美洲商陆抗病毒蛋白cDNA转化烟草的研究

构建两个美洲商陆抗病毒蛋白(Pokeweed antiviral protein,PAP)基因的植物表达载体pBIPAP和pBIPAPv，通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草，经PCR检测证实获得了转基因植株，接种实验显示转基因烟草对TMV具有一定的抗性。     

锰毒对美洲商陆活性氧代谢的影响

以美洲商陆为研究材料,设置了5个锰(Mn)浓度:5(CK)、500、2000、5000、10000/μmol/L,用水培法进行试验.在处理10d和20d时,对其叶片的活性氧代谢指标进行测定.结果表明:随着锰处理时间的延长,锰胁迫使过氧化物酶(POD)和丙二醛(MDA)含量增加,表现为处理第20天时明显大于处理第10天,各时期抗氧化酶和抗氧化物的变化不均衡.锰处理第10天时,超氧化物歧化酶(SOD)和POD活性升高,过氧化氢酶(CAT)保持稳定,酶促抗氧化系统对Mn2+胁迫下活性氧具有清除作用;处理第20天时,SOD、MDA和POD活性均高于对照,CAT含量无明显变化,表明:锰处理下商陆叶片的细胞膜还没有受到明显伤害;随着锰处理浓度的增加,商陆叶片SOD和POD活性提高,保护酶活性的提高有利于活性氧自由基的清除,这可能是商陆耐锰毒的一种生理响应机制.     

美洲商陆和姜黄提取物抑菌活性的研究

采用生长速率法测定了美洲商陆Phytolacca amercana Roxb、姜黄Curcuma longa2种中药植物多种溶剂提取物对玉米小斑病菌Helminthosporium maydis、棉花枯萎病菌Fusarium oxysporium、柑橘绿霉病菌Penicilliam digitatum和小麦纹枯病菌Rhizotoniacereais 4种植物病原真菌的生物活性。结果表明,姜黄提取物对玉米小斑和小麦纹枯2种病原菌有较好的抑制作用,其中乙醚提取物对玉米小斑病菌抑制效果最好,其：EC50为0．4688g／L,石油醚提取物对小麦纹枯病菌抑制效果最好,其EC50为0．034g／L。美洲商陆甲醇提取物对柑橘绿霉和小麦纹枯2种病原菌有较强的抑制作用,尤其是根、叶、果3部分的提取物。从甲醇提取物中分离得到美洲商陆总皂甙,生测结果表明美洲商陆总皂甙对柑橘绿霉病菌有很强的抑制作用,其EC50为0．2032g／L。     

植物提取物对感染烟草普通花叶病烟株品质的影响

[目的]探讨植物提取物对烤后烟品质特性的影响,为开发植物源提取物防治烟草普通花叶病毒病提供理论依据。[方法]采用大田直接喷施方法,测定并分析美洲商陆和绞股蓝的提取物对烤后烟常规化学成分、矿质元素及产质量等指标的影响。[结果]感病植株各品质指标显著降低,喷施2种植物提取物后,感病植株烤后烟各品质指标都得到不同程度的恢复,其效果大小顺序为复配制剂、商陆提取物、绞股蓝提取物,且高浓度效果优于低浓度。[结论]美洲商陆和绞股蓝提取物对正常烟株品质指标无不良影响,但能显著改善感病植株各品质指标,是防治烟草普通花叶病毒病较理想的植物源药剂。     

美洲商陆和姜黄提取物抑菌活性的研究

采用生长速率法测定了美洲商陆Phytolacca amercana Roxb、姜黄Curcuma longa 2种中药植物多种溶剂提取物对玉米小斑病菌Helminthosporium maydis、棉花枯萎病菌Fusarium oxysporium、柑橘绿霉病菌Penicilliam digitatum和小麦纹枯病菌Rhizotonia cerealis 4种植物病原真菌的生物活性.结果表明,姜黄提取物对玉米小斑和小麦纹枯2种病原菌有较好的抑制作用,其中乙醚提取物对玉米小斑病菌抑制效果最好,其EC50为0.4688 g/L,石油醚提取物对小麦纹枯病菌抑制效果最好,其EC50为0.034 g/L.美洲商陆甲醇提取物对柑橘绿霉和小麦纹枯2种病原菌有较强的抑制作用,尤其是根、叶、果3部分的提取物.从甲醇提取物中分离得到美洲商陆总皂甙,生测结果表明美洲商陆总皂甙对柑橘绿霉病菌有很强的抑制作用,其EC50为0.2032 g/L.     

