球虫感染后兔圆小囊病理组织学变化

为研究圆小囊在家兔球虫感染后的病理变化,试验收集自然感染病例的圆小囊,按HE染色石蜡切片方法制作病理组织切片,观察自然感染球虫后家兔圆小囊的组织病理学变化,并与正常圆小囊组织进行比较。结果表明,球虫感染病例的圆小囊集合淋巴小结生发中心反应活跃,粘膜杯状细胞和固有层散在淋巴细胞明显增多,淋巴小结周边及中心多见吞噬细胞成团聚集,或形成大的多核巨细胞,而集合淋巴小结结构基本完整.该研究结果说明圆小囊的局部免疫机制可能在机体抗球虫免疫中起着重要作用。     

一氧化氮（NO）在鸡感染柔嫩艾美球虫中的作用

在感染柔嫩艾美球虫 (Eimeriatenella)的雏鸡日粮中添加NO前体物L Arg或在饮水中添加iNOS抑制剂Dex ,探讨NO在鸡感染柔嫩艾美球虫过程中的作用。结果显示 ,未感染组鸡的血浆中NO水平无明显变化 ,感染组鸡则明显升高 ,第 6天达到峰值 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;加喂L Arg组鸡与不添加的对照组NO水平基本一致 (P>0 0 5 ) ;添加Dex组鸡则明显高于不添加的对照组 (P <0 0 5 )。NO水平与卵囊感染数无相关性。加喂L Arg组鸡死亡率最低 ,增重明显 ,每克粪便卵囊数 (OPG)低 ,血粪堆数少 ,病变轻 ;而添加Dex的感染鸡 ,出现负增重和严重死亡。提示 :日粮中添加L Arg对感染球虫的鸡有明显的保护作用 ,而Dex的添加不但不能降低血浆中的NO水平 ,还使鸡对球虫的易感性增强。表明NO在球虫感染过程中可杀伤或抑制球虫 ,但NO生成过多会使宿主产生免疫病理效应而造成损伤     

转基因柔嫩艾美耳球虫对生态环境的影响

【目的】从表达M2e-EYFP融合蛋白转基因柔嫩艾美耳球虫的稳定性,及其在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力方面,分析转基因球虫对生态环境的潜在风险。【方法】稳定性试验包括:转基因球虫感染非靶动物,观察临床症状和卵囊产出情况;转基因球虫继代繁殖,检测荧光率;转基因球虫与毒害艾美耳球虫混合感染,PCR检测卵囊中的外源基因。传播能力试验主要是分析感染鸡和不感染同居鸡的卵囊产量和荧光率。竞争性试验则是用不同混合比例的2种球虫感染鸡,检测卵囊产量和荧光率;存活能力试验是用不同处理方式的卵囊感染鸡,检测卵囊是否产出以分析卵囊存活能力。【结果】转基因球虫不感染小鼠和家鸽,与野生型柔嫩艾美耳球虫宿主特异性相同;连续繁殖传17代后外源基因稳定表达。与毒害艾美耳球虫混合寄生时在异种球虫体内未检测出外源基因。传播能力试验中,46d攻毒时转基因球虫感染与不感染同居组的卵囊产量差异不显著,但与不感染对照组相比均显著减少,且1∶1感染和不感染同居组卵囊荧光率检测结果维持在51.6%67.9%。竟争性试验中,攻毒时各比例感染组卵囊产量均极显著少于不感染攻毒对照组,荧光率检测结果各比例组变化幅动不大,且1∶1组哨兵鸡卵囊荧光率检测结果为41.2%61%。存活能力试验,转基因球虫与野生型球虫在夏季室温条件下均不能存活90d,且与其他不同方式处理的卵囊外界存活时间接近。【结论】说明转基因球虫具有良好的稳定性,在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力未呈现显著优于野生球虫的趋势。     

猪等孢球虫纯种株的建立及其生物学特性研究

从哺乳仔猪的腹泻粪样中分离出等孢球虫卵囊,感染仔猪建立球虫纯种株.通过卵囊形态结构观察与18S rRNA PCR鉴定,鉴定该球虫分离株为猪等孢球虫.将6只24日龄断奶仔猪分为2组,分别感染4×102和104个孢子化卵囊,观察仔猪的临床表现及虫株的潜伏期、显露期和卵囊产量.结果表明,感染4×102个卵囊后仔猪未出现腹泻症状,感染104个卵囊后仔猪出现腹泻且持续6 d.感染4×102个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期为7 d,每个卵囊产出5.72×103个卵囊;感染104个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期18 d,每个卵囊产出6.41×102个卵囊.由此可见,该株猪等孢球虫对仔猪具有致病性,可用于构建猪等孢球虫病动物模型及其疾病学研究.     

