羊卵母细胞冷冻保存研究进展

哺乳动物卵母细胞冷冻保存不仅对于濒危物种的保存具有重要意义,而且可以对胚胎生物技术的发展、生物资源保护与利用以及人类辅助受精技术的研究等具有重要意义,同时为基础研究提供大量可利用的材料.卵母细胞玻璃化冷冻保存的应用前景非常广阔,利用卵母细胞玻璃化冷冻保存技术建立"卵子库"不仅可以解决目前卵母细胞来源短缺的问题,还可以使其它生物技术如体外受精、克隆和转基因动物生产不受时间和空间的限制,并且代替家畜的活体保种和濒危动物遗传种质资源保存.在人类医学上,卵母细胞的冷冻保存将会为那些由于病理或其他原因而造成不孕的病人提供一个挽救生育的机会.     

畜牧兽医科技新信息16则

▲英培育出可用于人体器官移植的转基因猪 英国科学家培育成功一种心脏类似于人的心脏的转基因猪。这种转基因猪的器官表面含有人体蛋白,用于人体器官移植,并且在植入人体时不会产生异体排斥反应。 他们首先把人基因注入将近2500个猪卵里,获得了311头仔猪,其中有49头证明携带有人基因。49头中有38头存活。然后他们利用这38头转基因猪进行杂交,这样获得的第二代猪的器官里,人基因和位于猪器官表面的人体蛋白量增加了1倍,器官移植的安全和成功率也因此而成倍提高,这一成果可大大缓解人体器官移植的紧缺状态。除了从猪身上获得心脏外,还可获得用于人体器官移植的肾脏等器官,科学家们预言,这种猪器官正式用于人体器官移植还需2～3年。     

鸭胚成纤维细胞培养、传代及保存方法的研究

本研究旨在建立鸭胚成纤维细胞离体培养、传代以及冷冻保存体系,为鸭胚胎或生殖干细胞的离体培养奠定基础。利用胰酶-EDTA消化鸭胚胎组织,10% FBS+DEME营养液培养,获得原代和传代成纤维细胞。分别用DMSO、甘油以及乙二醇作为冷冻保护剂对F1代鸭胚成纤维细胞进行冷冻保存,检测复苏后细胞的生长情况。利用此方法可以获得高活性的鸭胚成纤维细胞,并可成功传至第三代。其中F1代与F2代细胞活力最好,达到90%以上。3种冷冻剂保存的细胞复苏后均与F1代细胞的活力存在明显差异,均小于80%,其中用DMSO冷冻保存的细胞复苏后活力最强,生长密度保持较好。     

不同冻存液对无血清BHK21细胞冷冻效果的影响

正在细胞培养技术广泛用于科学研究领域的今天,细胞株的冷冻保存和解冻复苏这一基础技术日益得到重视。冷冻保存是细胞长期保存的唯一方法,有利于减少细胞被微生物污染和细胞之间交叉污染的危险性,减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变以及避免有限细胞系出现衰老或恶性转化。大多数的细胞若无特别的要求,都可冷冻保存于-130℃以下长达多年。动物细胞冷冻保存,为细胞培养工作带来很大的机动灵活性,降低了人     

哺乳动物的卵巢冷冻保存

经冷冻保存后的卵巢或组织可以保存大量的原始卵泡,并且结构完整,具有活力及发育能力,且已直接用于临床获得妊娠。因此,卵巢冷冻近年来成了生殖生物学、生殖医学的研究热点。本文就卵巢冷冻的历史、基本技术原理、方案选择与评价及其影响因素作一综述。     

哺乳动物的卵巢冷冻保存

经冷冻保存后的卵巢或组织可以保存大量的原始卵泡,并且结构完整,具有活力及发育能力,且已直接用于临床获得妊娠。因此,卵巢冷冻近年来成了生殖生物学、生殖医学的研究热点。本文就卵巢冷冻的历史、基本技术原理、方案选择与评价及其影响因素作一综述。     

猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞的分离培养与冷冻保存试验报告

本试验利用从成熟后的猪卵母细胞中获得的颗粒细胞与胎儿成纤维细胞作为下一步猪体细胞核移植的供核细胞作好准备,为转基因猪的研究奠定了基础。对从成熟卵母细胞中获得的颗粒细胞进行分离培养和冷冻保存;采用室温消化法分离培养猪胎儿成纤维细胞。结果表明,接种后的原代颗粒细胞和猪胎儿成纤维细胞经过5～6d后均可连生铺满皿底,细胞排列有序,可用于继代培养;猪胎儿成纤维细胞进行冷冻解冻后可以存活。利用成熟后的猪卵母细胞的颗粒细胞,可以简单而快速地分离与培养;通过室温消化法可以分离培养猪胎儿成纤维细胞,并且经过冷冻解冻后可以复苏存活,其存活率为80.2%。     

