绿色荧光蛋白标记荧光假单胞菌P303及其生存能力检测

构建了含有荧光假单胞菌自身启动子PP303的中间质粒载体pGFP.然后利用mini-Tn5转座子,通过接合转移,将两个带有不同启动子的绿色荧光蛋白基因分别整合到荧光假单胞菌P303染色体上,获得了在488nm波长下发光稳定的P303m1和P303m3菌株.PCR鉴定和Southern印迹结果均证明绿色荧光蛋白已随机插入P303染色体.SDS-PAGE结果表明,含有PA1/04/03启动子的P303m3菌株GFP表达量低于含有PP303启动子的P303m1菌株,染色体标记的GFP表达量低于质粒标记.室内平板抑菌试验结果表明,P303m1与出发菌株P303抑菌活性相当,对九种植物病原真菌有较强的拮抗作用.定殖、生存竞争能力研究表明,荧光假单胞菌在自然土壤中和大白菜根际都具有较强的定殖能力.P303和P303m1在自然土壤中第60天的菌量分别为1.63×104和3.3×102cfu/g土(湿重),大白菜根际第50天的菌量分别为3.29×106和4.1×104cfu/g根(湿重).     

荧光假单胞菌Tn5诱变菌株防治小麦全蚀病的初步研究

 利用生物技术(转座子Tn5诱变)对荧光假单胞菌进行遗传改良获得对小麦全蚀病有更好防治效果的基因工程菌株。将大肠杆菌S17-1中psup2021值粒上的转座子Tn5转移到荧光假单胞菌CN12菌系的基因组内获得5100个Tn5突变体,转化频率为1.2×10^-7。与自然菌系CN12比较,7个突变体对全蚀病菌的离体拮抗作用提高到160-250%,其中3个突变体对温室苗期全蚀病防治效果也显著提高(p=0.01)。初步研究证明:(1)荧光假单胞菌中可能存在两类功能不同的拮抗作用基因(暂称为抗生基因和调控基因);(2)在目前抗病基因缺乏或难于应用的情况下,利用微生物或其有用基因达到防病增产的目的可能是一条有希望的途径。     

非荧光植物假单胞菌的分类和鉴定

 对非荧光植物假单胞菌(Pseudomonas spp.)的14个种的105个菌株进行56项生理生化测试,     

多菌灵对荧光假单胞杆菌的正向调控作用及其应用

报道了多菌灵对荧光假单胞杆菌Ｐ３２的正向调控作用。多菌灵和Ｐ３２均能大一定程度上防治棉花黄萎病,但单独使用的效果不理想。试验表明,Ｐ３２在培养条件下对多菌灵不敏感,而多菌灵可以提高Ｐ３２在棉花根际及土壤中的定殖存活量。用于土壤处理时,多菌灵最多可以分别使土壤和根际的Ｐ３２群体提高到１２．６和１３．８倍,用于种子处理时,则对土壤中Ｐ３２的群体影响较小,但仍能显著地提高根际Ｐ３２的群体数量。     

荧光假单胞菌CZ菌株定殖及抗病毒活性研究

荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens CZ能分泌包括碱性磷酸酶在内的抗病毒蛋白抑制烟草花叶病毒Tobacco mosaic virus(TMV)侵染?本文利用抗生素利福平逐级诱导获得抗药性标记菌株CZ-rif, 生测试验显示:野生型和抗药型菌株的发酵上清和粗蛋白液对TMV的体外钝化效果均大于90%, 无显著差异?灭菌和非灭菌的根际土拌CZ-rif菌液后盆栽烟苗, 取根际土在含抗生素的平板上检测定殖菌量, 结果显示, CZ-rif能够在烟株根际土壤中有效定殖, 第31天在灭菌土中的定殖菌量为4.3×104 cfu/g, 显著大于在非灭菌土中的定殖菌量6×103 cfu/g, 在叶面上的定殖菌量显著低于根际土壤?叶面喷施CZ-rif菌液后24 h接种病毒, 对TMV-GFP的预防效果为45.85%?田间试验中喷淋菌株发酵稀释液, 对烟草花叶病毒病的防效为42.02%?此外, 水培试验显示生防菌发酵液对烟草幼苗具有促生作用?总之, 荧光假单胞菌CZ能在烟草根际定殖和促进植株生长, 叶面喷施能钝化TMV并抑制其初侵染, 可以研发防治病毒病害的生物制剂?     

