金属硫蛋白应用研究进展

金属硫蛋白是一类低分子质量、高巯基含量、能结合金属离子具有独特性能的蛋白质。金属硫蛋白具有强烈的消除自由基的作用,可作为营养添加剂单独使用,或与GSH、VC、VE等配合使用,同时具有抑制脂质过氧化损伤、保护细胞、降低血液粘度、改善血液循环和提高机体免疫等多种生物功能。文章主要阐述了MT在吸收及动力学、医学、化妆品、保健食品中的应用研究。     

金属硫蛋白的检测方法及其应用

金属硫蛋白(MT)是一种普遍存在、富含金属和半胱氨酸的低分子量蛋白质,主要包括Ag、Au、Bi、Cd、Hg、Zn等硫蛋白,MT具有在体内可被金属和其他因素诱导合成的生物学特性。ELISA以其灵敏度高、特异性强且测定相对迅速、方便、无需特殊昂贵的仪器设备、无放射性同位素的污染等特点成为MT定量检测的理想方法。MT在与金属有关的动物机体的生理学研究、某些微量元素营养性缺乏症的诊断、治疗以及保护环境等方面起着重要作用,随着对MT研究的日益深入,不断对ELISA方法的改进,利用ELISA检测MT有着广阔的前景。     

镉诱导黄瓜金属硫蛋白的分离、纯化和鉴定

[目的]通过不同浓度Cd2+诱导黄瓜产生金属硫蛋白,探寻植物金属硫蛋白含量与Cd2+浓度关系。[方法]用不同浓度Cd2+诱导黄瓜幼叶组织产生金属硫蛋白,经Sephadex G-50凝胶过滤层析纯化后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定黄瓜金属硫蛋白的分子量。[结果]1 000 mg/LCd2+诱导黄瓜幼叶产生金属硫蛋白的产量最高,可达2.62μg/g。黄瓜金属硫蛋白的分子量为9.5 kD。[结论]黄瓜是一种对Cd2+敏感的植物。Cd2+诱导的金属硫蛋白含量与Cd2+浓度呈正相关。     

植物金属硫蛋白研究进展

植物金属硫蛋白是一类可与金属子结合的、富含半胱氨酸残基的小分子蛋白,在植物界广泛存在,可以被众多非生物因素诱导产生,其所具有的强烈的清除自由基和结合重金属离子的能力使其成为植物研究的热点。对植物金属硫蛋白的分类、基因结构与调控、结构、性质与应用、分离纯化与检测等方面的近期研究进展作简单介绍,同时提出一些研究中存在的问题,并对其研究前景进行展望。     

金属硫蛋白的生理作用及在医学上的应用

本简述了金属硫蛋白参与生物体内重金属离子代谢，消除重金属毒性，清除自由基和调节动物某些生理过程的作用以及在癌症治疗，抗肿瘤，抗辐射等方面的应用。     

猪金属硫蛋白抗体的制备

以自猪肝提取的金属硫蛋白（MT）与牛备清白蛋白（BSA）偶联物为抗原,免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体。结果表明：加强免疫间隔时间10d，MT首次免疫量保持在16-32μg／只，加强免疫时用量依次加倍，其免疫效果最佳，可使大部分小鼠抗血清效价达到1：16以上。随后．将这部分抗血清IgG提纯并达到电泳纯，经直接ELISA鉴定其确为猪MT的特异性抗体．表明可用于酶标记方法检测猪MT。     

金属硫蛋白及其生物学功能

金属硫蛋白能够清除体内自由基、缓解动物应激、调控体内微量元素代谢及重金属解毒、调控机体发育。文章介绍了金属硫蛋白的理化性质、主要功能及其应用。     

柽柳金属硫蛋白基因的克隆及分析

应用生物信息学技术从柽柳cDNA文库中分离出了一种金属硫蛋白全长cDNA序列,去除PolyA后该基因全长517bp。其中,5′非翻译区31bp,3′非翻译区267bp,开放读码框(ORF)长219bp,编码72个氨基酸,含13个半胱氨酸Cys,分布在蛋白质的N端和C端,呈CXC形式排列,基因编码蛋白的分子量为7.1kD,等电点为4.71。疏水性分析表明,蛋白的30～50个氨基酸之间有较强的疏水性,经过Pfam15.0(St.Louis(USA))分析证明,为金属硫蛋白家族基因。金属硫蛋白基因参与了植物的发育、胚胎发生、抵抗逆境胁迫等多种生理过程,是一种重要的功能基因。此基因的Genbank登录号为AY620987(基因),AAT39518(蛋白)。     

