom MIX 1在促进铁皮石斛生长上效果不明显。     

铁皮石斛原球茎与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性比较

【目的】比较铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性,为铁皮石斛组织培养物的应用提供依据。【方法】以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)为供试菌,用抑菌圈法测定2种铁皮石斛多糖对目标菌的抗菌活性;分别用羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O-·2)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)法和硫代巴比妥酸法(TBA法)结合分光光度法检测2种铁皮石斛多糖清除·OH、O-·2和DPPH·及抗脂质过氧化的能力,比较2种铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性。【结果】铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌均具有显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖的抑菌效果比铁皮石斛原球茎多糖优;2种铁皮石斛多糖对·OH、O-·2和DPPH·均有极显著的清除作用,对小鼠肝组织脂质过氧化均有极显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖比铁皮石斛原球茎多糖效果更好,2种铁皮石斛多糖的抗菌及抗氧化活性与多糖质量均存在剂量效应关系。【结论】与野生铁皮石斛多糖相比,铁皮石斛原球茎多糖在抗菌、抗氧化能力方面虽存在一定差距,但仍具有进一步开发的价值。     

铁皮石斛不同外植体组培快繁技术比较

[目的]筛选适宜铁皮石斛繁殖的最佳方法。[方法]以铁皮石斛成熟蒴果和1年生植株茎段作为外植体,研究MS培养基中添加不同浓度激素对铁皮石斛种子和茎段诱导、增殖以及生根的影响,同时比较了传统玻璃兰花瓶与聚丙烯透明薄膜袋在铁皮石斛工厂化生产上的成本投入。[结果]适合铁皮石斛诱导的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+120 g/L香蕉+35 g/L蔗糖+7.0 g/L卡拉胶;适合增殖的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+120 g/L香蕉+35 g/L蔗糖+7.0 g/L卡拉胶;适合生根的培养基为1/2MS+0.80 mg/L NAA+120 g/L香蕉+20 g/L蔗糖+7.0 g/L卡拉胶。对于工厂化生产而言,选用蒴果作为外植体具有利于无菌体系建立、增殖倍数多和苗长势整齐一致等优点,聚丙烯透明薄膜袋可以代替传统的玻璃兰花瓶。[结论]该研究可为减少铁皮石斛组培苗的生产成本、缩短生长周期、获得大量优质组培苗提供一定的理论依据。     

不同培养基配方对铁皮石斛生根培养的影响

以铁皮石斛试管苗为试材,研究了不同激素浓度、不同添加物及浓度对铁皮石斛生根壮苗的影响.结果表明,NAA浓度为0.2 mg/L时,生长和生根效果较好;活性炭的添加,有利于石斛苗的生根和生长;果蔬添加剂对石斛苗生根和生长均有促进作用,香蕉泥的效果较好,且浓度为10％最为适宜.确定铁皮石斛生根最适宜培养基为1/2MS+ 0.2 mg/L NAA+1 g/L活性炭+10％香蕉泥.     

铁皮石斛生根壮苗培养基优化及移栽基质选择

以铁皮石斛无菌幼苗为材料,研究不同基本培养基、不同激素对铁皮石斛生根壮苗的影响.同时以优良的试管苗为试材,搭配不同比例的基质,研究其对铁皮石斛试管苗移栽成活率和生长状况的影响.结果显示,以培养基N6+NAA 0.5 mg/L+IBA0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L+AC 5 g/L+香蕉汁100 mL/L生根壮苗效果最佳,试管苗根粗叶绿,可达到出瓶效果;移栽基质火山岩+松树皮+活苔藓效果最佳,石斛试管苗成活率可达90％且长势优良,30 d后有新芽萌发.     

铁皮石斛茎段组织培养技术研究

以铁皮石斛丛生芽作为外植体,通过研究影响铁皮石斛生长的主要因素,筛选铁皮石斛茎段组培快繁的适宜培养基,总结实用的快繁方法。结果表明,以MS培养基+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+30g/L糖+6.5g/L琼脂+0.5g/L活性炭,添加10%的香蕉泥作为天然附加物,pH值5.8,是铁皮石斛丛生芽增殖的最佳培养基;以MS+IBA1.5mg/L+NAA 1.5mg/L为铁皮石斛生根诱导的最佳培养基。通过实验总结出铁皮石斛茎段组培快繁技术,为铁皮石斛的资源保护和应用推广提供重要的科学依据。     

