用A蛋白免疫电镜快速检测几种蔬菜作物的两种杆状病毒

应用Ａ蛋白免疫电镜技术对几种蔬菜作物的长叶车前草花叶病毒（ＲＭＶ）、烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的检测比常规的电镜负染技术至少要灵敏近１０，０００倍，比普通的免疫电镜技术要灵敏１０～１００倍，抗血清浓度稀释至４００，０００倍，病毒粗提液稀释到１，０００，０００倍或病毒提纯液浓度为２．５×１０－７ｍｇ／ｍｌ时均能观察到病毒粒子。同时由于抗体分子能特异性地结合到病毒粒子表面，能够很容易地区分不同的病毒种类。应用此项技术作者检测了杭州地区几种常见的蔬菜病毒病，对大白菜（ＢｒａｓｉｃａｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．），蕃茄（ＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍＭｉｌ），榨菜（Ｂｒａｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ．ｔｓａｔｓａｉＭａｏ），雪里（Ｂｒａｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ．ｍｕｌｔｉｃｅｐｓＴｓｅｎｅｔＬｅｅ）等作物发病期的叶或果的浸提液用Ａ蛋白免疫电镜进行快速检测，结果在大白菜，番茄等病株上检测到较多的病毒粒子，且大多能被ＲＭＶ抗血清修饰，同时在番茄病株检测到的少量病毒粒子亦能被ＴＭＶ抗血清修饰，而榨菜及雪里等病株上检测到的病毒粒子很少能被ＲＭＶ及ＴＭＶ抗血清所修饰，另外，病毒粒子的含量以番茄病果中为最高，要比     

用A蛋白免疫电镜快速检测几种蔬菜作物的两种杆状病毒

 应用A蛋白免疫电镜技术对几种蔬菜作物的长叶车前草花叶病毒(RMV)、烟草花叶病毒(TMV)的检测比常规的电镜负染技术至少要灵敏近10,000倍,比普通的免疫电镜技术要灵敏10~100倍,抗血清浓度稀释至400,000倍,病毒粗提液稀释到1,000,000倍或病毒提纯液浓度为2.5×10^-7 mg/ml时均能观察到病毒粒子。同时由于抗体分子能特异性地结合到病毒粒子表面,能够很容易地区分不同的病毒种类。
应用此项技术作者检测了杭州地区几种常见的蔬菜病毒病,对大白菜(Brassica campestris L.),蕃茄(Lycopersicum esculentum Mill),榨菜(Brassica juncea var.tsatsai Mao),雪里(Brassicajuncea var.multiceps Tsen et Lee)等作物发病期的叶或果的浸提液用A蛋白免疫电镜进行快速检测,结果在大白菜,番茄等病株上检测到较多的病毒粒子,且大多能被RMV抗血清修饰,同时在番茄病株检测到的少量病毒粒子亦能被TMV抗血清修饰,而榨菜及雪里等病株上检测到的病毒粒子很少能被RMV及TMV抗血清所修饰,另外,病毒粒子的含量以番茄病果中为最高,要比其它几种蔬菜作物叶子中高约10~30倍。     

胶体金免疫层析法快速检测烟草环斑病毒

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记烟草环斑病毒的抗体 ,制成免疫层析检测试纸条。检测粗提纯病毒的灵敏度为 1 0 0 0ng/ml,病汁液稀释 1 0 0 0倍后仍可快速检出。对大豆病种子、烟草冻干病叶等不同材料进行检测也有良好的效果 ,1～ 2min即可出现结果。用 9种不同的病毒进行测试 ,未出现非特异性反应。     

南瓜花叶病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

使用柠檬酸三钠还原法制备25nm粒径的胶体金颗粒,在pH7.6,蛋白用量13μg/mL条件下,制备形成稳定胶体金蛋白复合物;使用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好病毒检测线和质控线,组装制成免疫层析检测试纸条。结果表明经过条件优化后制备的南瓜花叶病毒试纸条特异性好,可在10min内检测出结果,且对南瓜花叶病毒阳性材料的检测灵敏度可达到稀释104倍。     

