中草药抗禽流感病毒鸡胚试验研究

为了筛选出高效的抗禽流感病毒(AIV)中草药,采用鸡胚试验,对常用清热解毒中草药的体外抗AIV效果进行了测定。结果表明,矮地茶、半边莲、白花败酱草、侧柏叶、大黄、虎杖、菊花、商陆、夏枯草、地锦草、贯众、诃子、仙鹤草对禽流感病毒在体外具有较好的灭活作用。     

中草药与卵黄抗体复合气雾剂体外抑制病毒试验

[目的]将不同配比的中草药与卵黄抗体复合气雾剂体外抑制病毒的能力进行比较,以确定中草药与卵黄抗体的最佳配比。[方法]试验样品为不同配比的中草药"禽喘康复散"与卵黄抗体复合气雾剂,配比分别为1:1.0、1:0.8、1:0.5、1:0.2,分别记为样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。采用病毒致细胞病变抑制试验和血凝抑制试验,测定样品抑制病毒的能力。[结果]结果表明,样品I对腺病毒7型(AdV7)的最小抑制浓度为1/640g/ml,作用弱于样品II,而对其他病毒的作用都最强。样品IV除对腺病毒3型(AdV3)的最小抑制浓度为1/640g/ml,对其余病毒的抑制作用在4种样品中最弱。体外抑制病毒试验表明中草药与卵黄抗体配比为1:1.0对各病毒的抑制效果最好。[结论]选用1:1.0配比的复合气雾剂最能有效防治呼吸道疾病。     

实验性感染禽流感病毒抑制鸡的细胞免疫功能

将60只禽流感阴性健康从肉鸡随机均分为2组,严格隔离饲养;在26日龄全部进行ND油乳剂苗肌肉注射免疫,在30日龄试验组接种禽流感病毒,对照组仅接种健康鸡胚尿囊液,以探讨人工感染禽流感病毒对家禽免疫功能的影响。结果显示：试验组比对照组的外周血T淋巴细胞的转化能力显著降低,试验组出现脾、胸腺及盲肠扁桃体的出血性变化;经新城疫油乳剂苗免疫后10d和15d,试验组血清中抗NDV的HI抗体水平虽然稍高于对照组,但统计学差异不显著,而且法氏囊未出现可见病变。表明该病毒具有显著抑制鸡细胞免疫功能的作用,且对鸡的体液免疫功能没有不良影响。     

禽流感病毒

<正>按照流感病毒核蛋白NP和基质蛋白M1抗原性的不同,流感病毒可分为A、B、C三型。A型流感病毒广泛存在于禽类、人类和其他哺乳动物中,B型和C型主要是人类的病原,C型也可以在猪中分离到。三种型的流感病毒都能感染人,但只有A型流感病毒同流感病毒的暴发有关。A型流感病毒根据其表面血凝素蛋白(HA)和神经氨酸酶(NA)的结构以及其基因特性的不同又可分成许多     

禽流感血凝抑制试验的影响因素分析

血凝抑制试验是检测禽流感抗体效价的一种常用方法,具有简便、快速、灵敏、准确等特点,被区县级动物疫病预防控制中心化验室所广泛应用。但由于试验中不规范的操作和细节注意不够,从而导致不正确的检测结果,而影响试验的准确性。     

抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究

禽流感(AI)是由A型禽流感病毒(AIV)引起的一种发生于禽类的病毒性传染病。笔者以杂交瘤技术研制抗AIV共同抗原的特异单克隆抗体,旨在建立一种双抗体夹心ELISA方法快速检测AIV,以便为A型AIV的快速诊断技术的研究提供理论依据。1材料与方法1.1材料病毒。H9亚型AIV株(AIV-H9)、新     

抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究

利用禽流感H9亚型病毒(AIV-H9)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经免疫荧光试验(IFA)检测,以研制抗禽流感病毒(AIV)单克隆抗体。结果获得了5株特异性抗AIV核蛋白(NP)的单克隆抗体细胞株,分别命名为AIV-NP-2C3、AIV-NP-6A5、AIV-NP-3H9、AIV-NP-7B4、AIV-NP-2H4。这5株单克隆抗体能与所有试验的AIV-H9病毒反应,Western blotting方法鉴定结果表明,单克隆抗体仅识别60 ku的蛋白抗原,而不与新城疫病毒、禽网状内皮组织增殖症病毒、传染性法氏囊病毒等反应。初步应用结果显示,以这些单克隆抗体建立的间接免疫荧光试验或ELISA方法可迅速检测出禽流感病毒,这些单克隆抗体在禽流感的预防监测中将发挥重要的作用。     

抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究

禽流感（AI）是由A型禽流感病毒（AIV）引起的一种发生于禽类的病毒性传染病。笔者以杂交瘤技术研制抗AIV共同抗原的特异单克隆抗体,旨在建立一种双抗体夹心ELISA方法快速检测AIV,以便为A型AIV的快速诊断技术的研究提供理论依据。     

H9亚型禽流感病毒毒种保存期试验

将H9亚型禽流感病毒TJ株检验和基础种子批冻干毒存放于-70℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9、12、18和24个月,随机抽样,分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验;将检验和生产种子批湿毒于-20℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9和12个月,随机抽样分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验。结果表明,检验种子和基础种子冻干毒保存24个月病毒含量和血凝价与保存当日无显著差异,无细菌、霉菌污染;检验用冻干强毒对42和56日龄鸡的毒力与保存当日无明显变化,无细菌、霉菌污染。检验用强毒与生产种子批湿毒保存9个月,毒力和病毒含量、血凝价无明显变化,无细菌、霉菌污染。冻干毒种更长时间的保存期正在进行中,所以将H9亚型禽流感病毒TJ株冻干毒于-70℃保存的有效期暂定为21个月;将湿毒于-20℃保存的有效期定为6个月。     

H9亚型禽流感病毒毒种保存期试验

将H9亚型禽流感病毒TJ株检验和基础种子批冻干毒存放于-70℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9、12、18和24个月,随机抽样,分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验;将检验和生产种子批湿毒于-20℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9和12个月,随机抽样分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验。结果表明,检验种子和基础种子冻干毒保存24个月病毒含量和血凝价与保存当日无显著差异,无细菌、霉菌污染;检验用冻干强毒对42和56日龄鸡的毒力与保存当日无明显变化,无细菌、霉菌污染。检验用强毒与生产种子批湿毒保存9个月,毒力和病毒含量、血凝价无明显变化,无细菌、霉菌污染。冻干毒种更长时间的保存期正在进行中,所以将H9亚型禽流感病毒TJ株冻干毒于-70℃保存的有效期暂定为21个月;将湿毒于-20℃保存的有效期定为6个月。     

抗猪圆环病毒药物的体外筛选

本试验主要检测抗病毒药物(金刚烷胺、利巴韦林、盐酸阿比朵尔、黄连、金银花、连翘、板蓝根)对猪圆环病毒的有效性,为临床用药提供依据.使用PK-15细胞建立抗猪圆环病毒药物的体外筛选模型,采用MTT法检测,然后计算病毒的抑制率.结果显示:金刚烷胺、利巴韦林、盐酸阿比朵尔、黄连、金银花、连翘、板蓝根7种药物的治疗指数分别是124.9,33.8,33.1,13.8,4.1,4.6,5.0.结果表明7种药物在细胞水平上对猪圆环病毒均有抑制作用,而且金刚烷胺和黄连的效果最显著.     

表面活性素体外抗新城疫病毒活性研究

研究了表面活性素(Surfactin)的体外抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV) lasota株效果.观察表面活性素的细胞毒性、对NDV直接灭活作用、抗NDV吸附作用及对NDV生物合成抑制作用.结果表明生物表面活性素对鸡胚成纤维(Chicken Embryo Fibroblasts,CEV)细胞的TD50和TD0分别为62.5、16.125μg/ml;具有直接灭活NDV及抗其吸附效果,可剂量依赖性抑制NDV生物合成.     