金属硫蛋白作为重金属污染生物标志物的研究进展

金属硫蛋白(MT)是一类普遍存在于生物体内的低分子量、富含半胱氨酸、热稳定性、可诱导型非酶蛋白,具有维持生物体内金属含量动态平衡和重金属解毒作用双重机制.大量研究表明,MT可作为重金属污染的生物标志物,用来预测生物体受重金属暴露的状况和重金属污染的压力,且对制定预防性的管理措施、及时监控环境污染皆具有重要的现实意义.本文根据国内外文献资料查阅及综合分析,主要阐述了金属硫蛋白的基本结构、多态性、生理功能及其作为生物标志物在环境污染检测与诊断方面的研究与应用.并展望其今后研究方向.     

植物金属硫蛋白的提取及检测

在综合动物金属硫蛋白的提取方法上,摸索了一种用于玉米金属硫蛋白的提取方法.以玉米幼苗叶片为材料,通过本研究所述方法提取了玉米金属硫蛋白(metallothionein,MT)的粗提液,该粗提液的特征吸收峰在290 nm处,且经脱金属处理后其290 nm处特征吸收峰明显降低,经SDS-PAGB检测,在分子量14 Kda附近有单一条带,表明所获粗提液中含有玉米金属硫蛋白.     

兔肝金属硫蛋白提取工艺研究

研究提取液Tris-HCl的浓度、pH、加热温度和时间对兔肝金属硫蛋白提取的影响,并用正交试验优选出最适提取条件,为兔肝金属硫蛋白的研究提供一种新的提取技术。结果表明,Tris-HCl的浓度对金属硫蛋白的提取效果影响最大,pH和加热时间次之,温度对其影响最小。金属硫蛋白的合适提取条件为Tris-HCl的浓度0.01mol/L,pH 8.2,热处理温度80℃,加热时间8min。     

灵芝金属硫蛋白基因的克隆及序列分析

采用RT-PCR和3′-RACE相结合的方法获得了灵芝(Ganoderma lucidum)金属硫蛋白的cDNA序列。该序列全长为315bp,5′-端非翻译区为47bp,3′-端非翻译区具有166bp,开放阅读框长度为102bp(包括一个终止密码子),可编码33个氨基酸。在其编码的氨基酸序列中半胱氨酸(Cys)含量最高,占21.2%,其次是丝氨基酸(Ser)和丙氨基酸(Ala),均占12.1%。对其编码的氨基酸序列进行分析发现该序列具有金属硫蛋白的保守序列模式,是金属硫蛋白家族的成员。     

白桦金属硫蛋白的生物信息学分析（英文）

[目的]分析白桦金属硫蛋白的生物信息学信息,为后续基因重要功能研究奠定基础。[方法]利用生物信息学方法和工具对白桦（Betula platyphylla）金属硫蛋白（metallothionein,MT）的理化性质、跨膜结构、疏水性/亲水性、二级结构、结构功能域、功能分类进行了分析和预测。[结果]金属硫蛋白的分子量为7.75 kD,等电点为5.66,中部有较强疏水区,而其两端为明显亲水区,其可能为非跨膜蛋白,主要构件为卷曲,属于Metallothio_2蛋白家族。[结论]该研究可为白桦金属硫蛋白基因功能研究提供参考。     

猪金属硫蛋白抗体的制备

以自猪肝提取的金属硫蛋白(MT)与牛备清白蛋白(BSA)偶联物为抗原,免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体。结果表明:加强免疫间隔时间10 d,MT首次免疫量保持在16~32μg/只,加强免疫时用量依次加倍,其免疫效果最佳,可使大部分小鼠抗血清效价达到1∶16以上。随后,将这部分抗血清IgG提纯并达到电泳纯,经直接ELISA鉴定其确为猪MT的特异性抗体,表明可用于酶标记方法检测猪MT。     

铜缺乏奶牛肝脏金属硫蛋白的层析特征

为阐明金属硫蛋白在铜缺乏奶牛肝脏中的代谢特征，选择铜缺乏区有明显临床症状的奶牛6头，采集肝脏样品后用差速离心法分离肝脏金属硫蛋白，以Sephadex-G75进行层析纯化，测定洗脱液中蛋白质、巯基含量、紫外光扫描值、216nm和260nm处吸收峰值及荧光扫描值。将6头健康奶牛的肝脏样品作为对照。结果表明，发病奶牛肝细胞浆Sephadex-G75凝胶层析液第1峰值各管中蛋白含量显著高于对照组，但第2、第3峰值各管中蛋白含量显著低于对照组；巯基含量的检测也显示了类似的结果。发病奶牛紫外吸收值及荧光吸收值出现第2峰或第3峰，且其含量显著高于对照。结论：铜缺乏能够改变奶牛肝脏中金属硫蛋白的代谢。     

