部分鸡场致病性葡萄球菌的分离·鉴定·药敏试验

[目的]从合肥地区部分养鸡场病鸡组织中分离葡萄球菌,并对其进行鉴定和药敏试验。[方法]从合肥地区部分养鸡场病鸡组织中分离葡萄球菌,并通过形态特征观察、溶血性试验、血浆凝固酶试验、生化试验对其进行鉴定,最后对其进行药敏试验。[结果]共分离到9株葡萄球菌。经鉴定,其中4株为金黄色葡萄球菌,在临床分离的葡萄球菌中为优势群株;在凝固酶阴性葡萄球菌中2株为头状葡萄球菌,孔氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌和沃氏葡萄球菌各1株。这说明金黄色葡萄球菌是合肥地区家禽养殖场中葡萄球菌类疾病的主要病原菌。药敏试验结果表明,所有分离菌株对12种临床常用抗生素均呈不同程度的耐药性,对青霉素、复方磺胺甲噁唑和恩诺沙星有较高的耐药性。凝固酶阴性葡萄球菌与金黄色葡萄球菌在抗药性方面存在差异。[结论]在用抗生素防治葡萄球菌病时需通过药敏试验进行药物筛选。该研究结果可为养鸡场用药提供参考。     

1株兔肺源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药分析

为了解四川某养兔场疑似金黄色葡萄球菌感染病例的病原菌及其药物敏感性,采集兔肺脏的化脓灶样品进行细菌分离纯化、染色镜检、培养特性、生化试验、16SrDNA序列鉴定及分离菌株的药敏试验和耐药基因检测。结果表明,分离鉴定出1株对小鼠具有致病性的金黄色葡萄球菌,药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离菌株具有多重耐药性,仅对头孢哌酮、头孢拉定、头孢噻吩、哌拉西林4种药物敏感,其他15种药物均耐受。耐药基因PCR检测结果显示,meca、aac(6′)/aph(2′)、 aph(3′)-III、 ant(4′,4′′)、 plw043耐药基因呈阳性,耐药表型和基因型相一致。     

拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌的鉴定及其耐药性分析

[目的]明确西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌常见肠毒素(SEs)基因分布特征及其多重耐药性,为牦牛肉源产SEs金黄色葡萄球菌的快速鉴定及其防控提供科学依据.[方法]通过Baird-Parker显色培养筛选及Nuc基因扩增鉴定从拉萨市牦牛肉样品中分离获得金黄色葡萄球菌,利用PCR鉴定分析金黄色葡萄球菌中9种常见SEs基因的分布特征,并采用K-B纸片扩散法对产SEs金黄色葡萄球菌进行多重耐药性分析.[结果]从100份牦牛肉样品中分离获得29株金黄色葡萄球菌,其SEs基因鉴定结果表明,9种SEs基因检测出6种(SEB、SEC、SEE、SEG、SHE和SEI),有3种(SEA、SED和SEJ)未检出.其中,SEG基因检出率79.31%,SEC和SEI基因检出率均为68.97%,SEB基因检出率55.17%,SHE基因检出率51.72%,SEE基因检出率3.45%.29株金黄色葡萄球菌对青霉素(P)、氨苄西林(AMP)、克拉霉素(CLR)、红霉素(E)和磺胺甲恶唑(SMZ)的耐药率较高,分别为79.31%、65.52%、58.62%、51.73%和31.04%;对阿米卡星(AK)、替卡西林(TIM)、苯唑西林(OX)、环丙沙星(CIP)和四环素(TE)的耐药率较低,分别为10.35%、6.90%、3.45%、3.45%和3.45%;对头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(CN)和氯霉素(C)尚未产生耐药性.29株金黄色葡萄球菌共表现出13种耐药谱,多重耐药率高达93.1%(27/29),其优势耐药谱为AMP/P、SMZ/CLR/E和AMP/P/CLR/E.[结论]西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌含有SEG、SEC、SEI、SEB、SEH和SEE等多种SEs基因,且对青霉素类、大环内酯类和磺胺类等多种抗菌药物已产生较强的耐药性.     