两种免疫胶体金快速诊断技术简介

植物病毒的血清学检测 ,以酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)最为普遍和有效 ,它在方法学上比较完善 ,是一种经典的方法。通常ＥＬＩＳＡ反应是在聚苯乙烯反应板上进行的 ,当固相载体变成硝酸纤维素膜时 ,则出现了免疫酶斑点试验 (ＩｍｍｕｎｏｅｎｚｙｍｅＳｐｏｔＡｓｓａｙ ,ＩＥＳＡ)。若将此处的标记物由酶标记改为金标记时 ,因不需要酶促反应的底物 ,缩短了整个检测的时间 ,随着技术的不断进步 ,出现了两种免疫胶体金快速诊断技术即 :斑点免疫金渗滤试验和胶体金免疫层析试验。现分别予以介绍。1　斑点免疫金渗滤试验 (ＤｏｔＩｍｍｕｎ…     

免疫胶体金技术及其在植物病毒研究中的应用

自从 Faulk 和 Taylor(1971)首次将胶体金用于电子显微镜作为免疫染色标记以来,由于其适用范围广,包括光学显微镜、扫描电镜和透视电镜,标记大分子物质的种类多,包括酶、毒素、多糖类、糖蛋白、抗血清和植物凝血素(Lectin)等等,方法简单,可以直接标记(Direct la-beling)或间接标记(Indirect labeling),     

建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒联合免疫胶体金试纸条的研制及应用

为了实现兰花种植苗圃和口岸一线直接检测样品中建兰花叶病毒Cymbidium mosaic virus(CymMV)和齿兰环斑病毒Odontoglossum ringspot virus(ORSV)的目的,我们研制了上述两种病毒联合免疫胶体金检测试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记单抗C10并固定于胶金垫上;将抗体5B7和4F3分别固定于硝酸纤维素膜上作为检测线,将羊抗鼠抗体包被固定于硝酸纤维素膜上作为质控线,经优化后组装胶体金试纸条。结果表明研制的联合试纸条特异性强,能够在10min之内同时检出两种病毒,操作简便。对两个种植苗圃的93份兰花样品进行实际检测所得结果与ELISA的检测结果符合性好(Kappa值分别为84.6%和86.7%),能满足兰花样品中建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的初筛要求。     

大麦黄矮病毒PAV血清型免疫电镜检测

用免疫电镜技术对大麦黄矮病毒PAV 血清型进行了检测。病毒粗提液经过抗体IgG 的诱捕、修饰后,在电镜下观察到病毒粒体。病毒在抗体的诱捕下,产生了明显的聚集效应。单个病毒粒体周围有抗体环,病毒二聚集体之间有抗体桥存在。病毒粒体表面结构清晰,而且能够清楚地看到抗体分子与病毒表面突起的结合     

胶体金免疫电镜技术检测和鉴定病汁液中不同形态的植物病毒

 本文报道胶体金免疫电镜技术的建立:铜网捕获病毒后,用其稀释约200倍的同源抗血清修饰处理3~5分钟,羊抗兔IgG-金复合物标记3~5分钟,经磷钨酸负染,电镜下可见病毒粒子周围金颗粒特异性吸附,而背景上非特异性吸附很少。用此技术成功地快速检测和鉴定了病汁液中线状病毒(大麦黄花叶病毒,大麦温和花叶病毒,小麦梭条斑花叶病毒,芜菁花叶病连和马铃薯Y病毒)、棒状病毒(烟草花叶病毒、长叶车前草花叶病毒和土传小麦花叶病毒)以及球状病毒(水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒和大麦黄矮病毒)。用0.5M PBSpH7.0制备病汁液,可大幅度提高同源抗血清对黄瓜花叶病毒的捕获能力。     

地高辛标记的cDNA探针检测烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒及马铃薯Y病毒

 根据已发表的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,分别以提取的TMV、CMV和PVY侵染的病叶总RNA为模板,反转录PCR进行体外扩增,分别得到长度为0.44、0.77、0.80 kb的目的片段,并克隆到pGEM-T easy质粒载体上,以构建的重组质粒为模板,用PCR方法合成了相应的地高辛标记的双链DNA探针。以合成的探针通过斑点杂交技术检测烟草病叶总RNA和烟草病叶汁液。TMV、CMV和PVY的3种地高辛探针检测各自感染的烟草病叶总RNA的稀释低限分别为1:1000、1:10000、1:320,检测各自侵染烟草病汁液的最大稀释倍数分别为1:100、1:100、1:10,而每种探针与健康烟草和其它2种病毒的反应均为阴性。     