美洲商陆遗传转化体系的构建

在已构建高频再生体系的基础上,研究构建美洲商陆遗传转化体系的条件.结果表明:250 mg/L头孢霉素既能有效抑制根癌农杆菌的增殖,且对不定芽分化影响相对较小;美洲商陆对潮霉素高度敏感.美洲商陆的遗传转化过程为:无菌苗上部经增粗培养后,取茎节在不定芽分化培养基(ABDM)中预培养5d,在D600nm为0.6的菌液中侵染3 ～5 min,再转接到ABDM中黑暗、26℃共培养3d;然后外植体经冲洗后转接至含250 mg/L头孢霉素的ABDM中进行脱菌、分化以及不定芽伸长培养;待不定芽长至2 cm以上时,截取并转接到含3 mg/L潮霉素的生根培养基中进行抗性芽筛选,筛选出的抗潮霉素植株再经GFP显色、PCR、分子杂交等方法进一步阳性确认.     

美洲商陆(Phytolacca americana L.)--一种新的Mn积累植物

通过野外调查和水培试验,研究了锰在美州商陆体内积累情况及对其生长发育的影响,发现并鉴定出美洲商陆(Phytolacca am ericana L.)是一种新的M n积累植物。调查结果发现,美洲商陆对土壤中高含量的锰有很强的忍耐、吸收和积累能力,叶片中M n含量为5160￣8000m g·kg-1,平均为6490m g·kg-1。营养液培养试验证明,美洲商陆对生长介质中的M n有很强的忍耐能力,当生长介质中M n浓度高达10m m ol·L-1,叶片中M n含量达到11.76g·kg-1,植株仍生长正常。地上部M n含量及其积累量均随生长介质中M n浓度的增加而增加,当生长介质中M n浓度为50m m ol·L-1时,叶片中M n含量达到47.06g·kg-1。结果表明,美洲商陆是我国发现的一种新的M n积累植物,为今后探明植物积累M n的机理和M n污染土壤的植物修复提供了一种新的种质资源。     

农杆菌介导的矮牵牛遗传转化美洲商陆抗病毒蛋白基因的研究

为获取矮牵牛抗病毒株系,利用农杆菌介导的叶盘法,对3个品种的矮牵牛进行了PAP(美洲商陆抗病毒蛋白)基因遗传转化试验。结果表明,矮牵牛基因型对抗性芽的再生有显著影响,只有红色波浪系矮牵牛在含100 mg/L的卡那霉素筛选培养基上获得抗性芽,进一步转入含卡那霉素100 mg/L的生根培养基上进行筛选,获得31个株系的生根植株。对再生植株进行PCR检测,初步证明PAP基因已整合到其中29个株系的矮牵牛基因组中。     

烟草花叶病毒弱毒株的筛选及其交互保护作用

采用高温、亚硝酸及两者的复合处理对烟草花叶病毒（TMV）强毒株进行诱变，均可有效提高突变频率，而且复合处理还有较好的协同效应，经生物学接种鉴定及血清学方法筛选，从中获得了TMV-017和TMV-1522个弱毒株，用正交设计法考察病毒接种浓度，接种间隔时间，接种部位以及普通烟生育期等因素对弱毒株交互保护作用的影响，发现以烟株生育期和接种间隔时间两因素影响最大，本试验结果表明，在烟草团棵期，弱毒株和强毒株接种间隔时间为17d时，交互保护作用效果最好。     

