直接进样和柱前衍生2种方法检测水中草甘膦及其降解产物的残留

[目的]本文旨在建立不衍生直接通过液相色谱质谱联用(HPLC-MS/MS)检测水中草甘膦和氨甲基膦酸的方法,并对传统柱前衍生HPLC-MS/MS检测水中草甘膦和氨甲基膦酸的方法进行优化,进而对2种方法进行系统比较。[方法]直接进样法:样品过0.22μm水系滤膜后直接进样检测,以乙腈和16 mmol·L~(-1)氨水为流动相,HSS T3色谱柱梯度洗脱,负离子源模式,HPLC-MS/MS检测;柱前衍生法:样品经过9-芴基甲基三氯甲烷(FMOC-Cl)柱前衍生后过0.22μm水系滤膜,以乙腈和1%甲酸+10 mmol·L~(-1)乙酸铵为流动相,BEH C_(18)色谱柱梯度洗脱,正离子源模式,HPLC-MS/MS检测。[结果]直接进样法:草甘膦和氨甲基膦酸在0.5～200μg·L~(-1)线性关系良好,检出限(以3倍信噪比计)分别为0.104和0.072μg·L~(-1),定量限(以10倍信噪比计)分别为0.348和0.241μg·L~(-1),空白水样2种物质5个浓度水平的添加回收率为81.98%～111.24%,相对标准偏差(RSD)为2.18%～16.52%。柱前衍生法:草甘膦和氨甲基膦酸在0.5～200μg·L~(-1)线性关系良好,检出限(以3倍信噪比计)分别为0.019和0.024μg·L~(-1),定量限(以10倍信噪比计)分别为0.063和0.078μg·L~(-1),空白水样2种物质5个浓度水平的添加回收率为85.56%～110.32%,RSD为0.44%～8.44%。[结论]柱前衍生法和直接进样法都能满足水中草甘膦和氨甲基膦酸的检测要求,前者具有更好的灵敏度,但是需要复杂的衍生步骤,且衍生时间需4 h以上;而直接进样法省去衍生步骤,易于操作,方便快捷。     

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法。方法用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4%～100.1%,RSD为1.6%～3.4%。结论建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定。     

柱前衍生RP-HPLC法测定犀牛角中氨基酸的含量

[目的]建立柱前衍生法测定犀牛角中氨基酸含量的方法。[方法]犀牛角以酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,采用柱前衍生-液相色谱法(RP-HPLC)法测定氨基酸含量。色谱条件为:色谱柱为Waters Nova-Pak C18柱(150 mm×3.9 mm,5μm),以乙腈-缓冲盐为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,紫外检测器检测波长为248 nm,柱温为37℃。[结果]17种氨基酸在0.003 4～0.191mg/ml范围内有良好的线性关系(r0.999 4),平均回收率(n=6)为97.8%。[结论]犀牛角中含有大量的氨基酸,其总氨基酸含量高达41.3%。该方法对研究犀牛角的药用价值与寻找犀牛角药用替代物有积极意义。     

柱前衍生高效液相色谱法测定果蔬产品阿维菌素及其有毒代谢物的残留量

 建立了快速测定果蔬产品中阿维菌素及其有毒代谢物残留量的柱前衍生高效液相色谱测定方法。果蔬样品经乙腈提取后，直接采用三氟乙酸酐(TFAA)－N－甲基咪唑(NMIM)－乙腈(ACN)法进行柱前荧光衍生化，后以高效液相色谱-荧光检测器进行阿维菌素残留分析。试验结果表明，本方法对果蔬产品中的阿维菌素及其有毒代谢物残留量的最低检测浓度为1μg·kg-1，在0.001～0.1mg·kg-1时，阿维菌素的添加回收率在84.2%～110.8%之间，变异系数（C.V.%）在1.9%～12.8 %。     

GC检测鲜切草鱼产品中氯霉素前处理条件优化

为探究气相色谱法(GC)检测鲜切草鱼中氯霉素(CAP)含量的最佳前处理条件,对加标溶剂、净化方法、C_(18)柱活化过程、C_(18)柱洗脱剂选择、衍生环境、衍生温度、衍生时间7个试验条件进行优化研究。结果表明,水为加标溶剂,选用C_(18)柱为净化萃取柱,萃取柱活化方法为甲醇、氯仿、甲醇、水依次加入5 m L,甲醇为洗脱剂,用量为2 m L×2 m L,在70℃恒温条件下衍生25 min,回收率可达到118.8%~120.0%,RSD为0.12%~0.96%。     