食源性金黄色葡萄糖球菌耐氨基糖苷类药物基因的多重PCR快速检测技术

为研究食源性金黄色葡萄球菌中MRSA及对氨基糖苷类庆大霉素、卡那霉素抗生素的耐药性情况,并建立快速检测鉴定金黄色葡萄球菌耐药性多重PCR方法。对金黄色葡萄球菌进行增菌培养,并提取DNA作为模板,以nuc基因作为菌属鉴定基因,mecA基因作为MRSA检测基因,aac(6')-aph(2')及aph(3')-Ⅲa基因作为耐氨基糖苷类庆大霉素、卡那霉素和妥布霉素的检测目的基因,建立四重PCR检测方法并进行特异性及灵敏度评价;利用所建立的方法检测19株金黄色葡萄球菌的分离株。结果表明:对19株金黄色葡萄球菌分离株的PCR检测结果与纸片扩散法的检测结果一致。所建立的多重PCR方法灵敏度高、特异性好,可以快速检测出MRSA,并对氨基糖苷类庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素耐药菌株检测具有较高的准确率。     

人体表金黄色葡萄球菌超抗原毒素基因型系统分析

采用以4组反应管同时检测18种金黄色葡萄球菌超抗原毒素的多重PCR检测方法,对人体表面分离的金黄色葡萄球菌进行超抗原毒素基因系统分型。结果表明,在人体皮肤、头发及鼻腔中采集的682份样品中共分离到16株金黄色葡萄球菌,鼻腔中检出率最高,为4.35%(10/230);分离株超抗原毒素基因携带率高达81.25%,多数菌株同时携带1种以上基因;肠毒素基因携带率为56.25%,所有携带肠毒素基因的菌株都携带至少1种传统肠毒素,其中sea携带率最高,其次为sec,而see未检出。     

猪体内金黄色葡萄球菌及凝固酶阴性葡萄球菌耐药性调查及耐药基因分布研究

2010年从广东省不同地区230头猪的淋巴结样品中分离鉴定出90株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌19株,凝固酶阴性葡萄球菌71株.采用琼脂稀释法检测其对14种抗菌药物的敏感性,并用PCR方法检测13种耐药基因的携带情况,运用统计学方法分析猪体内金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性和耐药基因分布情况的差异.结果显示葡萄球菌对大环内酯类、林可胺类和四环素类抗生素的耐药率较高(>80%).金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌对多数药物耐药情况及耐药基因的携带情况差异不显著,但对苯唑西林的耐药率及linA、ermB基因的携带率差异显著(P<0.05),凝固酶阴性葡萄球菌明显高于金黄色葡萄球菌.     

新疆牛源金黄色葡萄球菌抗菌素敏感性调查

[目的]了解新疆奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的药物敏感性情况,为该病治疗的临床用药提供参考。[方法]2009年以来对乌鲁木齐市、昌吉、呼图壁、奎屯、伊犁和库尔勒6地区16个奶牛养殖场乳房炎奶样分离金黄色葡萄球菌,用纸片扩散法进行抗菌素敏感性检测。[结果]共分离143株金黄色葡萄球菌,临床药敏试验显示,新疆70%以上分离株对红霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,40%的菌株对氯霉素、环丙沙星和庆大霉素耐药;并且67.1%菌株同时对5种以上抗菌素耐药,10.5%的菌株对所测试的10种抗菌素耐药。此外,发现了19.6%的牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。[结论]新疆奶牛乳房炎病例中的金黄色葡萄球菌对当前临床上允许使用的多种类型的抗菌素呈现严重的多重耐药,使用抗菌素进行奶牛乳房炎的防治难以取得理想的疗效。这类菌株的存在和蔓延将对新疆奶牛养殖业的健康发展和奶制品的安全构成威胁,建议在选择奶牛乳房炎治疗的抗生素时,应以流行菌株的耐药性为依据。     