一株和缓艾美耳球虫的致病性和免疫原性

笔者对新分离到的和缓艾美耳球虫进行了致病性和免疫原性的研究。结果表明雏鸡感染1 000和5 000孢子化卵囊表现正常,肠道没有肉眼可见的病理变化。20 000个卵囊感染引起轻微病变。100 000个卵囊和500 000 个卵囊感染则产生较为明显的致病作用,与不感染对照组相比增重分别为70．3％和56．8％,肠道外观也产生明显可见的病变,根据0-4分肠道计分标准,分别为1．43和2．37。所有实验鸡都没有出现死亡。该虫株免疫原性较强,一次免疫5 000个卵囊/只,就能够对200 000个卵囊/只感染产生坚强的保护作用。     

多肽提取物对鸡生长性能和抗球虫感染及调节免疫功能的影响

[目的]为寻找在缓解家禽疾病中能够替代抗生素的中药提取物.[方法]取健康1日龄仔鸡随机分阴性对照组、阳性对照组、盐霉素组、地鳖肽组、蛴螬肽组、联合肽组,除阴性对照组外,所有14 d肉仔鸡攻毒柔嫩艾美耳球虫卵囊5×103/只,测定21 d仔鸡生长性能、脏器指数、免疫功能及抗球虫效果.[结果]各组间21d仔鸡日增重、采食量、料重比无显著差异;鸡感染球虫第7天联合肽组仔鸡肠道损伤和鸡排出卵囊数比阳性对照组显著降低;阳性对照组和联合肽组鸡抗球虫指数(ACI)分别为126.44和159.79;地鳖肽、蛴螬肽和联合肽组21d仔鸡肝脏、脾脏、胸腺和法氏囊器官指数均极显著升高;联合肽组21d仔鸡肠道绒毛长度显著加长、隐窝深度明显变浅,绒毛高度与隐窝深度比值极显著提高;联合肽组仔鸡血液T和B淋巴细胞转化明显高于阳性对照组.[结论]结果表明,多肽提取物可显著降低卵囊排出呈现一定抗球虫效果,且能够提高受到柔嫩艾美耳球虫感染后仔鸡的调节免疫功能.     

猪等孢球虫的致病性及生活史的研究

猪等孢球虫能致仔猪球虫病,接种２０万孢子化卵囊后３ｄ出现腹泻,第４ｄ水泻,仔猪脱水消瘦,死亡率１５％,接种后５ｄ排卵囊,持续５ｄ,显微病变见肠绒毛萎缩,局部粘膜糜烂与溃疡,并出现纤维素性坏死性肠炎,猪等胞球虫的发育史包括２代无性生殖和１代有性生殖,多寄生于空肠,回肠,感染后３６ｈ出现第１代裂殖体,８４ｈ出现第２代裂殖体。有性阶段出现在感染后９６ｈ,１０８ｈ出现未成熟卵囊,１２０ｈ结肠粪中检出卵囊。     

鸡球虫共同抗原UCE免疫原性分析及其对多种球虫感染的免疫保护效果评估

[目的]在前期研究中,筛选到了存在于多种鸡球虫间的共同抗原泛素缀合酶结构域蛋白(UCE),本研究进一步分析其免疫原性,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[方法]提取纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA,用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增堆型艾美耳球虫UCE基因(EaUCE),插入pVAX1质粒,构建真核表达质粒pVAX-EaUCE,通过RT-PCR和Western blot检测pVAX-EaUCE在鸡体内的转录和表达情况。经流式细胞术和间接ELISA法检测pVAX-EaUCE免疫后鸡体细胞免疫和体液免疫水平变化,分析其免疫原性。分别采用柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫及三者的混合卵囊人工感染雏鸡,观察感染前、后雏鸡体质量变化和排出卵囊减少量,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[结果]EaUCE基因开放阅读框为444 bp,编码148个氨基酸,BLAST分析显示,柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫UCE氨基酸序列同源性均大于95%。pVAX-EaUCE能够在鸡体内成功转录和表达。pVAX-EaUCE免疫后,鸡体的CD_4~+/CD_3~+和CD_8~+/CD_3~+细胞比例显著升高,IFN-γ、IL-2、IL-4、TNFSF15、IL-17D、TGF-β4 mRNA和IgY抗体水平显著升高,表明免疫该质粒能诱导细胞和体液产生免疫反应(P0.05)。pVAX-EaUCE免疫后,与对照组相比,免疫组鸡体质量显著增加,卵囊产量明显下降,肠道损伤也相应减轻。[结论]鸡球虫共同抗原UCE具有良好的免疫原性,可对多种球虫感染提供部分免疫保护力,有望成为抵抗多种球虫感染的候选抗原。     