感染烟草花叶病毒(TMV)的烟叶在显症前的荧光光谱变化

通过测试ＴＭＶ侵染叶片的叶绿素含量与荧光光谱特征的动态变化，分析影响荧光光谱的因素，在以４８０ｎｍ作为激发波长时，叶片６８５ｎｍ与７４０ｎｍ荧光强度之比（Ｆ６８５／Ｆ７４０）随着病毒侵染时间的延长而增加，叶绿素含量则随着病毒侵染时间的延长而降低，因此提出可用Ｆ６８５／Ｆ７４０与叶绿素含量之比作为ＴＭＶ早期诊断的指标。     

小麦抗秆黑粉病快速鉴定方法研究

 小麦秆黑粉病近年在我国北方一些地区严重发生,引人注目。利用抗病品种防治该病最经济有效,但为鉴定品种抗病性创造带菌均匀的土壤条件,需大量要菌粉,而且鉴定周期很长;本研究为鉴定抗病性提供了快速方法。     

一种侵染桃树的烟草花叶病毒(TMV)的分离鉴定

 从北京地区具有红叶及叶片侧脉失绿等综合症状的桃病株上分离到一种杆状病毒分离物P-1,初步鉴定为一TMV株系;制备抗血清微量沉淀法测定效价为1:1024,并应用于田间样品检测;提纯P-1分离物回接毛桃实生苗后,在上部叶片出现脉间失绿症状,用P-1抗血清作ELISA检测为阳性,肯定了TMV对桃的侵染及致病作用。     

落叶松种皮微形态特征及种子鉴定的研究

本文运用日本Ｓ－５７０扫描电镜，观察了落叶松属六个种的种皮微形态特征，发现该属各种间背面纹饰，腹面纹饰，种孔周围纹饰差异明显；各种间种孔周围形态各具特色。可根据种皮微形态特征的差异，准确鉴别落叶松种子。     

中国小麦黄花叶病毒(WYMV)分布的RT-PCR鉴定

 镰刀菌产生的单端孢霉烯毒素,包括DON、DAS和T-2毒素,是一类重要的植物病原真菌毒素。这类毒素不仅加强病菌的为害程度,而且人畜食用罹病谷物及其制成品易造成中毒。近年来,单端孢霉烯毒素的生物合成途径、关键酶及其基因克隆,毒素在致病过程中的作用,以及利用毒素作为选择压鉴定小麦抗病性和筛选抗病突变体均取得了明显进展。本文对此作一综述。     

稻瘟病抗性自然诱发鉴定及其效果的探讨

 本文对如何进行抗瘟育种,尤其对如何进行稻瘟病自然诱发鉴定提出了一些见解和建议,如不主张重氮施肥,不主张长期灌水等,对指导今后工作有一定值价。     

番茄早疫病抗病性鉴定方法

 早疫病是番茄的主要病害,在我国南北方发生较严重,常给生产造成很大损失。进行抗病育种是解决早疫病的有效途径,此工作在国内已受重视,而抗病性鉴定方法,却是抗病育种的重要环节。     

江苏桃根腐线虫病病原的形态诊断和致病性测定

 桃根腐线虫病在江苏普遍发生,是国内的一种新病害。在严重发病的徐州眺苗圃病株率和病根率分别高达100%和81%。在幼根上病斑黄褐至褐色,大小不一。未栓化的桃根未见受害。典型病株表现衰退,株矮叶黄,根系发育不良。人工接种来自桃根内外的一种短体线虫,按种桃苗都表现出与自然诱发相似的症状和在病斑内繁殖同样的线虫。按该线虫的主要形态特征和测计数据,鉴定为胡桃短体线虫(Pratylenchus vulnus)。调查和接种的结果表明,草莓也是胡桃短体线虫的一种自然寄主。     

S-10菌株产生抗生素的初步鉴别及其应用研究

 烟草赤星病是由半知菌属的赤星病菌(Alternaria alternata)侵染烟草引起的病害。该病在全国各烟区已普遍发生,严重威胁着烟草的生产,但目前尚无理想的控制措施和方法。