高效毛细管电泳测定α-乳白蛋白、β-乳球蛋白A及β-乳球蛋白B的纯度

采用毛细管电泳分析手段,用校正峰面积归一化法同时测定了本实验室购得的α-Lac、β-LgA及β-LgB三个蛋白参考物的纯度,其值分别为75.4%、84.5%和76.9%,相对标准偏差分别为1.6%、0.7%及1.4%。所得结果与应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺平板凝胶电泳法的测定结果进行了比较,并讨论了造成二者差异的原因。结果表明毛细管电泳法是分析此类蛋白的有效潜在手段。     

消除乳清蛋白中β-乳球蛋白致敏性的研究进展

现阶段的婴儿配方奶粉添加脱盐牛乳清粉以调节乳清与酪蛋白的比例,而乳清粉中含有大量的β-乳球蛋白,β-乳球蛋白可能引起婴幼儿的食物过敏,文章就消除乳清中β-乳球蛋白致敏性的研究进展进行了详尽阐述。     

甘肃黑白花奶牛α－乳清蛋白及β－乳球蛋白多态性的研究

在评述奶牛α－乳清蛋白（α－Ｌａ）及β－乳球蛋白（β－Ｌｇ）遗传多态性研究进展的基础上，作者采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对来自３个奶牛场的１７９头甘肃黑白花奶牛、６０头西德黑白花奶牛及６０头美系黑白花奶牛乳样中α－Ｌａ及β－Ｌｇ的多态性作了分析。结果发现甘肃黑白花奶牛同美系、德系黑白花奶牛一样，在这两个基因座上均只有Ａ和Ｂ两个常染色体共显性等位基因；相比之下，其基因频率更接近于美系黑白花奶牛。     

瞬变高压对β-乳球蛋白变性的影响

[目的]探讨瞬变高压条件下β-乳球蛋白的变性规律。[方法]以鲜牛乳为原料,通过瞬变高压处理后β-乳球蛋白的SDS-PAGE和巯基含量检测,考察压力水平、进料温度、处理时间对β-乳球蛋白的影响。[结果]瞬变高压处理可导致β-乳球蛋白发生凝聚和解聚;20~60 MPa范围内随着压力的提高,β-乳球蛋白的凝聚作用增强,但过高的压力(80 MPa)会导致其产生解聚作用;25~45℃进料温度的影响结果与压力类似;而2~8 min处理时间的影响不显著。[结论]该研究为消除β-乳球蛋白的致敏原及高压技术在牛乳中的应用提供了理论依据。     

凝胶色谱法测定乳清中主要蛋白的相对分子量及其分布

本研究采用凝胶色谱分析技术,以牛乳乳清为研究对象,建立一种简便、快速的测定α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的方法。通过一系列的试验,确定最佳凝胶色谱试验条件:采用PBS缓冲液作为流动相,柱温为35℃,检测器为示差折光检测器,流速1 m L/min,进样量为20μL。在该工艺条件下,牛乳乳清中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白被有效地分离纯化,蛋白的回收率在90%以上。本方法具有良好的重复性和稳定性,为短时间内对乳制品中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白进行分离和定量检测提供一种新的方法,满足了科研和生产的需求。     

重组大豆7S球蛋白α′-亚基的分离纯化

为分离及纯化重组大豆7S球蛋白(β-conglycinin)α′-亚基,将大肠杆菌工程菌pET-28a-α′-BL21经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导培养,得到含有重组7S球蛋白α′-亚基目的蛋白的菌液,再经超声破碎、离心得到粗提的重组蛋白。采用AKTA蛋白纯化系统利用Ni 2+亲和层析柱进一步纯化重组蛋白,当采用流速为5mL/min的平衡液平衡Ni 2+柱可以得到较高纯度的目的蛋白,纯度可达89.1%。     

牛β-乳球蛋白基因5′调控成分的分离、克隆及序列分析

利用PCR方法克隆了牛β-乳球蛋白基因5′调控成分(1 449 bp),其中包括5′侧翼序列(645 bp),第一外显子及第一内含子(804 bp).PCR产物回收纯化后,克隆在pMD 18-T Vector的T位点.序列分析表明,该序列与牛β-乳球蛋白A型基因、牛β-乳球蛋白B型基因、山羊和绵羊β-乳球蛋白基因的同源性分别为98.55%,99.79%,90.70%和90.09%.计算机分析表明,此调控成分含有诸多调节因子结合位点或反应元件,其中包括视黄酸反应元件(RARE)、佛波酯反应元件(TRE)、乳腺特异性因子(MSBF)和核因子1(NF1)结合位点等,提示此调控成分可调控外源基因在乳腺细胞中高效表达,可用于构建乳腺特异性表达载体.     