鸡柔嫩艾美耳球虫计划感染免疫的研究

作者以鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的己孢子化卵囊有计划地感染21日龄来克亨雏鸡:有三组分别以5×10~2、5×10~3、5×10~4个卵囊经口感染,另一组每只以5×10~2、5×10~3、5×10~4个卵囊每隔十天依次感染,观察其免疫效果。结果表现了初次投服的卵囊数量越多,耐过的雏鸡所获得的免疫力就越大些,但初次以较大剂量卵囊投服,对机体有不良影响,甚至可造成死亡。而通过依次增加卵囊的数量反复轻微感染的雏鸡,对机体的正常生理状态几乎无不良影响,并且获得的免疫力也较牢固。     

中药“球康”对雏鸡感染柔嫩艾美尔球虫部分血液理化指标的影响

[目的]为鸡球虫病的有效防治提供参考。[方法]将雏鸡随机分为感染球虫对照组（Ⅰ）、感染球虫给中药＂球康＂组（Ⅱ）和不感染不给药对照组（Ⅲ）,Ⅰ、Ⅱ组鸡接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,于感染当天在Ⅱ组鸡饲料中添加2%中药＂球康＂微粉制剂,测定雏鸡接种球虫0、5、8 d时红细胞数量（RBC）、白细胞数量（WBC）、红细胞压积（HCT）、血红蛋白浓度（HGB）及血清K＋、Na＋、Cl-、Ca2＋、P3＋浓度和TP含量。[结果]与Ⅲ组相比,接种球虫第5天,Ⅰ、Ⅱ组鸡RBC总数、HGB含量和HCT均出现下降趋势;接种球虫第5天,Ⅰ、Ⅱ组雏鸡血清K＋显著升高,第8天有所降低;接种球虫第8天,各组血清Na＋比接种第5天略有下降,Ⅰ、Ⅱ组雏鸡血清Ca2＋升高;接种球虫第5天,Ⅰ、Ⅱ组雏鸡血清Cl-和P3＋略有降低;接种球虫后,Ⅰ、Ⅱ组雏鸡血清TP含量降低。Ⅱ组雏鸡仅血清K＋浓度显著高于Ⅲ组（第5天）,血清Na＋、Cl-、Ca2＋、P3＋浓度和TP含量升高或降低程度与Ⅲ组无显著性差异。[结论]中药＂球康＂通过抵抗球虫感染,在一定程度上有助于维持血液理化指标的恒定。     

Stress-induced suppression of immunity in adrenalectomized rats

Stress-induced suppression of lymphocyte stimulation by phytohemagglutinin was demonstrated in Isolated lymphocytes and in cultures of whole blood from adrenalectomized rats. The results demonstrate that corticosteroid independent mechanisms participate in the suppression of lymphocyte function by stressors. Stress-induced lymphopenia, however, was found to be adrenal dependent, indicating that the modulation of immunity by stress is complex and multidetermined.     

Antibody-dependent lymphocytotoxicity induced by immunoglobulin G from Hodgkin's disease splenic lymphocytes

Immunoglobulin G, produced in cultures of splenic lymphocytes obtained from patients with Hodgkin's disease, bound to a population of homologous peripheral blood lymphocytes and initiated antibody-dependent cell cytotoxicity in cultures from five out of eight patients. Two patients whose cultures produced negative results had minimal disease; the other was in remission. The target cells appear to be T lymphocytes; the effector cells bear Fc receptors that are inhibited by antigen-antibody complexes. Antibody-dependent cell cytotoxicity events may produce the anergy and lymphopenia often seen in Hodgkin's disease.     