秋水仙素诱导美洲商陆四倍体的研究

利用改良L.D.Cua法对美洲商陆进行多倍体诱变,在秋水仙碱浓度为0.2%条件下,设置24h、48h和72 h三个诱变时间,并对所得到的变异株和对照株进行形态学、细胞学等方面的比较研究,结果表明:诱变48 h效果最好;与对照相比,变异株的叶片厚度增加43.75%;叶形指数减少37.95%;气孔纵横径分别增加52.94%和73.01%;保卫细胞内叶绿体数目增加20.91%;花直径增加22.96%;花粉粒直径增加22.47%;果实直径增加23.66%.对变异株进行花粉母细胞减数分裂染色体鉴定.小孢子细胞的染色体数为n=2x=36,而对照小孢子细胞的染色体数为n=x=18,证明变异株为四倍体.     

烟草蚀纹病毒对玉米矮花叶病防治效果的研究

为了研究烟草蚀纹病毒(Tobaccoetch virus,TEV)对玉米矮花叶病(病原为甘蔗花叶病毒(SCMV))的预防效果,在防虫网室内,采用人工摩擦接种病毒的方法进行生物学试验,并用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术对预防效果进行了检测。结果表明,经过TEV保护接种后再接种SCMV的植株长势明显优于只接种SCMV的植株,其叶长、叶宽和株高的差异均达到显著水平(P<0.05);在只接种SCMV全部发病10 d后,有13.8%经保护接种的植株叶片开始轻微褪绿,极大地延迟了花叶症状的发生;攻击接种50 d后,经TEV保护接种后再接种SCMV的玉米植株,体内SCMV CP基因表达量为只接种SCMV玉米的0.113 4倍。说明,SCMV能够有效地减轻玉米矮花叶病的发生及危害。     

烤烟新品系对烟草普通花叶病毒病的抗性鉴定研究

2003年至2005年对15个烤烟品系的烟草普通花叶病毒病TMV抗性进行鉴定,结果表明:抗病品系占33.33%,分别为8902-42、云烟201、云烟202、YH05、云烟203;中抗品系占6.67%,只有9717;中感品系较多,占46.67%,分别为6614、8504、9601、CF209、CF964、CF986和云烟98;感病品系占13.33%,有RGH12和云烟97。对15个品系的病指进行方差分析,在1%水平上,8902-42、云烟201、云烟202、YH05、云烟203与抗病对照Coker176无显著差异,9601、CF209、CF986、RGH12、CF964与感病对照K326无显著差异;在5%水平上,云烟97与感病对照K326无显著差异。研究筛选出8902-42、云烟201、云烟202、YH05和云烟203 5个高抗品系,为烤烟TMV抗病育种提供了很好的材料。     

几种病毒抑制剂控制烟草花叶病的试验效果

烟草花叶病(烟草普通花叶病TMV,烟草黄瓜花叶病CMV)是陕西烟区烟叶生产中危害最大的病害,发病烟田不仅造成产量的损失,而且使烟叶质量严重下降.近年来在陕西烟区常年流行发生,平均发病率为15%左右,重病田块达到100%,部分烟田绝收,为此作者对目前生产上应用的几种病毒抑制剂进行了田间药效对比试验.     

几种药剂防治烟草花叶病毒病田间试验

2005~2006年在广西靖西县进行几种药剂防治烟草花叶病毒病田间对比试验,两年试验结果显示,第3次药后10d 4%嘧肽霉素250倍对烟草花叶病毒病的防效最好,两年的防效分别为58.54%和48.93%,与对照药剂2%菌克毒克250倍的防效相当;其他几种供试药剂对烟草花叶病毒病也有一定的防效,第3次药后10d的防效均在40%以上。田间试验结果表明,4%嘧肽霉素、2%菌克毒克、植物基因活化剂、比施壮和3.95%病毒必克Ⅱ号对烟草花叶病毒病均有较好的防治效果,均可作为防治烟草花叶病毒病的一项辅助措施在生产中轮换使用。     