硅藻土和滑石粉作为荧光假单胞菌P13菌剂的载体研究

从菌体的吸附和释放两方面,研究了硅藻土和滑石粉在不同条件下作为生防菌荧光假单胞菌P13菌剂载体的可能性。结果表明,在温度为25℃,pH7时,两种材料对P13菌剂有良好的吸附效果,且吸附速率较快。扫描电镜分析表明,吸附过程可能与硅藻土表面和微孔结构,滑石粉片层结构以及菌体形态有关。在制备干粉状菌剂时,硅藻土和滑石粉与溶剂比例分别为100：50（m/v）和100：24（m/v）时,菌体释放率较高。表明硅藻土和滑石粉是良好的载体材料且具有应用前景。     

植物病原原核生物的分类现状

 植物病原原核生物是仅次于真菌和病毒的第3大类病原生物,侵染植物可引起许多重要的病害,造成农作物的严重减产,例如国内外普遍发生的茄科植物的青枯病,水稻白叶枯病,大白菜软腐病;有国外危害严重,国内尚未发生的检疫性病害梨火疫病和玉米枯萎病,还有在国内较普遍的泡桐丛枝病和枣疯病等。     

荧光假单胞菌3000亿个／克粉剂防治烟草青枯病田间药效试验

田间药效试验表明.荧光假单胞菌3 000亿个/克粉剂对防治烟草青枯病(Tobaccobacterial wilt)有较好的防治效果.用量512.5～662.5g/667m2,在烟叶收获80%时调查,防治效果达到54.1%以上.增产率达到25%以上.     

荧光假单胞杆菌P2-5菌株对小麦全蚀病的抑制作用

室内测定了荧光假单胞杆菌P_2-5菌株对小麦全蚀病菌9826菌株的拮抗作用。结果表明,P_2-5菌株对小麦全蚀病菌具有较强抑制作用,抑制效果和防治效果分别为67％和59％,高于化学杀菌剂烯唑醇(特普唑)处理的效果。研究表明P_2-5菌株可以致使病菌菌丝畸变。应用双抗标记法测定了P_2-5菌株在小麦根系中的定殖情况,结果表明,该菌可以在小麦根系定殖。     

荧光假单胞菌PEF-5#18防控番茄枯萎病的定殖机理

通过电转法成功将EGFP表达质粒p EGFP20转入对番茄枯萎病具有优良防病效果的荧光假单胞菌PEF-5#18体内,并研究了该生防菌在番茄根际土壤与植株根、茎内部组织的定殖情况。结果表明,处理25 d后,标记型与野生型生防菌处理均能有效控制番茄枯萎病害并增加植株鲜、干重量。与病原菌阳性对照相比,野生型菌株的防治效果为76.92%,鲜重增加194.10%,干重增加564.71%;接种后的PEF-5#18能良好定殖于番茄根际土壤并扩展进入植物根茎内部生长,其分布数量呈现出根际土壤(1.05×106 CFU/g)根(6.75×104 CFU/g)茎(1.25×102 CFU/g);与病原菌阳性对照相比,接种PEF-5#18对番茄根际土壤的可培养细菌总数影响差异不显著,但可显著提高根(增幅为8.42%)、茎(增幅为14.78%)内的可培养细菌总数以及根际土壤pH(增幅为1.61%);接种PEF-5#18能显著降低根际土壤与根、茎内病原菌侵染数量;激光共聚焦镜检发现,接种25 d后,PEF-5#18能大量分布于番茄根系表面、根内木质部、根内皮层细胞、根内细胞间隙、茎内维管及其周围细胞。     

包含病原线虫的植物复合侵染病害

 包含病原线虫的植物复合侵染病害的研究已逾100年,对这种复合侵染病害的发现与验证是本世纪50年代至70年代间植物病理学的显著发展之一。植物病原学已从单一病原学发展至多重病原学。本文就重要的复合侵染病害及其病原的协同作用方式和协同作用机制等方面的研究进展作了评述。展望21世纪,相信我国植物病理学者将会越来越多地关注植物复合侵染病害问题,从而推动该领域的研究不断深入与发展。     