卵巢移植技术及其应用研究进展

近20年来,卵巢移植作为重要的辅助生殖技术已取得显著研究进展,相继成功地开展了卵巢自体原位移植,自体异位移植,同种异体移植和异种移植.目前利用新鲜卵巢或冷冻保存卵巢进行移植,已出生多例卵巢移植的新生个体.这表明卵巢移植技术与冷冻保存技术相结合,可成为保存和挽救雌性个体生殖能力的一种重要手段,尤其在稀有濒危动物中具有特殊...     

阿克苏地区山羊研究中心利用胚胎移植技术加快南疆绒山羊品系繁育

胚胎移植就是将一头母畜（亦称供体）的受精卵或早期胚胎取出,移植到另一头母畜（亦称受体）的输卵管或子宫内,借腹怀胎,以产出供体后代的一项新技术。其具有以下优点：快速扩繁优秀个体数量;扩大其在畜群遗传改良中的作用。使用胚胎冷冻保存技术,可以用于家畜品种资源保存工作,可利用难孕或不孕的母畜繁育后代。     

猴精液冷冻保存技术研究进展

精液冷冻保存技术是二十世纪随着人工授精技术广泛应用而发展起来的,它是人工授精技术的一项重大革新,研究非人灵长类猴子精液冷冻保存技术,不但能保存一些濒危猴子物种的遗传基因,还为克隆技术提供了基础.在实验用猴的生产繁殖上还可提供技术支持,同时也可以为其它物种的精液保存提供理论参考依据.     

植物基因工程疫苗的研究进展

植物基因工程疫苗是利用植物系统表达病原菌抗原蛋白一个或几个亚单位的疫苗，它没有病原菌完整的侵染能力，却可以使机体对特异的病毒或细菌产生免疫应答反应。由于转基因植物产生的疫苗对动物实施免疫只是简单地摄取含这种疫苗的植物组织或种子，所以这种疫苗不会被酶类所破坏，可通过机体肠道黏膜作用激发特异性免疫应答，使动物获得持久性疾病防御能力，且没有或很少出现病原体的过敏反应。     

猪精液超低温冷冻保存研究进展

猪人工授精(AI)技术已经广泛应用于畜牧业生产,但精液来源基本是17℃保存的新鲜猪精液,不利于精液长期保存和猪种资源保存。超低温冷冻保存技术是猪精液长期保存最有效的方法,冷冻精液可以实现不同地区、不同国家优良种猪精液间的交流,从而大大提高猪种资源的利用率,但冷冻解冻后的精液质量较差,受胎率、窝产仔数远低于鲜精,极大地限制了猪精液冷冻保存技术的广泛应用。本文综述了猪精液冷冻保存研究概况、猪精液冷冻损伤机理和猪精液冷冻保存影响因素,以期为猪精液超低温冷冻保存研究提供新的思路和方法。     

野牦牛成纤维细胞的分离培养与传代

为了提高野牦牛成纤维细胞分离培养效果,研究了组织保存方法、原代培养方法、培养液类型、添加细胞生长因子和冷冻保存液配方对野牦牛体细胞分离培养与传代的作用。结果表明,PBS、D/F12和TCM199适合野牦牛皮肤组织的保存,D/F12和TCM199培养液适合组织块培养,组织块成活率达到（86.29±4.62）%,组织块法适合野牦牛成纤维细胞的原代培养;D/F12培养液培养野牦牛成纤维细胞效果较好,群体倍增时间和平台期密度分别为38.47 h和2.075×10⁶/mL,正常二倍体核型百分率为84.33%;表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）产生了较明显的促增殖作用,平台期细胞密度明显增加;2种冷冻保存液（D/F12添加胎牛血清和二甲亚砜及胎牛血清添加二甲亚砜）均能用于野牦牛细胞冷冻,细胞存活率分别是87.33%和89.00%。     

转基因技术提高动物生产性能的研究进展

动物转基因技术是在基因工程、细胞工程及胚胎工程的基础上发展起来的一种综合性的生物技术.利用该技术,人类可以按照自己意愿去改变动物的遗传组成,提高动物生长率,改进动物脂肪质量、动物乳品质量以及羊毛产量和品质,还可获得用于治疗或预防人类疾病的转基因生物药品等.然而,动物转基因技术仍在探索之中,许多问题尚未解决,转基因动物的...     