绍兴市售酸奶中乳酸菌的分离鉴定及耐药性分析简

[目的]从绍兴市售酸奶中分离并鉴定乳酸菌,研究乳酸菌分离株对6种抗生素的耐药性。[方法]利用MRS培养基迎过稀释法分离酸奶样品中的乳酸菌并进行菌落计数,对分离菌株进行革兰染色和生化反应鉴定,同时采用纸片扩散法进行耐药性分析。[结果]从15种绍兴市售酸奶样品中共分离出31株菌,生化反应鉴定为嗜酸乳杆菌（6株）、保加利亚乳杆菌（7株）、嗜热链球菌（11株）和双歧杆菌（7株）;活菌计数结果显示,4份样品（26．7％）中乳酸菌计数低于国家标准,11份样品（73．3％）中活菌计数符合国家标准规定;耐药性试验结果显示,31株乳酸菌对4种抗生素均有一定程度的耐受性,且90．3％的菌株具有多重耐药性,能耐受2～3种抗生素。[结论]绍兴市售酸奶中乳酸菌已具有一定程度的耐药性,对酸奶产品进行耐药性监测和安全评价已势在必行。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌凝固酶基因型研究

 【目的】了解上海和贵州地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌凝固酶基因型情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】利用16S rRNA保守序列设计引物,PCR扩增鉴定金黄色葡萄球菌,并利用凝固酶基因及其酶切产物多态性对分离鉴定出的金黄色葡萄球菌进行了凝固酶基因分型。【结果】共鉴定出78株金黄色葡萄球菌,有74株金黄色葡萄球菌扩增凝固酶基因片段,分为5个基因型和两个亚型。PCR 1型为贵州地区优势基因型,PCR 3型为上海地区优势基因型。【结论】两地区各基因型菌株分布比例有显著的地域性差异,这与两地区地理环境和养殖水平差异对病原流行传播的影响有关。     

生牛乳中金黄色葡萄球菌的耐药性研究

为调查山东省生牛乳中金黄色葡萄球菌的耐药性情况,本研究采集山东省6个不同地区的130份生牛乳样品,进行金黄色葡萄球菌的分离、鉴定及耐药表型分析。结果表明,共有57份样品判定检出金黄色葡萄球菌,平均检出率为43.85%。对57份样品进行8大类12种抗生素的药敏试验,结果表明对青霉素的耐药率最高,为87.72%,同时对氨苄西林、红霉素和克林霉素的耐药率也达到较高水平,分别为84.21%、78.95%和56.14%。另外,57株金黄色葡萄球菌中有50株为多重耐药菌株,其中以耐3种药物与耐5种药物的菌株数最多,且耐药谱种类较多,受地区差异影响较大。该结果可为山东地区奶牛业规范使用抗生素提供一定参考。     

牛乳源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测与耐药性分析

从新疆昌吉、伊犁、石河子3个地区奶牛养殖场乳腺炎奶样中共分离134株金黄色葡萄球菌,对其中mecA基因阳性的30株进行了8种不同抗菌素敏感性检测。结果显示,分离自同一地区牛乳源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对不同药物的耐药性不同,不同地区牛源MRSA对同一药物的耐药性也存在差别。3个地区分离的牛源MRSA均对青霉素、氨苄西林表现为耐药。此外还发现,伊犁地区的所有菌株均对四环素敏感。该调查显示,新疆奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌中MRSA普遍存在,MRSA的分离率可达22.3%,且对当前常用的抗菌素呈现多重耐药现象。     

牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

研究金黄色葡萄球菌的耐药性状况,指导兽医临床用药。采用高盐甘露醇进行纯化培养,梅里埃全自动微生物分析系统对葡萄球菌鉴定板进行鉴定,纸片扩散法进行药敏实验。从阳性乳房炎样品中分离纯化并鉴定了样品中的金黄色葡萄球菌2株,测定了其耐药性。在选取的5种药物中,青霉素对分离病原菌的抗菌活性较高,其次是恩诺沙星和庆大霉素,而链霉素和磺胺嘧啶钠对分离病菌的抗菌活性较低。     