病毒宁体外抗单纯疱疹病毒药效评价

采用细胞培养法评价中药制剂"病毒宁"对Ⅰ型单纯疱疹病病毒(HSV-Ⅰ)致细胞病变的影响。结果显示:"病毒宁"最大无毒浓度(TD_0)为1.5 g/L,无环鸟苷最大无毒浓度(TD_0)为62.5 mg/L,二者都能抑制单纯疱疹病毒的复制和增殖,且"病毒宁"优于无环鸟苷。二者对100半数感染剂量(TCID_(50))HSV-Ⅰ与10 TCID_(50) HSV-Ⅰ致细胞病变作用有显著差异(P<0.05),对1000 TCID_(50)HSV-Ⅰ抑制作用不明显(P>0.05)。"病毒宁"MIC为0.08 g/L,无环鸟苷MIC为9.2;无环鸟苷TI为8.0,"病毒宁"TI为36.9,是无环鸟苷的4.6倍,表明"病毒宁"是一种细胞毒性小、治疗指数高的有效抗HSV-Ⅰ药物。     

Alloferon1体外抗犬细小病毒研究

[目的]开发出一种用于防治犬细小病毒病的新药物。[方法]将不同剂量的Alloferon1添加于病毒感染前、病毒感染同时、病毒感染后的细胞培养液中进行体外抗犬细小病毒试验。[结果]FK81细胞接种CPV后2 d,细胞开始变圆,胞质内颗粒增多;4～6 d后病变细胞呈葡萄串状脱落。在80%细胞产生病变时收取病毒,TCID50为10-6.2～10-6.3/ml。对照组细胞上清的血凝反应为阴性,接种病毒细胞上清的血凝价为212。对照组的8孔细胞生长正常,接种病毒的8孔细胞全部产生病变。250.0和25.0μg/ml 2个浓度的抗病毒作用较强,2.5μg/ml的抗病毒作用较弱。在病毒感染前或同时加入多肽的抗病毒作用较好,而在病毒感染后加入多肽的抗病毒作用较弱。[结论]Alloferon1可以用于犬细小病毒病的防治。     

禽流感血凝和血凝抑制试验的质量控制

禽流感血凝—血凝抑制试验是目前我国各地动物卫生监督机构和养殖场监测禽流感疫苗抗体水平的常用试验方法。该方法具有操作简易、能同时进行大量样品分析、结果灵敏快速等特点,在疫病流行病学调查、抗体监测、免疫程序制定等方面发挥了重要作用。但该方法在操作中受较多的因素影响,容易造成试验结果出现偏差。现结合基层实验室具体情况,对该试验方法操作中的影响因素进行了归纳分析。     

抗禽流感病毒免疫相关基因的筛选与鉴定

 【目的】研究抗禽流感病毒免疫的分子机制,发现新的抗禽流感病毒免疫相关基因,为抗禽流感转基因育种的研究奠定基础。【方法】随机选取40只30日龄AA白羽肉鸡,其中20只鸡注射禽流感H5亚型禽流感灭活疫苗,另20只未注射疫苗鸡作为对照,在注射后第9天取脾脏保存在液氮中。应用mRNA差异显示技术,结合反向northern dot blot鉴定技术,来筛选注射疫苗组和未注射疫苗组的差异表达基因。【结果】筛选出13条差异表达EST,其中未注射疫苗组4条,注射组9条表达量增高。应用BLAST工具将EST对核酸数据库nr和dbEST中所有序列进行了同源性分析。DD3、DD4、DD6、DD9、DD11、DD12与已有核酸数据库中的基因克隆或EST具有较高相似性,为已知的EST,但功能未知。DD10、DD13与鸡核糖体蛋白L7a基因具有很高的相似性。DD1、DD2、DD5、DD8为新的EST,提交到GenBank,分别获得登录号为EB714185、EB714186、EB714187、EB714188。【结论】本研究筛选出的鸡核糖体蛋白L7a基因和其它EST对应的未知功能基因可以作为抗禽流感病毒研究中的候选基因,其具体的功能有待今后进一步研究。     