玉米大斑病流行过程重要环节的初步定量研究——Ⅳ.玉米生育期、肥力和品种对大斑病抗性组分的影响

为确定模型中的重要参数,研究了玉米生育期、肥力和品种对大斑病的主要抗性组分——侵染机率、潜育期和病斑产孢量的影响。研究表明:玉米生育期对侵染机率和潜育期有显著影响,每增长1个叶片,玉米抗侵染力约提高0.5倍,潜育期约延长0.5d;约在10～20叶期病斑产孢量达到高峰。肥力水平与侵染机率呈显著负相关,对潜育期无明显影响;肥力水平与病斑产孢量的关系:产量水平在6000kg/ha以下时为正相关,在6000kg/ha以上时为负相关,不同品种之间在病斑产孢量、侵染机率和潜育期上均可有显著差异。     

微囊藻毒素MC-LR对凡纳滨对虾细胞免疫相关基因表达水平的影响

对凡纳滨对虾进行血窦注射微囊藻毒素MC-LR染毒,取染毒前后肝胰腺及血细胞,采用Illumina Hiseq 2500测序平台进行基因表达谱分析,并对差异基因的基因本体(gene ontology,GO)注释和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路进行显著性富集分析。结果发现,酚氧化酶原、胰蛋白酶及C型凝集素等基因有显著的差异性表达。在GO富集性分析中发现细胞粘附显著性差异表达,细胞杀伤及细胞粘附分子结合物差异表达。KEGG富集性分析发现血细胞中吞噬体显著性差异表达,细胞凋亡、内吞作用和细胞粘附分子等通路呈表达差异。结果表明,凡纳滨对虾在被MC-LR染毒后,细胞免疫是抵御毒素的重要部分,其中细胞粘附和吞噬作用在抵御MC-LR对虾体的毒害过程中发挥了重要作用。     

斯氏线虫S.carpocapsae BJ对森林革蜱饱血雌蜱产卵量的影响

研究了不同浓度的斯氏线虫S.carpocapsae BJ对森林革蜱饱血雌蜱产卵量的影响。用浓度为10003、000、5 000、7 0001、0000IJs/dish的线虫接种到培养皿中侵染森林革蜱饱血雌蜱,对照组用重蒸水代替。结果表明,随着线虫浓度的增加,雌蜱的死亡率不断提高(30%~95%);处理组饱血雌蜱的产卵量显著少于对照组,低浓度时随着线虫浓度的增加,产卵量呈显著下降的趋势,而浓度5 000IJs/dish以上的3个处理组之间,雌蜱的产卵量无显著差异;低浓度时线虫浓度的增加使线虫侵入率显著提高,浓度达到一定数值后,浓度的增加对线虫的侵入率和雌蜱的产卵量都无显著影响。     

中草药抗球散超微粉对柔嫩艾美耳球虫感染鸡免疫机能的影响

为探讨中草药抗球散超微粉防治鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的作用机制,将150只20日龄供试鸡随机均分为Ⅰ组(感染给中草药组)、Ⅱ组(感染不给药组)和Ⅲ组(不感染不给药组)。Ⅰ组、Ⅱ组人工感染柔嫩艾美耳球虫,Ⅰ组于感染前1 d在饲料中添加1%的中草药抗球散超微粉,分别测定供试鸡血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量和外周血T淋巴细胞百分率,试验结束时测定脾脏和法氏囊指数。结果显示:与Ⅱ组相比,Ⅰ组的IgG、IgM、IgA抗体水平整体上呈上升趋势,IgG抗体水平于感染后13、17、21 d分别显著提高10.06%、14.78%、10.63%,IgM抗体水平于感染后13 d显著提高18.18%,IgA抗体水平于感染后17 d显著提高17.95%;Ⅰ组的外周血T淋巴细胞百分率于感染后14、21 d分别显著提高7.20、6.20个百分点;试验结束时,Ⅰ组的脾脏指数和法氏囊指数分别极显著提高46.72%和43.82%。以上结果表明,中草药抗球散超微粉能够促进柔嫩艾美耳球虫感染鸡免疫器官发育、增强机体免疫功能。     