犬源金黄色葡萄球菌临床分离株的耐药性

对宠物门诊分离得到的25株金黄色葡萄球菌进行耐药性分析与β-内酰胺酶测定,以了解近3年来潍坊地区犬源金黄色葡萄球菌的耐药性及其是否产生β-内酰胺酶,以期为临床上致病性金黄色葡萄球菌感染的有效控制提供依据。使用纸片扩散法进行药敏试验;使用碘量法、酚红法测定β-内酰胺酶的产生。25株金黄色葡萄球菌对替考拉宁、利福平、万古霉素十分敏感,对其他25种药物呈现一定耐药性,并对大多数β-内酰胺类抗生素呈现很高的耐药性。碘量法、酚红法测得产β-内酰胺酶的菌株分别为18、17株。产β-内酰胺酶的菌株对万古霉素、利福平、替考拉宁不具有耐药性,对β-内酰胺类抗生素基本具有耐药性;不产酶的菌株对β-内酰胺类抗生素的耐药性低于产酶菌株。可见,β-内酰胺酶的产生是金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有耐药性的主要原因。     

产抑菌活性物质放线菌菌株的筛选

[目的]筛选产抑菌活性物质的放线菌菌株。[方法]以金黄色葡萄球菌、对青霉素和头孢菌素类耐药的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为指示菌,采用滤纸片扩散法对300株放线菌的发酵产物进行抗菌活性筛选,通过最小抑菌浓度法（MIC）对筛选的阳性菌株进行抗菌活性测定。[结果]筛选到抗菌活性物质产生菌111株,抑菌率为37.0%;其中对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和耐药金黄色葡萄球菌有抑制活性的菌株分别为111、10和47株。各菌株的最小抑菌浓度有很大差别,菌株174883对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,其发酵样品稀释到2 048倍仍然表现出抑菌活性。用青霉素酶和头孢菌素酶作用于阳性菌株发酵产物,筛选到6株菌株代谢产物的抑菌活性变弱,菌株32349和kj0428的抑菌活性被抑制最明显。[结论]筛选得到的阳性放线菌菌株具有良好的抗菌活性,为新型抗生素的筛选提供了研究基础。     

牛源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）;再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素和头孢唑林的敏感性高于90%,2株细菌的万古霉素MIC≥16 μg•mL-1;其中8株细菌的苯唑西林MIC≥8 μg•mL-1,而其它菌株的苯唑西林MIC≤2 μg•mL-1;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种及3种以上药物的菌株占84.21%,其中4株细菌能同时耐受9种不同抗菌药物;16（42.11%）株细菌被检测携带mecA耐药基因,而仅有其中7株的苯唑西林MIC≥4 μg•mL-1;头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐琼脂筛选法分别检出7株、10株和7株表型为MRSA的菌株。【结论】分离菌株的耐药性和多重耐药现象较为严重,被调查地区奶牛场中已经存在MRSA和OS-MRSA感染情况,且感染率高。     