天葵提取物抗TMV生物活性初探

用系统溶剂提取法得到天葵的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇和水提取物,天葵提取物的总提取率为38．76％。在烟叶半叶枯斑法活性测定离体试验中,首次发现天葵块根的7种不同溶剂提取物都具有较好的抗TMV生物活性,天葵提取物对TMV钝化作用范围为34．12％～68．09％,其中以天葵的石油醚、丙酮和乙醇提取物效果较好,钝化效果分别为68．09％、63．28％和60．59％;保护作用范围为17．48％～65．26％,以石油醚提取物保护作用最好,抑制率达65．26％;治疗作用范围为12．79％～34．24％,丙酮提取物治疗抑制率可达34．24％．     

烟草抗烟草花叶病毒基因N的研究

烟草的N基因是一个较为理想的抗烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV)基因，它和TMV之间的互作是植物和病毒互领域里一个经典的系统。烟草N基因已经分离，TMV基因组结构和功能已经研究得很清楚。这为进一步研究两者的互作奠定了基础，本文介绍了这一领域取得的最新进展用存在的问题。     

多糖对烟草花叶病毒（TMV）的抑制作用研究

【目的】筛选对烟草花叶病毒(TMV)有良好抑制作用的多糖。【方法】采用半叶法,测定了云芝、金针菇、姬松、杏鲍菇、双孢蘑菇、灵芝、猪苓菌、蜜环菌、黑木耳、虫草、白桦茸和平菇等12种真菌多糖在枯斑三生烟(Nitcotiana tabacumvar.Samsun NN)上对TMV的抑制作用,并测定了其对烟草(普通烟NC-89)生长的影响。【结果】云芝多糖、猪苓菌多糖、虫草多糖和蜜环菌多糖对TMV均有较好的抑制效果,其中1g/L云芝多糖对TMV具有良好的预防作用,提前48h多糖处理的预防效果高达92.12%。云芝多糖对烟草具有促生作用,1g/L云芝多糖处理烟苗的地上部鲜质量和最大叶面积增效最为显著,分别较对照提高30.98%和19.74%。田间小区试验表明,经云芝多糖处理后,NC-89烟株健壮整齐,烟叶浓绿光滑,茎围、最顶部叶片面积、产量及上中等烟比例均有所增加,其中1g/L云芝多糖处理烟株的最顶部叶面积、茎围和上中等烟比例分别较对照增加13.51%,9.88%和17.20%。【结论】云芝多糖能有效抑制TMV,并可促进烟苗生长,提高烟叶产量及品质。     

板蓝根粗提物对罗汉果花叶病毒病防治效果试验

为探索防治罗汉果花叶病毒病的新途径,进行了板蓝根粗提物对罗汉果花叶病毒病的室内和大田防治效果试验。结果显示,板蓝根粗提物100倍液对罗汉果花叶病毒病的防治效果最好,其防治效果高于市售化学药剂可卡宁,且大田防治效果比室内高;随着防治次数的增加,其室内防治效果有所提高,而大田防治效果有所降低,表明板蓝根粗提物对罗汉果花叶病毒病的预防效果大于治疗效果;同时,经板蓝根粗提物处理后,罗汉果的产量和大果数均有显著提高。     

抑制烟草花叶病毒侵染的植物提取物的筛选

用半叶枯斑法,在心叶烟上测试了33种植物乙醇提取物水溶液对烟草花叶病毒(Tobacco mosaicvirus,TMV)侵染的抑制效果。结果表明,雪松、桉树提取物能较好地抑制病毒(TMV)侵染,抑制率达到89.7%,78.3%;此外,菟丝子、红花蔷薇、桑、红千层、杜鹃、桂花、香石竹、滇厚朴、荠菜、芦荟等植物提取物也具有抑制烟草花叶病毒(TMV)侵染的效果,抑制率均在50%以上。