应用禽痘病毒表达载体研制重组疫苗的研究进展

禽痘病毒是继痘苗病毒之后又一种重要的动物病毒表达载体，它具有严格的宿主特异性和生物安全性，从而使它成为禽类病原基因工程活载体疫苗研制过程中的一种应用极为广泛的工具；同时它在其它哺乳动物乃至人类病原基因的表达方面也显示了独特的优越性及广阔的开发和应用前景，本文对禽痘病毒作为表达载体的研究进展，应用前景及目前存在的问题作了综述。     

禽痘病毒分子生物学特性及在哺乳动物中的应用

禽痘病毒(Avipoxvirus)是痘病毒科的成员,可以作为病毒载体表达外源基因。近年来禽痘病毒作为非复制型载体的应用已成为国内外研究的热点,成功地构建了表达不同外源基因的重组禽痘病毒,在肿瘤疾病和艾滋病的预防和治疗中都有不俗的表现。文章主要对禽痘病毒的分子生物学特性及其在哺乳动物中的应用作了概述。     

表达鹅γ干扰素重组禽痘病毒的构建及其抗病毒活性的初步研究

为研究表达鹅γ干扰素(GoIFN-γ)基因重组禽痘病毒的抗病毒活性,本研究构建了在禽痘病毒(FPV)早晚期启动子LP2EP2控制下的IFN-γ基因重组禽痘病毒转移载体,将其转染至亲本禽痘病毒S-FPV-017预感染的鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF),使其与禽痘病毒基因组进行同源重组,经过9轮筛选和纯化并进行PCR和间接免疫荧光检测,获得能稳定表达外源基因的重组病毒r FPV-IFNγ-LacZ。利用细胞病变抑制法检测抗病毒活性结果显示,在鸡胚成纤维细胞中重组禽痘病毒表达的IFN-γ对鹅细小病毒的复制具有显著抑制作用。本研究为制备共表达保护性抗原和γ干扰素基因的重组基因工程疫苗研究奠定基础。     

禽痘病毒载体及其应用

禽痘病毒(fowlpox virus,FPV)载体在近几年受到越来越多学者的关注。禽痘病毒载体的原理,是把外源基因插入到病毒的适当位置,通过同源重组把外源基因重组到病毒基因组的复制非必需区域。外源基因通过修饰等过程可以得到高效的表达,表达产物生物活性及相关功能没有改变,刺激机体产生较强的免疫应答。禽痘病毒被用作表达载体后,相继成功地表达了来源于禽类病毒、动物病毒,乃至能感染人类病原体的保护性抗原基因,现已被广泛用作基因工程的重要工具。作者就禽痘病毒粒子的结构、生物学、分子生物学、禽痘病毒载体及其应用等几个方面进行了阐述。     

禽痘病毒载体疫苗研究进展

禽痘病毒和其它痘病毒一样,基因组的高保守区的非复制域可以整合外源DNA,已成为普遍的表达载体,主要应用于痘病毒分子生物学领域、体外生产和蛋白质功能化研究以及作为活的疫苗或工具用于疫苗研究.禽痘病毒载体疫苗不仅能预防禽痘的发生,而且通过插入多个其它病原的保护性抗原基因以诱导产生抗外来抗原的抗体和细胞毒性T细胞反应,提高对相应病原的免疫抵抗力.由于重组病毒所表达的外源基因在机体内随载体病毒的复制而表达,与灭活疫苗相比,它容易生产,免疫剂量小,接种方法简便,接种一次就能获得长期的免疫效果,大大降低了生产成本.     

重组禽痘病毒活疫苗研究进展

近年来已有至少8种用于家禽和哺乳动物的重组禽痘病毒疫苗获得注册。本文对禽痘病毒疫苗株的分子生物学特点,表达不同外源基因的重组禽痘病毒,重组禽痘病毒的安全性,重组禽痘病毒疫苗的免疫等方面进行综述。     

鹅细小病毒VP3基因与鹅γ干扰素基因在重组禽痘病毒中的共表达

为了构建共表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因与鹅IFNγ基因的重组禽痘病毒,本研究将GPV-VP3基因和鹅IFNγ基因克隆到禽痘病毒转移载体中,构建串联基因的禽痘病毒转移载体pSY-GoIFNγ-VP3,采用脂质体法将其转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经蓝斑法筛选重组病毒,并进行8轮蚀斑纯化,以及PCR鉴定和间接免疫荧光(IFA)分析。结果表明,所获得的重组病毒rFPV-GoIFNγ-VP3能稳定表达外源基因。本研究为进一步开展GPV重组禽痘病毒疫苗的研制奠定了基础。     

羊痘病毒活载体疫苗研究进展

广义的"羊痘"包括山羊痘、绵羊痘和结节皮肤病,是羊、牛等反刍动物的重要皮肤传染病,三者分别由山羊痘病毒(Goatpox virus, GTPV)、绵羊痘病毒(Sheeppox virus, SPPV)和结节皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus, LSDV)感染引起,也可交叉感染。GTPV、SPPV和LSDV同属于痘病毒科(Poxviridae)羊痘病毒属(Capripoxvirus)成员,三者统称"羊痘病毒(capripoxvirus, CaPV)"。CaPVs基因组为两端共价闭合的线性双链DNA,对外源基因容纳性较强。病毒本身具有强启动子,可启动外源基因的转录进而对其进行蛋白表达。因此,CaPVs是理想的活疫苗载体,可在体内表达外源抗原并诱导特异性免疫反应。文章综述了CaPVs的基本特征、弱毒活疫苗及CaPV活载体疫苗的研究进展,以期为CaPV活载体疫苗的研究提供参考。     

The use of the fowlpox virus as the vector for vector vaccines

美国Illinois大学的Deoki N Tripathy博士探讨了禽痘病毒作为载体生产疫苗的理论基础,当家禽受到禽痘病毒的攻击时,它们会产生体液免疫和细胞免疫,以抵抗病毒的感染. 他认为,要生产重组病毒疫苗或载体疫苗,需要具备以下条件: (1)禽痘病毒的非必需基因;(2)调节外来基因的启动子;(3)选择标记;(4)适合禽痘病毒生长的细胞培养基.     

以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒转移载体的构建及鉴定

为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AftⅡ两个酶切位点.用于外源基因的插入.为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-gfp-gpt-HA9,将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、western blot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础.