烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选和鉴定

为寻找防治烟草黑胫病新途径,2001至2003年,从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株,共分离到内生细菌株120株,经测定,8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用,这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示,55y,NN-3,YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑茵效果均在66%以上．根据内生细菌形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌,NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌,YN-4,YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌,且这4菌株均为烟草内生细菌．     

烟草黑胫病菌的拮抗根际细菌的筛选

 从重病田健株采集根际土样13份,分离根际细菌753株,室内平皿对峙筛选到拮抗烟草黑胫病菌的菌株98株,占分离菌株的12.7%。温室测定发现有20个菌株防治效果达40.0%以上,超过药剂对照的有4个菌株,防治效果分别为75.7%,78.6%,78.6%,79.3%。其中,大部分菌株对烟草有不同程度的促生作用。     

烟草黑胫病菌拮抗细菌的筛选与鉴定

从烟草根际土壤分离到107个细菌分离物,通过室内平板对峙培养筛选,筛选到13株对烟草黑胫病菌有拮抗作用的菌株,其中,LZ-7菌株的室内平板抑菌效果最好,抑菌圈直径达27.82 mm。经盆栽试验,LZ-7、A3控病作用较好,防治效果分别达59.12%和55.84%。通过16 S rDNA序列测定与分析,LZ-7与Bacillus pumilus的同源性为99%,初步鉴定证明该菌株属于短小芽孢杆菌。     

烟草内生细菌Itb295对黑胫病菌的抑制及其鉴定

[目的]确定分离自健康烟草植株的内生细菌Itb295的分类地位和生防潜能。[方法]通过平板对峙培养法测定菌株Itb295对烟草黑胫病菌的抑制作用,并结合菌株形态、生理生化特性和16S rDNA序列(GenBank登录号JF496206)比对分析确定该菌株的分类地位。[结果]鉴定Itb295菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。菌株Itb295对黑胫病菌菌丝生长抑制率为34.64%,受抑制的黑胫病菌菌丝膨大、扭曲、分支增多,不能正常生长,抑菌效果的可逆性分析显示受抑制的菌丝在OA培养基上能够正常生长。[结论]为烟草黑胫病的防治及内生细菌Itb295的进一步研究提供了理论依据。     

烟草黑胫病拮抗细菌菌群的筛选

从湖南烟区烟草黑胫病重发田块采集根际土壤样品共900份,经富集培养后筛选出195个对烟草黑胫病菌有拮抗效果的细菌菌群。菌群Miseq高通量测序结果表明:不动杆菌属(Acinetobacter)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)为拮抗细菌菌群共有的优势属。挑选5个抑菌效果较好菌群施入烟田土壤,B44R菌群对烟草黑胫病防效达51.56%。将这5个细菌菌群进行拮抗菌株分离筛选,获得的拮抗菌株分别属于芽孢杆菌属、不动杆菌属、寡养单胞菌属和克雷伯氏菌属。施入菌群后的土壤高通量测序结果显示这些拮抗细菌菌群可在土壤中定殖,其中不动杆菌属和芽孢杆菌属的种群数量显著增加。     

烟草黑胫病菌拮抗放线菌的筛选

采用稀释平板涂布法对29份根际土样进行分离,共获得239株放线菌,采用平板对峙培养法筛选得到48株对烟草黑胫病菌有拮抗作用的菌株,占筛选菌株的20.1％,根据形态和培养特征,48株拮抗放线菌被鉴定为链霉菌属(Streptomyces)和诺卡氏菌属(Nocardia),以链霉菌属为主,占拮抗菌的97.92％.对拮抗作用较好的4株放线菌进行了发酵液拮抗活性的测定,结果表明,4株放线菌平均抑制率为59.80％,其中菌株A27-12最高,为70.59％,菌株A30-19抑制率最低为50.00％,两者呈显著差异.4株菌株的温室盆栽防效测定结果表明,菌株A30-19效果最好,其平均防效为78.79％,与58％甲霜灵锰锌800倍液的防效无显著差异,另3个菌株A36-15、A27-12和A20-8对烟草黑胫病的平均防效分别为67.95％、57.41％和50.46％.     