转基因表达的调控方法

转基因动物技术作为一种研究基因功能的技术体系 ,在生命科学研究领域有着广泛的应用前景。有效地使精确的遗传基因修饰在动物体内得到表达并实现世代间的传递是转基因技术的关键。近年来由于转座子、逆转录病毒的运用以及采用加入或去除某些基因的体细胞的克隆技术的发展 ,不同物种转基因的培育方法日趋简便。 Cre-L ox P系统越来越多地用于从基因组中去除特定的序列或靶向整合外源DNA。四环素等系统已被证实可获得确切的转基因表达。具有反式显性阴性效应的与 DNA形成三链螺旋的 RNA、反义 RNA(包括 :含 RNA干预和核酶的双链 RNA)以及蛋白质的表达均被证实可特异性地抑制宿主或病毒基因的表达。文章综述了转基因的概念、表达及调控转基因表达的常用方法     

兰州黑白花奶牛耳缘组织细胞系的建立

目的:通过耳缘组织细胞的分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源。方法:采用植块法培养兰州黑白花奶牛的耳缘组织原代细胞,经传代扩大培养后在液氮中冷冻保存,并对保存的耳缘组织细胞系进行了复苏活力、形态、生长特性、微生物和内、外源病毒因子检查。结果:兰州黑白花奶牛耳缘组织植块培养时第4天可见细胞从植块边缘生长,第6天消化传代后生长变快,形态以上皮型为主。冷冻保存的兰州黑白花奶牛耳缘细胞系复苏活力达95%,生长良好,生长曲线呈近"S"型,最大增殖浓度3.36×10~5/ml,对数生长期倍增时间为24 h,无菌、支原体和内、外源病毒因子检查为阴性。结论:成功建立了兰州黑白花奶牛耳缘组织细胞系,使这一物种的种质资源在细胞水平上得以长期保存。     

小反刍家畜精液冷冻保存研究现状及展望

相对于其他家畜而言,小反刍家畜（绵羊和山羊）精液冷冻保存有其特殊性。建立一套高效的精液冷冻保存程序,有利于小反刍家畜遗传资源的长期保存和人工授精技术效率的提高。文章综述了当前小反刍家畜精液冷冻保存技术的研究进展,重点介绍了精液冷冻保存技术的发展现状及未来的发展趋势,并对一些热点抗冻保护剂、玻璃化冷冻、冰冻干燥等方面的研究现状和存在问题进行了总结,同时,对小反刍家畜精子保存技术的发展前景进行了展望。     

冷冻方法保存细胞初报

为适应口岸动物检疫的需要,按时、准确地完成大批进口动物的检疫,我所借鉴联邦德国汉诺威兽医学校病毒研究室的细胞冷冻保存方法,对用冷冻方法保存牛肾原代细胞做了一些偿试。材料与方法 1.细胞保存液冷冻细胞的保存液由普通的细胞生长液(按常量加双抗)、小牛血清和冷冻剂组成,其中冷冻剂可根据不同种细胞选择甘油或二个基亚砜(DMSO),按整个     

哺乳动物卵母细胞与胚胎冷冻保存的研究进展

1卵母细胞与胚胎冷冻保存的意义随着胚胎工程技术和低温生物学的不断进步,研究人员对哺乳动物的生殖细胞和组织的冷冻保存作了大量的研究。卵母细胞与胚胎的冷冻保存是胚胎生物技术的重要组成部分,它不仅可为体外受精、核移植、胚胎移植、转基因动物研究等胚胎工程技术提供具有     

Wip1过表达转基因小鼠模型的制备与鉴定

本研究旨在构建Wip1过表达转基因小鼠,并对Wip1过表达转基因小鼠进行RNA水平上的筛选,为研究动脉粥样硬化的发生机制提供一种动物模型。通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）获得小鼠组织的cDNA,并以其为模板进行PCR扩增,对扩增片段进行胶回收,然后进行扩增片段和空载体的双酶切,将酶切后胶回收得到的Wip1基因全长与载体pcDNA3.1（+）进行连接,获得Wip1-pcDNA3.1（+）过表达载体,最终得到Wip1过表达转基因原代小鼠,并利用Southern blotting方法和实时荧光定量PCR方法对小鼠进行鉴定筛选。试验获得Wip1过表达转基因原代小鼠30只,利用Southern blotting方法鉴定出阳性小鼠11只,阳性率为36.67%,实时荧光定量PCR筛选Wip1过表达转基因小鼠阳性率为32.84%。以上结果表明,试验成功构建了Wip1-pcDNA3.1（+）过表达载体,并且经过Wip1基因在小鼠组织DNA和RNA水平上的鉴定筛选,成功获得了Wip1过表达转基因小鼠。