柱前衍生化高效液相色谱检测木糖液中葡萄糖含量

建立了木糖母液及发酵液中葡萄糖的柱前衍生化HPLC检测方法。以l-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）为柱前衍生化试剂,在ZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱上,流动相采用95％A（醋酸盐缓冲液,O．1mol·L-1,pH=5．71）,5％B（乙腈）等比洗脱,检测波长245rim,带宽50nm。目标组分葡萄糖衍生物基线分离无干扰,葡萄糖在2．5-50．0mg·L-1。浓度范围内呈现良好的线性关系,方法检测限为0．2mg·L-1。方法样品前处理简便,灵敏度高,重现性好。     

柱前衍生HPLC法检测罗非鱼肌肉中的硫酸新霉素

硫酸新霉素本身没有紫外吸收,必须通过柱前衍生来进行荧光榆测.建立合适的衍生方法是提高检测灵敏度的关键,通过对硫酸新霉素衍生方法的优化,确定衍生化学试剂氯甲酸戊甲酯乙腈溶液的浓度为8 mmol/L,存pH值为7.8的硼酸缓冲液中衍生反应15 min,10 h内检测可得到理想的结果.对硫酸新霉素检测方法优化后,该药物在罗非鱼肌肉中检测限可达到0.02mg/kg.定量限为0.05 mg/kg,在0.05～5 mg/kg浓度范围内有良好的线性关系(r2=0.9956),在肌肉中分别按照0.10、0.50、1.00 mg/kg的标准添加硫酸新霉素,回收率分别为76.43±1.46%、79.47±1.71%、86.82±1.13%.     

氨基酸分析方法

该研究从分析化学角度,介绍了一些重要的氨基酸分析方法,其中包括柱前衍生化法以及柱后衍生化方法,总结了柱前衍生化法、柱后衍生化法及其不同衍生试剂的优缺点,为氨基酸分析方法的应用提供了理论基础。     

免疫亲和柱-高效液相色谱荧光检测法测定饲料中的T-2毒素

建立了免疫亲和柱净化-柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测器测定饲饲料中T-2毒素含量的方法。样品经甲醇-水(体积比80:20)提取,通过免疫亲和柱(IAC)净化,以1-蒽腈(1-anthroylnitrilc,1-AN)为衍生化试剂、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)为催化利进行衍生,C1 8色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量。结果表明:T-2毒素的线性范围为10～200μg/L,加标回收率为76.9%～92.1%,相对标准偏差(RSD)小于6%。该方法可用于饲料中T-2毒素的测定。     

十四碳酸2-硝基苯肼衍生物对照品的制备

为测定柱前衍生HPLC分析脂质中脂肪酸组成的衍生率,制备了十四碳酸2-硝基苯肼衍生物(Myristic acid 2-nitrophenylhydrazine,MANPH)对照品.以吡啶为催化剂,在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐为偶联剂下,十四碳酸与2-硝基苯肼反应,衍生为十四碳酸2-硝基苯肼衍生物,采用硅胶柱层析和重结晶对衍生产物进行分离纯化,通过质谱和1H-NMR进行结构鉴定,通过薄层色谱检测和HPLC进行纯度检测,结果显示分离纯化获得了MANPH对照品,纯度为99.81%,符合化学对照品的相关要求.     

柱后衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定水中农药呋喃丹

[目的]采用固相萃取提取柱后衍生高效液相色谱法测定水中的呋喃丹。[方法]水样经ENVI-18萃取柱富集、净化,以甲醇-水为流动相梯度洗脱,色谱柱分离,通过柱后衍生反应后,用荧光检测器检测。[结果]呋喃丹在检测条件下的线性相关系数为0.999 8,最小检出限为0.036μg/L,回收率为91.5%-97.3%。[结论]该方法线性范围宽、灵敏度和准确度高,完全能满足水质监测要求。     