烟草黑胫病菌拮抗放线菌LY18的分离筛选与鉴定

为了寻找对烟草黑胫病具有生防潜力的放线菌,笔者采用平板对峙法,从烟草黑胫病发病烟田健株根际土壤中,分离得到1株对烟草黑胫病菌具有显著拮抗效果的放线菌株LY18,其发酵液的无菌滤液对烟草黑胫病菌菌丝的抑制率达70%以上。电镜观察发现,抑菌圈周围的烟草黑胫病菌丝破裂、瘪陷。通过对LY18的形态观察、培养性状观察、生理生化测定结合16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为Streptomyces rajshahiensis。     

拮抗细菌对烟草黑胫病的防治效果研究

采用温室盆栽试验测试5株芽孢杆菌属生防细菌对烟草黑胫病的拮抗作用。结果表明,拮抗细菌芽孢杆菌1205对苗期烟草黑胫病有较稳定的防治效果,其分泌物还有促进烟株生长的作用,经鉴定1205菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。     

烟草黑胫病拮抗细菌的筛选及鉴定

从毕节8个县市种植烟草的田地采集土壤样品122份,共分离到细菌菌株630株,经平板对峙培养初筛到31株对烟草疫霉有拮抗作用的菌株,再次筛选表明5株细菌菌株在室内有较强的拮抗作用.通过形态特征观察、生理生化特征测定及16SrDNA序列分析,鉴定拮抗细菌1107为芽孢杆菌属短小芽孢杆菌,7403、1205、1601、5801为芽孢杆菌属.     

烟草黑胫病拮抗菌的筛选及其抑制作用研究

从河南省罗山县和舞阳县烟区采集的土壤样品,经分离纯化获得6个真菌菌株,采用平板对峙法发现其中1株真菌对烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae)有明显的抑制作用,其拮抗机理主要是拮抗作用、寄生作用和竞争作用。     

烟草内生细菌118防治黑胫病的机理研究

从烟草根部分离到的内生细菌118菌株,对烟草黑胫病有很好的防效。实验证明,其防治作用机理包括直接拮抗作用和诱导抗病作用。该菌能抑制烟草疫霉菌丝生长,游动孢子游动,萌发;而且具有诱导抗病作用。施菌后,POD,PAL活性明显上升。     

抗烟草黑胫病菌生防细菌筛选、鉴定及体外拮抗机理初探

【目的】从云南烟草黑胫病高发区烟草根际土壤分离对烟草黑胫病菌具有高效拮抗作用的菌株,明确拮抗菌株的分类地位,并进行体外拮抗机理初探,为烟草黑胫病的防治提供生防资源和参考依据。【方法】采用平板对峙法从烟草根际土壤中分离对烟草黑胫病菌具有拮抗作用的菌株,通过生理生化特性及16S rDNA序列分析对具有较强拮抗活性的菌株进行鉴定,并测定生防细菌在体外对烟草疫霉的生物防治活性及作用方式。【结果】从采集的烟草根际土壤样品中共分离出6株对烟草疫霉具有拮抗活性的细菌菌株,其中菌株CD-1表现出最强的拮抗活性,其抑菌带宽度达10.12 mm;根据生理生化特性和16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。菌株CD-1具有广谱抗真菌特性,其胞内和胞外均存在抗真菌物质,其中使用二氯甲烷作为细菌发酵液萃取剂所提取的抗真菌物质的抑制效果最好;在p H 6～8、温度40～80℃时表现出相对稳定的抑制活性;菌株CD-1在NB培养基中培养的上清液提取物和细胞提取物对烟草疫霉均表现出较强的抑制活性,其抑制率分别达76.91%和67.23%;菌株CD-1分泌的抗真...     

烟草内生细菌118防治黑胫病的机理研究

从烟草根部分离到的内生细菌118菌株,对烟草黑胫病有很好的防效,实验证明,其防治作用机理包括直接拮抗作用和诱导抗病作用.该菌能抑制烟草疫霉菌丝生长、游动孢子游动、萌发;而且具有诱导抗病作用,施菌后,POD,PAL活性明显上升.     

堆肥中烟草黑胫病拮抗放线菌的筛选

从堆肥土壤中分离筛选对烟草黑胫病具有拮抗作用的放线菌。用平板法对所采样品进行菌株分离获得原始放线菌275株。以烟草黑胫病菌为指示菌,采用对峙培养法,通过室内拮抗试验初步获得具有一定拮抗效果的菌株：A3、A4、A6、A10、A12、A24。其中A12拮抗效果最好,达4.50cm;其次是A10,达3.98cm;A6达3.56cm。同时采用盆栽法测定各个菌株的抑菌活性,试验结果表明,A6的防治效果最好,达到44.21%;其次为A24、A12、A10、A4,分别为21.11%、12.46%、6.51%和6.03%,说明菌株A6具有进一步开发的潜力。     