铜缺乏奶牛肝脏金属硫蛋白的电泳特征

本实验选择铜缺乏区有明显临床症状的奶牛 6头 ,采集肝脏样品后用差速离心法分离肝脏金属硫蛋白 (MT) ,以Sephadex-G75进行柱层析纯化 ,将纯化后的 MT进行 SDS-PAGE不连续电泳 ,并作考马斯亮兰染色及扫描分析。将 6头健康奶牛的肝脏样品作为对照。实验结果表明 ,健康奶牛肝细胞浆 MT经不连续 SDS-PAGE电泳时可出现两条清晰的区带 ;发病奶牛的 MT除表现条清晰区外 ,同时在负极端条带前后位置均出现较为明显的杂带。发病奶牛的区带 及区带 的含量均显著大于健康奶牛。结论 :铜缺乏能够改变奶牛肝脏中 MT的代谢     

大珠母贝金属硫蛋白cDNA克隆与序列特征分析

[目的]探讨重金属对大珠母贝苗种存活的影响。[方法]对大珠母贝金属硫蛋白基因进行克隆和序列分析。[结果]结果表明,通过构建大珠母贝外套膜全长cDNA文库,首次克隆得到大珠母贝金属硫蛋白（PmMT）全长cDNA序列。该序列全长599 bp,5′UTR（Un-translated region）为75 bp,3′UTR为296 bp,开放阅读框（Open reading frame,ORF）为228 bp,编码75个氨基酸。编码的氨基酸中半胱氨酸含量丰富,达29.3%;赖氨酸和甘氨酸含量也较高,均为9.3%;不含苯丙氨酸、组氨酸、色氨酸和酪氨酸等芳香族氨基酸;含有软体动物等无脊椎动物金属硫蛋白的特征序列。序列特征分析表明,该序列具备金属硫蛋白的典型特征,是金属硫蛋白家族成员。[结论]该研究为海洋贝类金属硫蛋白的进化及功能研究提供基础资料。     

蜡梅金属硫蛋白基因的克隆与原核表达

金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类富含Cys,能够结合重金属的低分子量蛋白质,广泛分布于生物界。在构建好的蜡梅花cDNA文库并进行EST分析的基础上,通过随机克隆测序得到了1个蜡梅金属硫蛋白的cDNA,命名为CpMetallothionein(CpMT)。CpMTcDNA全长为1083bp,基因内部含有一长度为240bp的开放阅读框,可编码79个氨基酸残基。将CpMT插入原核表达载体pET-32a,并转化Origami2感受态细胞。诱导表达产物经SDS-PAGE结果显示,目的蛋白约为30kD。表达的融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白2种形式存在,用His-Bind蛋白纯化回收试剂盒对其进行纯化回收,得到了高纯度蛋白,为今后研究奠定基础。     

一个油茶金属硫蛋白基因的克隆与序列分析

在油茶cDNA文库和EST文库构建的基础上,根据油茶金属硫蛋白的FAST序列设计特异引物,以油茶近成熟种子为材料,利用3'RACE技术,克隆到1个金属硫蛋白基因的cDNA全序列.该基因全长为675 bp,其中5'非编码区59 bp,3'非编码区379 bp,开放阅读框长234 bp,编码78个氨基酸;该蛋白含有14个半胱氨酸,分布在蛋白质的N端和C端,呈CC,CX,CXXC形式排列.预测该蛋白相对分子量为7 864.9 Da;等电点为4.86;37～48位氨基酸间有较强的疏水区.多序列比对发现油茶MT核苷酸序列与茶的相似性达到99%,推导的氨基酸序列与茶完全相同,因此将该基因命名co_mtl.     

兔肝金属硫蛋白提取液的稳定性

研究Tris-HCl浓度、pH、温度、光照和乙醇对金属硫蛋白提取液稳定性的影响,为金属硫蛋白的研究提供资料.结果表明,金属硫蛋白在低浓度Tris-HCl中较稳定,0.01和0.02 mol/L Tris-HCl对其稳定性影响最小;pH对金属硫蛋白稳定性影响较大,pH 6～7时较稳定;光照对金属硫蛋白稳定性影响比较明显,其对硫蛋白具有破坏作用;乙醇对金属硫蛋白有明显的保护作用;金属硫蛋白具有很强的耐热性.