RP-HPLC法检测大鼠海马中4种氨基酸类神经递质含量的研究

建立了RP-HPLC测定大鼠海马中4种氨基酸类神经递质含量的方法。以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生化试剂进行柱前衍生,色谱条件为Diamonsil C18(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱,乙腈和醋酸钠缓冲液为流动相,采用二元梯度洗脱,UV350nm检测。结果显示:在18min内,4种氨基酸分离完全,在0.01~100μg/mL范围内线性关系良好,天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)相关系数分别为0.9985、0.9976、0.9943、0.9924;日内变异系数分别为2.4%、3.8%、3.2%和3.5%;标准加入平均回收率分别为94.80%、93.93%、92.69%和96.74%。     

高效液相色谱法快速测定草莓中7种氨基酸酯类农药残留

建立草莓中涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜、灭多威、克百威、三羟基克百威、甲萘威等7种氨基甲酸酯类农药残留量的固相萃取-高效液相色谱柱后衍生荧光测定的分析方法。样品前处理采用乙腈提取、氨基柱净化,C₁₈色谱柱分离、高效液相色谱仪-柱后衍生-荧光检测器分析检测。结果表明,通过该方法检测,7种氨基甲酸酯类农药在25min内得到良好的分离,线性相关系数(R²)为0.999932~0.999998,定量限达0.005~0.008mg·kg^-1。当添加水平为0.05mg·kg^-1时,回收率为81%~110%;当添加水平为0.10mg·kg^-1时,回收率为87%~116%。该方法前处理用时较短,操作简单且效果显著,有助于提高检测工作效率。     

AccQ-Tag-HPLC法测定烟叶生长过程中游离氨基酸的变化

[目的]在AccQ-Tag分析包的基础上建立一种适合烟草中游离氨基酸测定的方法。[方法]采用WATERS公司的AccQ-Tag试剂包作为构建方法的基本条件,通过优化烟草中游离氨基酸的前处理和色谱条件,以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生试剂与各氨基酸柱前定量衍生后,再用AccQ-TagTM柱梯度洗脱,建立了烟叶中游离氨基酸的AccQ-Tag-HPLC测试方法。[结果]用该方法测定烟叶杀青样品中的游离氨基酸,能够分离检测烟叶中的16种游离氨基酸,其回收率均在82.8%～105.3%,标准偏差均在2.5%以内,具有较好的重现性和回收率。烤烟杀青样中游离氨基酸以脯氨酸、天门冬氨酸、丝氨酸和丙氨酸含量较高。[结论]AccQ-Tag-HPLC法是一种实用的烟草中游离氨基酸的分析方法,适于烟叶中游离氨基酸从旺长期到成熟期的不同时段含量变化的测试。     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC测定大鼠肝组织18种氨基酸

目的采用柱前衍生RP-HPLC法测定大鼠肝脏组织中18种氨基酸的含量。方法以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生化试剂,采用Hypersil BDS C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇作为流动相A,0.015mol·L-1醋酸钠缓冲液(pH=6.0)作为流动相B,梯度洗脱,柱温30℃,流速为1ml·min-1,检测波长360nm。结果在30min内大鼠肝脏组织中的18种氨基酸可以得到完全分离,且各氨基酸浓度与峰面积之间具有良好的线性关系,回收率在88.3%~110%之间。结论该方法简便、快捷、灵敏、准确,有高度的稳定性和很好的重复性。可以为其他生物样品氨基酸测定提供参考。     

高效液相色谱法分析霉菌干酪中游离氨基酸含量

近年来,国内外对干酪的研究工作在不断深入开展。霉菌干酪在干酪研究中具有非常重要地位。霉菌干酪在成熟过程中产生一定量氨基酸,它对干酪的风味产生重要影响。因此,对霉菌干酪中的游离氨基酸的组成和含量进行监测,以获得霉菌干酪过程中氨基酸变化模式具有非常重要的意义,目前国内尚未有对霉菌干酪中游离氨基酸进行检测的报道。目前柱前衍生反相高效液相色谱测定氨基酸技术取得很大进展[1-2]。邻苯二甲醛(OPA)衍生步骤简单、反应速度快,剩余试剂不干扰测定,因此在柱前衍生试剂中以OPA的应用最为广泛。本文采用HP1100系列高效液相色…     