无乳链球菌感染方式对罗非鱼血常规和抗体消长规律的影响

【目的】明确表皮损伤或某种原因造成的炎症是否是罗非鱼无乳链球菌病暴发的重要诱因，为罗非鱼养殖业疫情预警及无乳链球菌疫苗研制提供参考依据。【方法】将180尾体质量约40 g的吉富罗非鱼随机分为健康组、皮肤创伤组和肠炎组，通过浸泡方式感染无乳链球菌（1.5×106 CFU/mL），分别设3个对应的空白对照组（不感染无乳链球菌）。无乳链球菌感染前及感染后24、48、72、96、120、144和168 h等8个时段，分别每组随机挑选15尾罗非鱼采血，将血液涂片后以吉姆萨染色，观察细胞形态并统计外周血白细胞、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞数量，同时记录罗非鱼死亡数量。每周以ELISA测定1次罗非鱼血清IgM抗体水平，持续10周。【结果】与健康组罗非鱼相比，皮肤创伤组和肠炎组罗非鱼死亡时间提前，存活率显著降低（P<0.05，下同）。3种感染方式的罗非鱼外周血白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量在感染初期均呈明显的上升趋势，至感染后168 h皮肤创伤组和肠炎组罗非鱼显著高于健康组罗非鱼（P<0.01，下同），说明无乳链球菌感皮肤创伤或患有肠炎的罗非鱼相对于健康鱼能引起更强烈的免疫反应；皮肤创伤组罗非鱼的外周血单核细胞数量在感染后72~168 h均极显著高于健康组罗非鱼，而肠炎组罗非鱼只在感染后24 h极显著高于健康组罗非鱼。相对于健康组和皮肤创伤组罗非鱼，肠炎组罗非鱼血清抗体水平上升时间更早，持续高水平时间更长；健康组和皮肤创伤组的罗非鱼血清特异性抗体出现时间相近，但皮肤创伤组罗非鱼抗体维持高水平的时间更长。【结论】罗非鱼在无乳链球菌感染前后并发机械性或免疫性病理损伤及炎症，会导致感染死亡率升高，即感染无乳链球菌后会加重因转池、运输、寄生虫感染等造成鱼体表皮受损，或饲料霉变等原因造成的肠炎，进而导致罗非鱼死亡率上升。血常规和抗体水平的消长规律能反映罗非鱼无乳链球菌的感染情况，其中，外周血白细胞数量变化可作为判断罗非鱼感染无乳链球菌后病理损伤和免疫应答的参考指标。     

新疆绵羊附红细胞体四季感染调查

[目的]系统了解新疆绵羊群体中绵羊附红细胞体的感染、流行情况.[方法]实验采用鲜血压片、血涂片染色镜检和PCR方法,检测新疆7个绵羊主要养殖区绵羊血样850份.[结果]新疆绵羊群体中附红细胞体感染率很高,采用鲜血压片、血涂片染色镜检感染率达到97;,PCR检测感染率为75;;一年四季均有感染,季节性流行不明显;区域之间感染率无明显差异;感染强度多为中、轻度感染,而重度感染有两个小高峰,分别在5月到6月和11月到12月.[结论]新疆绵羊群体中绵羊附红细胞体存在严重感染;季节转换和饲草料结构的变化是本病发生的主要诱因.     

猪附红细胞体病BALB/c小鼠模型的建立

为了解现阶段延边地区猪附红细胞体的致病性,以注射地塞米松和摘除脾脏的BALB/c小鼠为实验动物,以腹腔注射方式人工感染猪附红细胞体,通过临床症状观察、血液涂片姬姆萨染色镜检及PCR方法对BALB/c小鼠感染猪附红细胞体情况进行鉴定,并进行血液常规检测。结果表明,注射地塞米松组、摘除脾脏组和正常感染组BALB/c小鼠在感染后8～10d相继达到高峰,正常感染组BALB/c小鼠在感染后第24天猪附红细胞体消失,注射地塞米松组在感染后第32天消失,而摘除脾脏组在试验结束时仍具有较高的感染率。经血液常规检测,各组BALB/c小鼠在感染猪附红细胞体后,白细胞总数显著升高(P<0.01),淋巴细胞总数、红细胞总数、血红蛋白含量均显著下降(P<0.05),红细胞比容显著下降(P<0.01)。因此,猪附红细胞体对低免疫力的BALB/c小鼠具有一定感染性,并表现出典型临床症状。     

Detection of human cytomegalovirus in peripheral blood lymphocytes in a natural infection

In situ hybridization was used to detect human cytomegalovirus (HCMV) in the peripheral blood mononuclear cells of some naturally infected (seropositive) individuals. A subpopulation of cells hybridized specifically to a portion of the HCMV genome that is heavily transcribed during the immediate-early period of infection. The hybridization signal was markedly reduced by base hydrolysis and ribonuclease, and therefore the probe appears to be detecting viral RNA. A fluorescence-activated cell sorter was used to select lymphocytes bearing the OKT4 and OKT8 markers. Hybridization with the HCMV probe revealed a higher proportion of positive cells in the OKT4 than in the OKT8 subset. This observation specifically identifies lymphocytes as a cell population involved in natural HCMV infection and suggests that lymphocytes may be a reservoir for maintaining infection and may also serve as a vehicle for its spread by blood transfusion.