铁皮石斛组织快繁及移栽培养1）

为了筛选出铁皮石斛的最佳组织培养培养基、最佳移栽基质、最适菌剂种类和施用方式,选取具有1～2片叶片的铁皮石斛分化苗在3种常用组培培养基上培养,11周后,统计平均株高、茎粗、根长、鲜质量的增长量、平均产生新根数、新孽数;选取相同长势的铁皮石斛组培苗,在2种常用兰科植物培养基质上移栽,将3株优良兰科菌根真菌制成4 g· L－1的单一液体菌剂,对铁皮石斛移栽苗分别进行蘸根、灌根,90 d后,统计成活率、平均鲜质量、株高、茎粗增长量、平均新根数。结果显示：MS＋0．34 g· L－1KNO3＋100 g· L－1土豆提取液＋2．4 g· L－1植物凝胶＋30 g· L－1蔗糖培养基上生长的铁皮石斛苗平均株高增长量、平均鲜质量增长量、平均新根数、平均分蘖数极显著大于其他两组处理;移栽于V（珍珠岩）∶V（仙土）∶V（松树皮）∶V（活苔藓）＝1∶1∶1∶2基质上的铁皮石斛幼苗除平均新芽数略低于移栽于V（花生壳）∶V（石灰岩）∶V（蛭石）∶V（活苔藓）＝1∶1∶1∶2基质上的铁皮石斛幼苗外,其他生长指标均高于后者,其中新根数显著高于后者;施用Dh57菌剂的铁皮石斛幼苗在成活率、平均新根数、生长量方面显著高于施用Do60、 Ph03菌剂的铁皮石斛幼苗,在株高、茎粗增长量方面极显著高于另外4组处理;施用 Ph03菌剂的铁皮石斛幼苗平均新芽数极显著高于施用Dh57、D6o0菌剂的处理组;同一菌剂蘸根处理的幼苗生长指标均高于灌根处理。     

栽植方式和营养液对铁皮石斛试管苗移栽成活和生长的影响

[目的]研究栽植方式和营养液对铁皮石斛试管苗移栽成活和生长的影响。[方法]对铁皮石斛移栽的成活率及生长情况进行统计分析,并对其栽植方式和施浇营养液进行了筛选试验。[结果]铁皮石斛穴植时,其移栽成活率和生长量均与散植存在极显著差异(P0.01),而有无椰丝缠绕则对其生长没有明显差异;EC在0.6左右时,兰花专用肥及MS营养液均能在一定程度上提高铁皮石斛移栽成活率和生长量,以京绿怡园的效果最佳。[结论]该方法考察了栽植方式和营养液对铁皮石斛试管苗移栽成活和生长的影响,为石斛产业的发展提供了相关经验与技术支持。     

铁皮石斛茎段离体培养一次成苗技术研究

【目的】简化铁皮石斛繁育流程,缩短育苗周期.【方法】以铁皮石斛茎段为外植体,研究了铁皮石斛茎段组织培养一次成苗技术.【结果】70%的乙醇30s+1‰升汞10min消毒效果较好,外殖体污染率为43%,诱导率达97%;一次成苗培养基1/2 MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 3mg/L+香蕉泥100g/L+琼脂7‰+蔗糖25g/L增殖及生长情况最好;在该组培系统中铁皮石斛适宜的继代周期为50d,成苗率100%,平均根数5.4,繁殖系数5.6;铁皮石斛丛生芽移栽以腐叶土和腐叶土∶河沙(1∶1)两种基质的成活率高,且生长健壮.【结论】本技术简化了铁皮石斛组培工艺流程,缩短了育苗周期,降低了生产成本,适用于规模化生产.     

3种植物生长调节剂对铁皮石斛种苗生长的影响

以石斛种子为材料,研究3种植物生长调节剂6-BA、NAA、IBA对铁皮石斛种苗生长发育的影响.结果表明,植物生长调节剂的种类和浓度对铁皮石斛种苗的繁殖、生长速度影响差异显著.3种植物生长调节剂对石斛种子分化时间影响的顺序是NAA＞6-BA＞IBA,对石斛不定芽生长影响的顺序是IBA＞6-BA＞NAA.NAA浓度为0.5 mg/L,IBA浓度为0.3mg/L时种胚的分化和种苗生长都较好.在培养前期,添加1 mg/L的6-BA有利于种胚分化.     