高效液相色谱法分析霉菌干酪中游离氨基酸含量

近年来,国内外对干酪的研究工作在不断深入开展。霉菌干酪在干酪研究中具有非常重要地位。霉菌干酪在成熟过程中产生一定量氨基酸,它对干酪的风味产生重要影响。因此,对霉菌干酪中的游离氨基酸的组成和含量进行监测,以获得霉菌干酪过程中氨基酸变化模式具有非常重要的意义,目前国内尚未有对霉菌干酪中游离氨基酸进行检测的报道。目前柱前衍生反相高效液相色谱测定氨基酸技术取得很大进展[1-2]。邻苯二甲醛(OPA)衍生步骤简单、反应速度快,剩余试剂不干扰测定,因此在柱前衍生试剂中以OPA的应用最为广泛。本文采用HP1100系列高效液相色…     

柱前衍生RP-HPLC法测定狗尾草种子氨基酸含量

【目的】采用柱前衍生反相高效液相色谱(RP-HPLC)法检测狗尾草种子中游离氨基酸和水解氨基酸含量,为阐明其应用价值提供支撑。【方法】制备狗尾草种子的水解氨基酸样品溶液和游离氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯和三乙胺进行柱前衍生,建立RP-HPLC法,检测方法的精密性、稳定性、重复性。利用RP-HPLC法,采用梯度洗脱方法,检测狗尾草种子中游离氨基酸和水解氨基酸含量。【结果】21种氨基酸的检测浓度线性范围为0.001 9~2.700 0μmol/mL,相关系数R2均≥0.999 0。21种游离氨基酸的平均加样回收率在87.50%~100.20%,相对标准偏差(RSD)在0.82%~2.46%;水解氨基酸的平均加样回收率在91.10%~100.21%,RSD在0.52%~2.08%。必需氨基酸和半必需氨基酸在狗尾草21种游离氨基酸和水解氨基酸中均含有,但水解后色氨酸、天冬酰胺、组胺酰胺遭到了破坏,含量较低。【结论】建立的氨基酸测定方法稳定、快速、精密度高、线性范围宽,适合狗尾草种子中游离氨基酸和水解氨基酸的含量测定。狗尾草种子中含有丰富的游离和水解氨基酸。     

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐衍生化条件优化及在土壤残留检测中的应用

为考察衍生化反应时间、温度、光照、衍生化试剂浓度以及衍生化产物稳定性等因素对衍生化反应的影响,建立测定土壤中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的柱前衍生化高效液相色谱荧光测定方法,采用三氟乙酸酐(TFAA)-N-甲基咪唑(NMIM)-乙腈(ACN)法进行柱前衍生化,研究衍生化因子的影响.土壤样品经甲醇提取,以高效液相色谱-荧光检测器进行甲维盐残留量分析结果表明:在20℃,避光条件下,先后加入等量NMIM-CAN(1+9)和TFAA-CAN(1 +9),衍生化效率达到最高,此时,对土壤中甲维盐的最低检测浓度为0.001 mg· L-1;在0.005～1 mg·kg-1时,甲维盐添加回收率为91.74％～102.68％,变异系数在2.55％～7.55％之间.在最大衍生率下,高效液相色谱-荧光检测法准确可靠,灵敏度和准确度均达到农药残留检测的要求.     

高效液相色谱法对鲢鱼、鳙鱼和草鱼肌肉中氨基酸含量的测定

建立了高效液相色谱法检测鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙鱼(Aristichthys nobilis)和草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉中氨基酸含量的方法 ,采用专用氨基酸Eelipse-AAA色谱柱,以硼酸缓冲液为pH调节剂,以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为柱前衍生化试剂,磷酸氢二钠、甲醇、乙腈和水为流动相,柱温40℃条件下分离目标化合物,同时用紫外检测器(DAD)和荧光检测器(FLD)检测同一个样品,对比两种检测器的检出限,利用两种检测器的检测结果来判定氨基酸的含量。结果表明,17种氨基酸在26 min内用紫外检测器能很好的分离,16种氨基酸在26 min内用荧光检测器也能较好的分离;鲢鱼、鳙鱼、草鱼的必需氨基酸占总氨基酸的比例分别为35.75%、34.67%、36.24%。