烟草黑胫病菌分子检测

随着聚合酶链式反应 (ＰＣＲ)技术的发展 ,用特异引物进行真菌种间核糖体ＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增以达到鉴定生物种的目的已成为一种简便、快捷的技术和方法。本试验根据从ＧｅｎｅＢａｎｋｄａｔａｂａｓｅ获得的疫霉属真菌 (Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｓｐｐ .)ｒＤＮＡＩＴＳ区段序列 ,合成了 1对 1 7ｂｐ特异寡聚核苷酸引物进行了不同病原菌、病组织及土壤中寄生疫霉菌 (Ｐａｒａｓｉｔｉｃａｖａｒ.ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ)的特异扩增试验 ,提供并完善了一套快速检测该菌的技术和方法。1　材料与方法1 1　供试菌株　烟草疫霉菌菌株 ,交…     

烟草黑胫病菌的寄主范围

【目的】探究烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var. nicotianae）的寄主范围,为烟草黑胫病菌的相关研究提供理论依据,为烟草黑胫病菌所致病害的综合防治提供决策依据。【方法】人工模拟烟草黑胫病菌在田间的侵染途径,采用菌丝块创伤和不创伤接种61种农作物及杂草的活体或离体组织,结合柯赫氏法则鉴定,对烟草黑胫病菌的寄主范围进行较为系统的大样本研究。【结果】烟草黑胫病菌在人工创伤条件下可侵染21科41属51种植物,在不创伤条件下可侵染10科15属16种植物,首次发现烟草黑胫病菌在人工创伤接种条件下可以侵染21科40属47种植物,在人工不创伤接种条件下可以侵染10科12属12种植物。【结论】烟草黑胫病菌在人工模拟条件下的寄主范围较为广泛,其中包括一些常见农作物和烟田常见杂草,当这些植物在有利于病害发生的高温阴雨潮湿气候条件下,在田间农事活动中受到机械创伤或遭受虫伤甚至没有损伤时,烟草黑胫病菌可能会对这些植物造成侵染,生产中应注意避免烟草同潜在寄主作物间作或连作。及时防除烟田杂草对烟草黑胫病菌所致病害的有效治理具有积极意义。     

防治烟草黑胫病内生细菌的分离鉴定及促生作用研究

通过常规分离方法、平板对峙培养法从健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌127株,从中筛选出8株菌株对烟草黑胫病菌有明显抗性,并对其进行了皿内拮抗试验、发酵液抑菌试验、温室盆栽试验和发酵液浸种、灌根试验,结果表明:8个菌株培养液滤液中存在具有明显抑菌作用的活性成分。以菌株wy11对烟草黑胫病的防效最好,防效为51.7%。菌株wy2发酵液浸种对烟草幼苗有显著促生作用,能显著提高地上部分鲜重、茎围、根长、叶长、叶宽。     

不同培养基对烟草黑胫病菌生长的影响

烟草黑胫病是烟草生产上一类毁灭性真菌病害,严重影响烟草的生产。为了烟草黑胫病的深入研究顺利进行,就云南烟草黑胫病菌在不同培养基上的生长情况进行了分析,结果表明烟草黑胫病菌株菌株在燕麦培养基、选择性培养基和玉米培养基上生长最好,菌落生长快,产生孢子囊的数量多、生物量高,不同菌株对培养基有一定程度上的选择性。     

中草药提取物复配对烟草黑胫病菌抑制作用增效组合筛选

用菌丝生长速率法测定苦参(A)、金银花(B)、黄岑(E)和补骨脂(F)4种中草药提取物对烟草黑胫病菌的抑制作用,建立了毒力回归方程.结果显示,4种药剂的EC50值分别为4.56、5.99、2.65、4.76 mL/L.根据共毒因子法判定4种药剂两两复配后的联合作用,结果表明,苦参+金银花、苦参+补骨脂和金银花+补骨脂组合抑菌增效作用明显,提取物复配后对病菌的抑制存在协同增效作用,复配物抑菌效果好于单剂,并筛选出了各组合的最佳配比.     

壳聚糖对烟草黑胫病菌抑制作用

以烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var nicotianae,Ppn）为材料,探讨了4种不同分子量的壳聚糖、壳聚糖的浓度和pH对烟草黑胫病菌的影响。结果表明,壳聚糖处理后烟草黑胫病菌菌丝出现畸变,正常的新陈代谢和细胞壁结构受到明显影响和破坏。在低浓度下（0．625mg·L^-1）,壳聚糖抑菌效果随分子量增大而增强;分子量越小受浓度影响越大,浓度≥5mg·L^-1时,分子量为4．7×10^4的壳聚糖抑菌效果最强。除分子量5．0×10^3的壳聚糖外,其它分子量较大的壳聚糖受pH影响明显。壳聚糖分子量不同,其抑菌主要机理可能也不同,浓度、pH和分子量对其抑菌活性具有较强的影响。