我国NADC30-like毒株流行现状 及猪繁殖与呼吸综合征防控策略再思考

猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来,NADC30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围的流行.需要特别注意的是,本次PRRS疫情的大范围流行是在高强度免疫弱毒疫苗的基础上发生的,这提醒有必要对PRRS的现行防控措施进行重新的梳理和反思.     

蓝耳病病毒类NADC30 毒株的免疫保护与防控策略

类NADC-30毒株打破了我国长期以来由经典毒株和高致病性毒株所组成的蓝耳病病毒的二元世界,并逐渐演变成为优势毒株.在此新形势下,本文综合了两项商品化蓝耳病疫苗的效果评估试验,得出结论:当前的蓝耳病疫苗免疫对于缩短类NADC-30毒株感染的临床发病时间、 改善增重水平确实存在一定作用,但其提供的免疫保护并不完全,免疫场仍然存在暴发类NADC-30毒株的风险.故猪场在使用疫苗的同时,仍然需要做好猪场选址与布局、 生物安全、 淘汰敏感种猪和隔离驯化后备猪方面的工作,以阻止或者降低类NADC-30毒株的暴发风险.对于暴发场,通过阻止发病猪群的病毒血症、 阻断怀孕母猪的垂直传播以及发病猪只的水平传播,并结合封场,淘汰敏感母猪,可将猪场损失降到最低.中国蓝耳病的根本解决之道是在有条件的区域开展蓝耳病的净化,给蓝耳病病毒毒株做减法,让猪场毒株种类越来越少.     

蓝耳病NADC30类毒株活跃猪场的稳定方案

<正>猪繁殖与呼吸障碍综合征(俗称猪蓝耳病)是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种猪的烈性传染病。该病1987年首次在美国发现,1996年国内首次报道。2006年我国暴发了高致病性蓝     

我国类NADC30猪蓝耳病的流行现状

自2012年以来,我国猪群中出现PRRSV的一种新亚型毒株,因其与美国PRRSV NADC30株具有较高的同源性,因此被称为类NADC30 PRRSV.目前类NADC30 PRRSV已在我国16个省份相继分离到,并且在近年来我国PRRSV中占据相当大的比例.类NADC30 PRRSV的出现,不仅增加了我国PRRSV流行毒株的复杂性,而且增加了猪蓝耳病防控的难度.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株的分离鉴定

对河南漯河地区某养殖场检出的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性病料进行处理,接种到原代猪肺泡巨噬细胞中,经细胞盲传成功分离出1株PRRSV毒株,命名为HeNLH2017株,并测定了该分离株在原代猪肺泡巨噬细胞上的生长曲线。为进一步分析该分离株的遗传进化特点,扩增测定了ORF5基因和部分Nsp2基因的核酸序列。核酸同源性分析显示,该分离毒株ORF5基因和Nsp2序列与NADC30毒株同源性最高,分别为93.4%和93.8%。遗传进化树分析显示,该分离株与我国2013年以来流行的NADC30-like(Lineage1)毒株处于同一进化分支。氨基酸序列比对分析显示,ORF5基因和Nsp2序列与NADC30-like毒株具有相似的遗传变异特点,且Nsp2序列存在特征性的131个不连续的氨基酸缺失。成功分离到1株NADC30-like毒株,有助于进一步认识NADC30-like毒株在河南地区的流行情况和临床致病特点。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株的毒力评价

为了评估当前优势流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）NADC30-like毒株的毒力,试验利用经猪肺泡巨噬细胞分离的5个NADC30-like毒株接种6～7周龄健康易感猪,以进行毒力评价（A-E组）,并设立未攻毒阴性对照组（F组）。所有组攻毒后进行临床症状观察,并在第0、3、5、7、10、14和21天采集全血、咽拭子和肛拭子进行病毒载量检测。结果显示,除D组外其他攻毒组表现一过性体温升高,偶有到41℃,而D组在攻毒后第4～15天,该组试验猪平均体温均不低于40.5℃,体温显著高于其他攻毒组。病毒血症检测发现,除D组外,其他攻毒组在第3、5、7和10天均为核酸阳性,在第14天部分转为核酸阴性,但到第21天又转为阳性,而D组从攻毒到结束病毒血症始终为阳性。肛拭子和咽拭子病毒载量测定发现,除D组外,其他攻毒组在第3、5和7天均为核酸阳性,在第10、14和21天部分猪有时转为阴性,后又转为阳性;D组攻毒到结束肛拭子始终为阳性。从上述数据统计综合分析,结果表明D组所攻击的毒株毒力高于其他毒株,可引起3/5猪发病,且死亡一头,该毒株感染能产生PRRSV的典型临床症状,可初步用于NADC30-...     