茶皂素对7种植物病原真菌的生物活性初测

本研究用含毒介质培养法测定了茶皂素对稻纹枯病菌Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、白绢菌Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍｒｏｌｆｓｉ、芒果炭疽病菌Ｃｏｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ、柱帚霉菌Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｌａｄｉｕｍｓｐ．、拟盘多毛孢菌Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｓｐ．、瓜枯萎病菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉ、尖孢镰刀菌Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ等７种植物病原菌的生物活性。结果表明,茶皂素在１００ｍｇ／Ｌ和２００ｍｇ／Ｌ浓度下对瓜枯萎病菌具有很强的抑制作用,３ｄ抑制率分别达到８９．７１％和９５．８８％。对白绢菌和稻纹枯病菌也有一定抑制作用。     

植物病原原核生物的种类及其分类

 分子生物学的迅速发展,使人们对生物的本质和起源有了更深入的了解,也给古老的分类学带来了新的生机。分子生物学方法渗透到原核生物分类学领域,导致了原核生物界的建立和原核生物分类的迅速发展。     

植物病原细菌致病性决定因子

 植物病原细菌大多数为革兰氏阴性菌,主要分布在Erwinia、Pseudomonas、Xanthomonas和Ralstonia 4个属中,引起许多栽培植物产生不同的病害.这些植物病原细菌定殖于植物细胞间,其病程(pathogenesis)涉及病原细菌的繁殖、组织间扩展和最终产生典型病害症状。尽管植物病原细菌在细菌学和病理学上表现多样性,但它们都拥有hrp基因。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis (Cohen))B-903菌株抗菌物质对植物病原真菌的抑制作用

作者从郑州苹果园中分离到枯草芽孢杆菌的一株强拮抗菌株。研究认为该菌株产生的抗菌物质对镰刀菌等12种病原真菌具有抑制作用,抑菌谱广。其抑菌机理主要是融解细胞壁,造成原生质泄漏,同时也使孢子和菌丝畸形。田间小区试验证明,以B-903培养滤液浸种可有效防治棉炭疽病等棉苗病害,并促进棉苗生长发育;果园喷雾防治苹果轮纹病和叶斑病的效果相当或优于化学药剂。     

玉米茎腐病致病因子的初步研究

 玉米茎腐病属世界性分布的土传病害,目前,关于病菌产生的细胞壁降解酶及其与毒素相互关系等方面的研究未见报道,为此作者进行了研究,初报如下。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis(Cohen))B-903菌株抗菌物质对植物病原真菌的抑制作用

 作者从郑州苹果园中分离到枯草芽孢杆菌的一株强拮抗菌株。研究认为该菌株产生的抗菌物质对镰刀菌等12种病原真菌具有抑制作用,抑菌谱广,其抑菌机理主要是融解细菌壁,造成原生质泄漏,同时也使孢子和菌丝畸形。田间小区试验证明,以B-903培养滤液浸种可有效防治棉炭疽病等棉苗病害,并促进棉苗生长发育;果园喷雾防治苹果轮纹病和叶斑病的效果相当或优于化学药剂。     

沙蓬—流动沙丘先锋植物的研究

沙蓬(Agriophyllum squarrosum)是流动沙丘的先锋植物。本文以内蒙东部奈曼旗沙地的沙蓬为样本,分析和研究了它的发芽规律,生长特点,生物量和其在群落中的地位。     

杨梅与油橄榄癌肿病病原细菌的比较研究

 对我国14株杨梅癌肿病菌菌株和2株油橄榄癌肿病菌模式菌株在细菌学特性、血清学反应及寄主范围等方面进行了比较研究。两者细菌学特性基本相同,在测定27项生理生化反应中仅在硝酸盐还原、淀粉水解及对甜菜碱、乳糖、麦芽糖和纤维二糖的利用上存在着差异,两菌株的mol% G+C相近,杨梅菌株在59.90-60.89之间,油橄榄菌株PODCC4352-75为59.90;在寄主范围上差异明显,不能交互侵染各自的寄主产生典型肿瘤症状,杨梅菌株不能侵染夹竹桃产生癌瘤;血清学反应表明两者有一定的同源性。认为杨梅癌肿菌是一个新的致病变种,命名为丁香假单胞萨氏亚种杨梅致病变种[Pseudomonas syringae subsp.savastanoi (Janse) pv.myricae (Choei) nom.comb.Zhang et He].