转基因马铃薯中人白介素-12体外诱导人肝癌细胞凋亡的研究（摘要）

[目的]检测从人白介素-12（human interleukin 12,hIL-12）转基因马铃薯中提取的hIL-12的抗肝癌效应。[方法]用MTT法检测转基因马铃薯中hIL-12对人肝癌细胞HepG22.2.15的体外杀伤作用;用AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察转基因马铃薯中hIL-12对HepG22.2.15细胞的诱导凋亡作用。[结果]转基因马铃薯中表达的hIL-12与重组人白介素-12（rhIL-12）在体外对HepG22.2.15具有杀伤作用,而野生对照组无杀伤作用;An-nexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察结果表明,转基因马铃薯中表达hIL-12可诱导HepG22.2.15细胞凋亡。[结论]转基因马铃薯表达体系表达的人白介素-12具有抗肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。     

人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达

[目的]研究人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达。[方法]采用ELISA和WesternBlot,检测转基因马铃薯中hIL-12的表达情况。[结果]转基因马铃薯叶与块茎中均能被hIL-12p70二聚体特异性的抗体识别的蛋白表达,与野生对照组相比均有0.01水平显著差异。WesternBlot分析结果显示,在40kD处有特异性的蛋白条带出现。[结论]所建立的人白介素-12转基因马铃薯表达体系能正确、有效表达hIL-12二聚体。     

转基因马铃薯中纯化人白介素-12的生物学活性分析

分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12（hIL-12）的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素（PHA）活化的外周血单个核细胞（PBMC）增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2．2．15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度的升高而增强;hIL-12纯化品在体外对乙肝病毒DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用.     

从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析

[目的]研究从转人白细胞介素-12（hIL-12）基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。     

人白细胞介素-12的纯化及鉴定

[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件.[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析.在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12.[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5.纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%.Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现.[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12.     

人白细胞介素-12的纯化及鉴定

[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12。[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5。纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%。Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现。[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12。     

转基因马铃薯的研究现状

马铃薯是仅次于水稻、玉米、小麦的世界第四大食用作物。马铃薯主粮化已经成为时下热议的话题之一,其核心优势是产量高、耐瘠薄、消耗水资源少、易于加工等。在耕地和水资源相对紧缺的中国,这些优点无疑具有非常大的吸引力。目前,全球共批准商业化种植的转基因马铃薯40余种,主要性状为:抗病、抗虫和品质改良等,其中部分产品即将在我国申请转基因生物安全证书。详细阐述了转基因马铃薯主要性状的特点、国内外研究进展、审批情况与安全评价的政策,以期为我国政府部门的安全监管及检测标准制定提供参考。     

马铃薯转基因技术应用研究

全球转基因作物种植面积迅速扩大,转基因马铃薯终将进入商品化生产,为此需要在理论、技术和材料上做好充分的准备。介绍了转基因马铃薯的应用范围,探讨了影响农杆菌介导马铃薯遗传转化的因素,评价了转基因马铃薯的生物安全性,展望了未来马铃薯遗传转化的发展前景。     

高蛋白转基因马铃薯试管苗快速繁殖和试管薯的诱导研究

本文报道以复旦大学遗传所８６３计划研究成果高蛋白转基因马铃薯试管苗为材料，选用含有大量元素，微量元素，糖源，碳源和渗透压稳定剂，激素的２０个培养基配方，在实验室进行快速繁殖，试验结果表明，无论是液体培养还是固体培养，能显著促进茎长和分枝数增加的为９号培养基，促根系生长的为１０号培养基，诱导薯块形成的１４号培养基，而液体培养基优于固体培养基。因此可以认为，在液体培养基中加入０．１￣１毫克／升６－ＢＡ     

马铃薯转基因受体系统的建立

以马铃薯（Solanumtuberosum L.）“Wen-40”和“紫花白”2个品种的茎段和叶片为外植体,通过离体培养分化成苗以及对卡那霉素（Km）和头孢霉素（Cef）的敏感性研究,建立了农杆茵介导的稳定、高效的基因转化受体系统。结果表明：“Wen-40”的茎段适合转基因高效再生体系的建立,而25 mg.L^-1的Km适合转基因植株的抗性筛选,低于200 mg.L^-1的Cef浓度对马铃薯的诱导分化影响较小。     