一例HP-PRRSV与NADC30-like毒株混合感染的实验室诊断

2022年10月中旬,湖南长沙某规模化猪场发生疑似猪繁殖障碍综合征疫情。为探究发病原因,采集病料样品进行细菌分离鉴定和常见病原荧光定量PCR（q PCR）鉴定。结果发现,病料样品中未分离得到细菌,q PCR检测结果显示组织病料为HP-PRRSV和NADC30-like毒株核酸阳性,其他病原核酸均为阴性。为进一步分析该猪场PRRSV流行株遗传变异情况,对PRRSV Nsp2基因序列进行逆转录PCR（RT-PCR）扩增、测序及分析。结果显示,HP-PRRSV株Nsp2基因序列与Hu N4-F112株（PRRSV弱毒疫苗株）同源性最高,类NADC30株Nsp2基因序列与已知NADC30株同源性最高。以上研究结果表明,该场疫情是HP-PRRSV和类NADC30株混合感染引起,其中HP-PRRSV可能为弱毒疫苗株。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株NADC30-like流行情况及防控措施

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)引起妊娠母猪、仔猪的一种繁殖障碍与呼吸系统疾病,是一种高度接触性的病毒性传染病,给我国乃至全世界的养猪业造成巨大的经济损失。临床上主要引起感染猪高热、厌食、呼吸困难,妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊胎等。2013年以来NADC30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行,近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其防控措施,对进一步防控该病及保障我国生猪健康养殖,具有重要意义。     

多毒株蓝耳病混合感染的防控案例

<正>本文报告了某猪场保育猪蓝耳病经典毒株、高致病性毒株和类NADC30毒株混合感染的防控案例。采用种猪群和断奶仔猪同时加药保健、种猪群和商品猪同时使用蓝立优和蓝净优组合免疫、加强生物安全措施和饲养管理等综合防控方案半年后,猪群稳定。表明蓝立优免疫后不仅可以抵抗蓝耳病经典毒株和高致病性毒株的感染,还可以抵抗类NADC30毒株的侵害。     

猪繁殖与呼吸综合征 病毒类NADC30毒株的新近流行

猪繁殖与呼吸综合征是严重危害养猪生产的病毒性传染病.自20世纪90年代中期在我国发生和流行以来,已经20余载.据田间流行优势毒株的不同,可大致分为三个阶段:经典毒株流行阶段(1995—2006年)、 高致病性变异株流行阶段(2006—2013年)和新近的类NADC30毒株流行阶段(2013年至今).2013—2014年间与美国分离株NADC30亲缘性较高的一类PRRSV毒株开始在我国暴发流行,其具有与NADC30和MN184等谱系1(lineage 1)毒株相同的nsp2编码区缺失模式.致病性分析及疫苗保护试验结果表明,其致病性介于高致病性毒株与经典株之间,目前商用疫苗对其保护效果不佳.且类NADC30毒株易与其他PRRSV毒株发生重组,产生新的变异株.类NADC30毒株的广泛流行,以及相关重组毒株的叠现,进一步增加了PRRS疫病防控的难度.     

外来与新发动物疫病猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like变异流行情况及综合防控措施

猪繁殖与呼吸综合征在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来NADC 30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行。近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其流行情况以及防护措施,对进一步防控该病及保障我国生猪健康养殖具有重要意义。     

1株NADC30-like重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及遗传变异分析

为研究山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行病毒株的遗传变异情况,本研究从山东省威海市某疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场采集的猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,命名为SDwh,并对其进行了全基因组序列测定、遗传演化分析和重组分析.结果显示:该病毒株在Marc-145细胞上生长良好,可见明显细胞病变;全基因组演化分析和同源性比对分析结果显示,SDwh株与美国病毒株NADC30和中国的NADC30-like位于同一分支;与北美病毒株NADC30的同源性最高,为93.1%;与我国分离的NADC30-like病毒株CHsx1401、JL580的同源性分别为91.1%和88.4%;与北美经典病毒株VR2332、中国HP-PRRSV JXA1和HuN4的同源性均为85.3%;与欧洲型病毒株Lelystad-virus(LV)同源性最低,为60.6%.与VR2332相比,Nsp2氨基酸序列比对结果显示,SDwh株存在NADC30-like病毒株典型的131个不连续氨基酸的缺失,同时在584~585位缺失2个氨基酸;GP5氨基酸序列比对结果显示,SDwh在GP5抗原表位上有氨基酸的突变.全基因组重组分析结果显示,SDwh株是一株重组病毒株,为NADC30与JXA1-P80的重组病毒,潜在的重组位点位于Nsp2中(2066 nt).本研究结果为PRRSV流行株的重组、演化分析和防控提供借鉴意义.     