金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎调查及菌株耐药性和毒力分析

为了研究金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎发病情况，及相应菌株的耐药性和毒力基因分布情况，从新疆乌鲁木齐、伊犁、昌吉地区的7个奶牛场随机采集患乳房炎奶牛乳汁样本，用绵羊血平板和Baird-Parker琼脂平板初筛，利用生化试验、16S rDNA序列分析鉴定金黄色葡萄球菌。先用K-B纸片扩散法对分离株进行药物敏感性检测，再用PCR方法检测其12种毒力基因，用小鼠攻毒试验检测其致病性。结果从142份乳汁样本中共分离出5株金黄色葡萄球菌，7个奶牛场有2个牛场检出并分离到金黄色葡萄球菌，分离率分别为7.14%(2/28)和8.82%(3/34)；药敏试验结果显示这些金黄色葡萄球菌对青霉素G、氨苄西林、链霉素、头孢他啶和阿莫西林的耐药率为60%~80%，对红霉素的耐药率为20%，所有菌株最少对1种药物耐受，最多耐5种药物；分离株中共检出nuc、clfa、fnbB、eta、sea 5种主要毒力基因，所有分离菌对小鼠均有很强的致病性。综上所述，所检牛场由金黄色葡萄球菌导致的奶牛乳房炎感染情况较为严重，分离菌耐药性不强，许多菌株携带多个毒力基因且具有很强的致病性。     

基于nuc基因的奶牛乳房炎性金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立

基于PCR扩增的高效性,建立了以耐热核酸酶基因(nuc)为靶标基因特异性检测奶牛乳房炎性金黄色葡萄球菌的PCR方法。本实验从分离获得的205株染色为革兰阳性、形态为葡萄串状的菌株中随机选取50株进行16S rRNA基因测序和nuc基因扩增。结果显示,其中有40株葡萄球菌均可扩增出约279 bp的条带,其余10株葡萄球菌均未扩增出预期大小的条带。传统生化鉴定及16S rRNA基因测序结果表明,40株扩增出约279 bp条带的分离株均为金黄色葡萄球菌,未扩增出预期大小条带的10株菌均是葡萄球菌属的其它种。这一结果表明,nuc基因的PCR扩增可作为金黄色葡萄球菌特异性检测的分子标记。     

张家口地区仔猪白痢病原菌血清型检测及药敏试验

[目的]为临床上选用仔猪白痢疫苗与防治用药提供参考。[方法]从20个规模化猪场采集40份仔猪白痢病料,对致病性大肠杆菌进行分离和生化鉴定,分析其血清型并检测其耐药性。[结果]从40份病料中分离出36株大肠杆菌,其中32株为致病性大肠杆菌。分离菌对16种药物均有不同程度的耐药性,最高为100%,最低为6%。所有分离菌均表现出不同程度的多重耐药性,其中22株分离菌为4耐以上的菌株。32株致病菌分布在9个血清型中。[结论]张家口地区规模化猪场仔猪白痢病原菌的优势血清型为O8、O149、O141和O54,占已定型菌株的59.3%。对仔猪白痢病原菌敏感率较高的药物为头孢噻肟钠、诺氟沙星、丁胺卡那和新霉素。     

新疆塔城地区传统酸马奶中Lactobacillus的分离鉴定及其耐药谱分析

[目的]通过对新疆塔城地区传统发酵酸马奶中Lactobacillus的分离鉴定和耐药谱分析,确定乳杆菌组成及其安全性。[方法]采用梯度稀释涂平板法分离,结合生理生化、属引物和16S rRNA基因扩增进行鉴定。[结果]从7份传统酸马奶中鉴定得到20株乳杆菌,L.plantarum为优势种。所有菌株对万古霉素具有耐受性,多重耐药菌株占85%。[结论]传统酸马奶中蕴含优良的微生物菌种资源,值得进一步研发和保护。     

牛肉中金黄色葡萄球菌的复核鉴定研究

[目的]采用2种方法复核检出牛肉中金黄色葡萄球菌阳性结果,确保检测结果的准确性。[方法]按照GB 4789.10—2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》方法前增菌、选择性分离培养、革兰氏染色和血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌,应用SN/T1870—2007《食品中致病菌检测方法实时PCR法》对疑似阳性结果进行了进一步验证和复核。[结果]经过2种方法验证可疑菌落,该批牛肉中检出金黄色葡萄球菌。[结论]分离并鉴定牛肉中金黄色葡萄球菌可疑样品时,可采用不同方法进行验证和复核,该方法可提高检测结果的准确性,可用于畜禽肉中致病菌的检测。