转cry3A基因马铃薯外源蛋白表达和对马铃薯甲虫抗性分析

利用生物技术工程的方法获得了转cry3A基因马铃薯株系,首先对这些转基因株系的表达量和抗虫性进行分析,结果显示,Cry3A抗虫蛋白在4个株系C3-6,C3-11,C3v-5,C3-9新鲜叶片中表达量分别为1.4,2.8,5.0,9.0μg/mg;4个转基因株系离体叶片喂养马铃薯甲虫6 d的致死率分别为30.0%,46.7%,50.0%,100%,幸存的马铃薯甲虫发育滞后1.4～4.2 d,表明抗虫性和蛋白表达量呈正相关。其次,田间调查C3-9转基因株系幼苗期叶片为害情况低于对照,C3-9百株虫口数为26.6头,对照为1 993头,该株系农艺性状和对照没有明显差异,在不使用任何农药的情况下其产量和使用农药的对照相似。因此,转基因株系C3-9为高抗马铃薯甲虫且农艺性状优良的材料。     

转基因马铃薯内源农杆菌脱除

[目的]解决采用抗生素抑菌导致转基因马铃薯植株生长与分化受到抑制的问题。[方法]利用转基因植株诱导试管微型薯,由试管微型薯抽枝获得转基因脱菌植株。[结果]参试3个马铃薯品种中,SI、sⅡ最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋6-BA0．5ms／L＋GA,0．1mg／L＋cef 150me／L,NT最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋ZT0．5mg／L＋GA,0．1mg／L＋cef150mg／L;薯块抽枝最佳培养基为Ms＋ZT0．5mg／L＋NAA0．1mg／L;薯块直径O．5～0．7cm抽枝数最高;转基因脱菌植株在无抗生素快繁培养基中经30d培养污染率为0,脱菌植株茎段粗壮,无分枝现象。[结论]建立的方法脱茵简单易行,为转基因个体的筛选和生长排除了障碍。     

转基因马铃薯内源农杆菌脱除

[目的]解决采用抗生素抑菌导致转基因马铃薯植株生长与分化受到抑制的问题。[方法]利用转基因植株诱导试管微型薯,由试管微型薯抽枝获得转基因脱菌植株。[结果]参试3个马铃薯品种中,SⅠ、SⅡ最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋6-BA0.5mg/L＋GA30.1mg/L＋cef150mg/L,NT最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋ZT0.5mg/L＋GA30.1mg/L＋cef150mg/L;薯块抽枝最佳培养基为MS＋ZT0.5mg/L＋NAA0.1mg/L;薯块直径0.5-0.7cm抽枝数最高;转基因脱菌植株在无抗生素快繁培养基中经30d培养污染率为0,脱菌植株茎段粗壮,无分枝现象。[结论]建立的方法脱菌简单易行,为转基因个体的筛选和生长排除了障碍。     

嘧啶醇对马铃薯试管苗生长的影响

将35个不同基因型的马铃薯试管苗单节段接种在添加20 μmol/L嘧啶醇的MS培养基中,在光照16 h/d和(17±1)℃温度条件下培养6个月后,分析嘧啶醇对试管苗生长的影响.结果显示,除基因型CE76外,20 μmol/L嘧啶醇对于参试基因型试管苗生长速度均有显著的延缓作用,但在基因型间存在较大差异.80%左右的基因型在添加嘧啶醇的培养基中培养6个月后其试管苗株高低于8 cm,其抑制率在50%以上.添加嘧啶醇培养基中培养的试管苗长势健壮,节间距显著缩短而节数没有显著减少,嘧啶醇也强烈地抑制根伸长.     

甘薯遗传转化及其抗病毒转基因研究进展

甘薯病毒病是影响甘薯生产的重要因素之一.传统的抗病育种由于缺乏抗源材料和育种周期长等原因不能满足生产需要,转基因技术的发展为抗病毒甘薯的培育提供了新的途径.鉴此,综述了近年来甘薯遗传转化及其抗病毒基因工程方面的研究进展.