牛乳乳清蛋白过敏性研究进展

乳清蛋白是引起牛乳过敏的主要成分,其中,β-乳球蛋白(β-Lg)和α-乳白蛋白(α-La)是最主要的过敏原。通过蛋白质改性的方法,可以控制和消除乳清蛋白的过敏性。综述了β-Lg和α-La引起过敏的主要结构片段,并介绍了常用的降低乳清蛋白过敏性的改性方法。     

奶山羊β-乳球蛋白基因及其调控区的克隆和序列分析

从奶山羊组织提取基因组 DNA,根据已发表的山羊 β-乳球蛋白基因 (BLG)序列设计引物 ,用高保真长模板PCR法克隆得 6个奶山羊 BLG基因片段。这 6个基因片段的大小和部分限制性酶切图谱与已发表的山羊 BLG基因相同。部分序列测定结果显示 :6个奶山羊 BLG基因片段与山羊 BLG基因相应片段的同源性为 99%。进一步序列测定结果表明 :奶山羊 BLG基因 5′调控区与山羊、绵羊和牛的同源性分别为 99%、95%和 90 % ,3′调控区与这些动物的同源性分别为 99%、97%和 92 %。在乳腺特异表达调控元件集中的 -4 0 6bp区域内 ,奶山羊 BLG基因与山羊 BLG基因有 2个碱基的差异。所克隆的奶山羊 BLG基因调控区与山羊 BLG伪基因显著不同 ,其同源性仅为 83 % (上游调控区 )和88% (下游调控区 )。这些结果表明 :不同种动物的 BLG基因是高度保守的 ,高保真 PCR克隆的奶山羊 BLG基因调控区可用于乳腺特异表达载体的构建     

2型糖尿病患者尿白蛋白和β2-微球蛋白水平的变化及意义

目的:观察2型糖尿病患者病程的各阶段尿微量白蛋白(A lb)和β2-微球蛋白(β2-M G)的水平变化,以尽早发现糖尿病肾病。方法:采用放射免疫法测定53例糖尿病患者病程3个阶段(<5a、5~10 a、>10 a)的尿微量A lb和β2-M G水平,并与36例健康者的A lb和β2-M G水平进行比较。结果:糖尿病患者尿微量A lb和β2-M G与健康者比较显著增高(P<0.01);但β2-M G只有在超过10 a这个阶段才有明显升高(P<0.01)。而尿A lb随着病程延长排出增加,当病程<5 a时,与对照组比较差异无显著(P>0.05);病程5~10 a时明显增加(P<0.01),以后逐年增高。结论:检测尿中微量A lb含量水平是诊断糖尿病早期肾病的较佳指标,早期检测β2-M G水平则诊断意义不大。     

牛β-乳球蛋白基因5’调控成分的分离、克隆及序列分析

利用 PCR方法克隆了牛 β-乳球蛋白基因 5′调控成分 (1 4 4 9bp) ,其中包括 5′侧翼序列 (6 4 5 bp) ,第一外显子及第一内含子 (80 4 bp)。PCR产物回收纯化后 ,克隆在 p MD1 8- T Vector的 T位点。序列分析表明 ,该序列与牛 β-乳球蛋白 A型基因、牛 β-乳球蛋白 B型基因、山羊和绵羊 β-乳球蛋白基因的同源性分别为 98.5 5 % ,99.79% ,90 .70 %和 90 .0 9%。计算机分析表明 ,此调控成分含有诸多调节因子结合位点或反应元件 ,其中包括视黄酸反应元件 (RARE)、佛波酯反应元件 (TRE)、乳腺特异性因子 (MSBF)和核因子 1 (NF1 )结合位点等 ,提示此调控成分可调控外源基因在乳腺细胞中高效表达 ,可用于构建乳腺特异性表达载体     