双氢青蒿素体外抑制新孢子虫和弓形虫试验

为确定双氢青蒿素体外抑制新孢子虫和弓形虫的作用效果,该试验在开展双氢青蒿素细胞毒性试验的基础上,对新孢子虫和弓形虫进行了体外抑制试验,同时与青蒿素、桦褐孔菌多糖、黄芩苷、乙胺嘧啶等药物进行了比较.结果表明:双氢青蒿素与青蒿素、桦褐孔菌多糖、黄芩苷、乙胺嘧啶均对新孢子虫和弓形虫有抑制作用,尤其双氢青蒿素在质量浓度为20 ...     

Alloferon2体外抗犬细小病毒作用研究

为试验Alloferon2是否具有抗犬细小病毒作用并开发出一种可以用于防治犬细小病毒病的新药物,将不同剂量的Alloferon2添加于病毒感染前、病毒感染时、病毒感染后的细胞培养液进行体外抗犬细小病毒试验.结果显示,FK81细胞病毒接种CPV后2d,细胞开始变圆,胞质内颗粒增多;4～6 d病变细胞呈葡萄串状脱落,在80％细胞产生病变时收毒,TCID50为10-6.2～ 10-6.1/mL.对照组细胞上清为血凝反应阴性,接种病毒细胞上清的血凝价为212.对照组的8孔细胞生长正常,接种病毒的8孔细胞全部产生病变.250 μg/mL和25 μg/mL2个浓度的抗病毒作用较强,2.5 μg/mL浓度的抗病毒作用较弱;病毒感染前或同时加入多肽的抗病毒作用较好,而病毒感染后加入多肽的抗病毒效果较弱.结果表明,Alloferon2可以用于犬细小病毒病的防治.     

留兰香提取物体外抗猪细小病毒的作用

通过观察病毒引起的细胞病变效应(Cytopathogenic effect,CPE)和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测留兰香提取物抗猪细小病毒(PPV)活性,计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50％inhibitingconcentration,IC50),并从药物预防给药(抗病毒吸附)、直接杀灭及治疗给药(抑制病毒在细胞内的生物合成)3个方面分析留兰香提取物抗PPV活性的作用机制。结果显示：留兰香挥发油在这3种作用方式中对PPV均有抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.008 0 mg/ml、0.001 9 mg/ml、0.003 6 mg/ml,治疗指数(TI)分别为25.88、108.95、57.50;留兰香水提液和粗提物对PPV直接杀灭的半数有效浓度(IC50)分别为0.034 0 mg/ml、0.356 0mg/ml,治疗指数(TI)分别为79.18、8.37;留兰香水提液和粗提物抑制病毒在细胞内生物合成的半数有效浓度(IC50)分别为0.043 0 mg/ml、0.063 0 mg/ml,治疗指数(TI)分别为62.60、47.27,留兰香水提液和粗提物均无抗病毒吸附作用。表明留兰香挥发油在对PPV的3种作用方式中均有安全高效活性,留兰香水提液和粗提物对PPV侵入细胞无阻止作用,但在直接灭活和抑制其在细胞内的增殖方面均有较高的活性。     

禽流感病毒分子生物学研究进展

禽流感是由A型流感病毒引起鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑等家禽的传染病。禽流感病毒H5N1亚型于1997年、H9N2亚型于1999年、H7N7亚型于2003年和H5N1亚型于2004年先后发生感染人的事件,人们不得不重新认识禽流感的公共卫生意义。本文综述了禽流感病毒的基因组、主要蛋白及其功能、毒力分子学基础、分子生物学诊断和疫苗研究等。