铁皮石斛种子试管苗的快速繁殖研究

为研究铁皮石斛种子试管苗的快速繁殖技术,以铁皮石斛的种子为外植体。在不同培养基、不同的激素组合进行诱导产生试管苗,用松树皮作为移栽基质。结果表明:铁皮石斛种子在不同激素的培养基上均能萌发;不同培养基对铁皮石斛原球茎的增殖、分化有明显差异,其顺序依次为改良MS>N6>MS>1/2N6>1/2改良MS>1/2 MS,以改良MS培养基最好;不同激素组合对铁皮石斛原球茎的增殖、分化有明显差异,其顺序依次为B5>B2>B3>B1>B4;不同激素组合对铁皮石斛生根有影响,其顺序依次为C2>C3>C1。因此,比较适合铁皮石斛种子萌发的激素是1/2MS+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L;适于铁皮石斛原球茎增殖、成苗的培养基及激素组合为改良MS+6-BA0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L;适于铁皮石斛原生苗生根的培养基为改良MS+ABT60.6 mg/L+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖15 g/L。在改良MS培养基中不加任何水果汁诱导铁皮石斛种子,获得了大量试管苗,移栽成活率达到90%以上。     

黑节铁皮石斛组织培养技术研究

对黑节铁皮石斛茎尖原球茎诱导和茎尖增殖以及小苗生根进行了初步研究。采用黑节铁皮石斛无菌苗茎尖,经过75%乙醇消毒30 s后,去除表皮,黑节铁皮石斛带节茎尖原球茎诱导与茎尖增殖最佳培养基为1/2MS+5.5 g/L琼脂+0.55 mg/L 6-BA+0.55 mg/L NAA+0.1 mg/L AgNO_3+100 g/L土豆泥+20 g/L白砂糖+0.45 g/L活性炭。黑节铁皮石斛生根最佳培养基为1/2MS+5.5g/L琼脂+0.15 mg/L 6-BA+0.55 mg/L NAA+0.1 mg/L AgNO_3+100 g/L香蕉泥+20 g/L白砂糖+0.25 g/L活性炭。     

矮壮素(CCC)在铁皮石斛试管苗快繁上的应用研究

在现有组培技术基础上,通过矮壮素(CCC)的调节作用提高铁皮石斛试管苗的粗壮度和抗逆性。试验选用光明2号铁皮石斛试管苗,培养基1/2MS+NAA 0.1mg/L+蔗糖30 g/L+香蕉7%+AC0.1 g/L,矮壮素浓度0 mg/L、10 mg/L、30 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L、300 mg/L、400 mg/L,光照8 h/d,培养观察各组试管苗生长的农艺性状。结果表明,矮壮素对培育健壮的铁皮石斛试管苗有理想的调控效果,驯化成活率可达到100%,其最适浓度为150 mg/L。     

海南石斛与昌江石斛体外抗菌活性实验研究

为探索海南石斛(Dendrobium hainanense)和昌江石斛(Dendrobium changjiangense)不同提取部位的体外抗菌效果,以金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、白色念珠菌为受试菌株,采用倍比稀释法、琼脂平板法对海南石斛和昌江石斛不同部位进行抗菌活性筛选,并考察对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的生长抑制曲线和电导率变化情况。结果表明,A、E能显著抑制金黄色葡萄球菌的正常生长,A对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度(MIC)为2.5 mg/mL,最低杀菌浓度(MBC)为5.0 mg/mL;E对金黄色葡萄球菌MIC和MBC均为2.5 mg/mL;且E极显著增加金黄色葡萄球菌的渗透性。A、C、E显著抑制白色念珠菌的正常生长,F极显著抑制白色念珠菌的正常生长,增加白色念珠菌的渗透性,F对白色念珠菌的MIC和MBC均为1.25 mg/mL。表明海南石斛的乙酸乙酯部位对金黄色葡萄球菌有较强抗菌效果,昌江石斛的乙酸乙酯部位对白色念珠菌具有较强抗菌效果,该结论为海南石斛和昌江石斛进一步开发奠定了科学基础。     

多粘类芽孢杆菌防治铁皮石斛细菌性叶斑病及促生效果

采用双层培养法测定了生防细菌多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛细菌性叶斑病病原细菌的拮抗活性,温室试验测定了CF05防治铁皮石斛细菌性叶斑病的效果。结果表明,CF05菌剂显著抑制铁皮石斛细菌性叶斑病病原细菌的生长,对病害的防治效果达到636%。同时,CF05菌剂显著促进铁皮石斛的生长,鲜质量提高了310%,侧芽增加3158%。