应用双水相萃取技术分离纯化苏云金杆菌库斯塔克亚种和苏云金亚种的β-外毒素

应用双水相萃取技术在PEG15％、K2HPO410％条件下,对苏云金杆菌库斯塔克亚种（Bacillus thuringiensis subsp．kurstaki）和苏云金亚种（Bacillus thuringiensis subsp．thuringiensis）β-外毒素进行分离和初步纯化,提取纯化的β-外毒素用紫外分光光度计检测,同时进行了热稳定性试验、生物活性检测和生物毒性检测。结果表明：菌种1．1751在15％PEG和10％K2HPO4的双水相分离系统中具有较好的分离效果,采用两水相萃取技术可以分离得到较高浓度的β-外毒素,而且β-外毒素保持良好的活性。     

α-半乳糖苷酶法合成α-半乳糖基-β-环糊精的研究

应用发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶法合成α-半乳糖基-β-环糊精,研究其合成工艺.通过BoxBehnken设计等方法,得出工艺条件为α-半乳糖苷酶用量73 nkat,时间28 h,pH 6.3,温度40℃,振荡速度75 r/min,反应体系包括2mL醋酸缓冲液(50 mmoL/L),β-环糊精0.4 mol/L,蜜二糖0.8...     

反相高效液相色谱法同时检测多种乳清蛋白成分

建立一种快速、简便鉴定和定量检测乳清蛋白中牛乳铁蛋白(bLf)、转基因人乳铁蛋白(rLf)、α-乳白蛋白(α-La)和β-乳球蛋白(β-Lg)的方法。对样品进行离心脱脂和酸法去除酪蛋白,水洗乳脂和酪蛋白以提高α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白(Lf)的回收率。乳清通过高效液相色谱检测,采用Proteonavi反相C4色谱柱,以体积分数为0.1%的三氟乙酸水溶液和乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.5mL/min,柱温35℃,检测波长280nm。结果显示:此方法可以有效分离牛α-乳白蛋白、牛β-乳球蛋白、牛乳铁蛋白和转基因人乳铁蛋白。标准品线性关系良好,平均回收率在正常范围内。     

西农萨能奶山羊β-乳球蛋白基因5''''侧翼区多态性分析

根据β-乳球蛋白基因的DNA序列设计了1对引物,用PCR-RFLP技术对56只西农萨能奶山羊β-乳球蛋白基因5'侧翼区进行了多态性分析.结果发现,在西农萨能奶山羊群体中,PCR所扩增出的710 bp片段经限制性内切酶SamⅠ消化后,表现出3种基因型.等位基因A,B的频率分别为0.91和0.09,3种基因型AA,AB,BB的频率分别为0.821,0.179和0.000.经检验,在所研究的群体中,该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态.     

7S大豆球蛋白α-亚基的原核表达及分离纯化

为制备重组7S大豆球蛋白α-亚基,构建重组表达质粒pET-28a-α并导入大肠杆菌.对重组蛋白的表达条件进行筛选,在OD600为0.6,30℃培养9h的培养液中,目的 蛋白占总蛋白的25.83％.采用镍亲和色谱柱和含350 mmol/L咪唑的磷酸盐缓冲液进一步纯化.在毫克级范围内获得纯度达70.0％的目标蛋白,为进一步...     

大麦β-葡聚糖的制备研究

采用酶解的方法对大麦中β葡聚糖进行分离制备,β葡聚糖的提取率为2%。DNS法和考马斯亮蓝法检测提取品无还原糖和蛋白质。与标准的β葡聚糖进行比较,可作为底物对β葡聚糖酶活性测定。     

大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的研究进展

大豆是一种高蛋白含量的作物,在畜禽养殖中多用作蛋白质原料。但其抗营养因子限制了大豆的使用,其中大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白又是主要的抗原蛋白。文章主要综述了大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的结构、抗营养作用和抗原性的消除方法。