1株田间自然重组PRRSV类NADC30毒株的分离鉴定及序列分析

为了解田间猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及变异情况,本研究将PRRSV阳性样品接种到Marc-145细胞并传代后成功分离到1株PRRSV,将其命名为HENZMD-9,并对其全基因序列进行测定和分析。结果显示,HENZMD-9为1株类美国NADC30毒株,并与国内高致病性PRRSV(HP-PRRRSV)毒株的2个片段发生重组,这2个片段分别来自HP-PRRSV JXA1株的细胞传代致弱株JXA1-P80及JXA1-P45,分别位于基因组5′端及开放式阅读框1ab区域,表明HENZMD-9很有可能与JXA1-R疫苗回复株发生了重组,提示不同类型毒株在田间的共存会加剧PRRSV的演变,从而增加临床防控难度。因此,持续监测PRRSV田间流行及变异动态对PRRSV的防控具有一定的临床指导意义。     

湖南汨罗一例类NADC30-like和HP-PRRSV毒株混合感染致猪繁殖与呼吸综合征的诊断

为了查明湖南省汨罗县某猪场保育猪厌食、发烧、咳嗽、皮肤发绀导致其死亡的原因,试验采用临床症状观察、病理剖检、细菌的分离培养及RT-PCR检测等方法,结果发现送检病死保育猪发病是由猪繁殖与呼吸综合征类NADC30-like毒株和HP-PRRSV毒株混合感染所致,应采取相应的治疗及预防措施,防止该病的扩散.     

一株针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体的制备及鉴定

为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体,采用表达纯化的PRRSV NADC30-like毒株的GP5蛋白按常规方法免疫小鼠,采用间接免疫荧光方法筛选出1株阳性杂交瘤细胞（命名为3E10）,经3次亚克隆后制备腹水并进行纯化鉴定。结果显示：该杂交瘤细胞连续传代20代后细胞上清液的IFA效价仍不低于1:40。纯化后的单克隆抗体腹水浓度为0.204 mg/mL,亚类鉴定为IgM,且未发现有中和活性。特异性检测显示3E10单克隆抗体能与2株PRRSV NADC30-like毒株发生荧光反应,而与4株高致病性PRRSV疫苗毒株、2株经典株PRRSV疫苗毒株以及CSFV、PCV2、BVDV及Marc-145细胞均无荧光反应,显示出较好的应用前景。     

我国近5年类NADC30 PRRSV毒株序列的重组及限制性片段长度多态性分析

为了解我国类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行和遗传变异情况,本研究利用生物信息学软件对本实验室2016-2020年获得的64条类NADC30毒株序列进行分析。Nsp2氨基酸序列比对结果表明,64株毒株均表现出与NADC30毒株一致的131个不连续的氨基酸缺失。其中,9株在Nsp2区域除该缺失特征外,另含有额外的氨基酸缺失。基于全基因组遗传演化分析结果表明,61株分布在Sublineage 1.8(类NADC30),3株分布在Lineage 8(HP-PRRSV)。而基于ORF5序列的遗传演化分析结果则更分散,56株分布在SubLineage 1.8,5株分布在Lineage 8,2株分布在Lineage 5(类VR2332),1株分布在Sublineage 1.5(类NADC34)。经RFP4和Simplot生物学软件进行重组分析结果表明,64株毒株中可能有44株为重组毒株,共表现出5种重组模式,其中以NADC30提供骨架,HP-PRRSV提供重组片段为主要模式。重组热点分布在非结构蛋白区域5′UTR～1 500 nt(Nsp1)、5 374～8 177 nt...     

天津株蓝耳病弱毒疫苗,您用对了吗？——中国蓝耳病流行现状及高致病性蓝耳病弱毒疫苗的研制

近年来,蓝耳病作为中国养猪业的龙头疫病,一直让养殖场饱受其害。目前对于蓝耳病的防控行业人士总离不开两个话题,一是蓝耳病是否需要免疫？如果需要免疫,又是哪些猪场需要免疫？二是到底选择哪种疫苗进行免疫？是政府招标疫苗还是商品化疫苗？是经典毒株疫苗还是高致病性毒株疫苗？