甲型流感病毒NS1蛋白研究进展

甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是引起每年季节性流感及偶尔的流感大流行的主要病原体,严重危害公共卫生和社会经济.IAV属于分节段的单股负链RNA病毒,其基因组编码多种不同的蛋白质,其中非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1)是IAV的调节宿主免疫应答和病毒致病性...     

甲型流感病毒基质蛋白M1的研究进展

基质蛋白1(matrix protein 1,M1)提供了甲型流感病毒蛋白之间一个相互作用的“平台”。M1不仅维持了病毒粒子的形态和表面蛋白的稳定,而且还将8个分节段的基因组固定在病毒的核心位置,最终协调病毒的高效组装和出芽。由于M1的高度保守性,研究人员对其关注度相对较低。为此,对M1的结构和功能进行了详实的回顾,并展望了M1作为新型抗病毒药物靶点的潜能。通过对甲型流感病毒M1的深入理解,以期提高我们对其他病毒基质蛋白的关注度和研究兴趣。     

甲型H1N1流感病毒NS1蛋白核仁定位的研究

为研究2009年甲型H1N1流感病毒的NS1蛋白的核仁定位情况,采用RT-PCR对其NS1基因进行了扩增,将其克隆至PEGX-KG载体,构建重组质粒KG-NS1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达重组蛋白.然后采用GST柱亲和层析方法纯化NS1重组蛋白,免疫家兔来制备多抗,Western blot检测抗体.通过间接免疫荧光对表达不同长度NS1 (NS1-219、NS1-230、NS1-237)的3种重组流感病毒进行了核仁定位的研究,3种重组毒的NS1蛋白存在于细胞核和细胞质,但都不能定位于核仁,说明NS1蛋白的截短与否并不影响其核仁定位,其生物学意义有待于进一步研究.     

甲型H1N1流感病毒及其疫苗研究热点

2009年4月初,北美爆发一种新型甲型(H1N1)流感病毒,并通过各种途径迅速传播,引起了全球极大的恐慌。文章介绍了历史上历次甲型流感大流行,流感的分类与生物学特性,甲型H1N1流感的病原学特点和分子特征,甲型H1N1流感的传染源、传染性、传染途径和传染方式,甲型H1N1流感的临床特征和严重危害。最后指出疫苗是最经济有效的预防流感的手段,国内生产疫苗主要使用鸡胚作为生产基质,筛选出高丰度的流感病毒适应性细胞将成为研究的热点。     

甲型流感病毒反向遗传操作系统研究进展

甲型流感病毒（IAV）是一类严重危害人畜健康的人兽共患病病毒。经过三十多年的发展,从基因型到表型的反向遗传操作系统已被熟练应用于IAV各方面的研究。反向遗传操作系统彻底改变了传统的IAV研究策略,能够通过在基因组中引入特定的突变而改变病毒生物学特性,也为疫苗的研制提供了新思路。本文就IAV反向遗传操作系统的发展历史和基本原理进行了综述。     

甲型H1N1流感病毒实验室生物风险评估

根据目前掌握的资料,从生物学特性、流行特点、临床表现以及实验室活动等方面对甲型H1N1流感病毒做了初步的风险评估,以期为从事甲型H1N1病毒有关操作的实验室做好相关的风险评估及生物安全防护工作提供依据。     

多重RT-PCR方法检测新型甲型H_1N_1流感病毒的研究

为了建立快速检测新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技术,根据GenBank中公布甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,设计并合成两套特异性引物。使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒和自行设计合成的引物建立多重RT-PCR反应,按照预期的PCR产物序列合成的DNA作为阳性对照。结果表明,该方法具有良好的特异性,可以将甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)与传统甲型H1N1、H3N2、H5N1、H6N2和H9N2亚型流感病毒区分。该方法同时具有较高的灵敏度,最低可以检测到100个拷贝的阳性克隆质粒。在对183份发热病人临床咽拭子样品检测中发现了10份阳性样品,对350份猪鼻腔拭子样品检测全部呈阴性,结果与中国检验检疫科学研究院试剂盒检测结果一致,说明了该多重RT-PCR方法在临床检测新型甲型H1N1流感病毒方面具有广阔的应用前景。     

南京市首例甲型H1N1(2009)流感病毒分离及其血凝素基因遗传变异分析

对南京市首例甲型H1N1(2009)病毒进行细胞分离,获得一株具有较高血凝活性的病毒,命名为A/Nanjing/1/2009。在全基因组测序的基础上,对分离株的血凝素基因(haemagglutinin,HA)的遗传特征进行了详细研究。分离株HA蛋白不具有多碱基HA裂解位点,具有低致病性流感病毒特点。与参考株A/California/04/2009相比,分离株A/Nanjing/1/2009HA蛋白的有5个氨基酸发生了突变,其中一个位于Ca抗原位点208位氨基酸(R→K),这一突变虽然还不会影响抗原性的改变,但预示了新甲型H1N1(2009)抗原漂移的启动。分离株有5个潜在糖基化位点,这与近年来古典猪H1N1和北美三源重配猪H1病毒完全一致,保留了古典猪H1病毒的特点。与禽H1病毒相比,分离株HA蛋白受体结合位点上的190(E→D)和225(G→D)位点发生突变,这可能成为新甲型H1N1(2009)在人际间传播的一个重要分子基础。此外,其它受体结合位点上相关氨基酸同时具有人和猪流感病毒的特点。本研究对南京市早期流行的甲型H1N1(2009)流感病毒的HA蛋白的分子遗传特征进行了详细研究,对进一步监测病原变异具有重要指导意义。     

抗猪甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与特性分析

本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体.采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293T细胞中得到表达.将pCAGGS-HA以100 μg·只-1剂量免疫5周龄BALB/c小鼠,获得4株稳定分泌抗HA蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为11G7、3C10、3G3和2B11.其中11G7诱导小鼠产生的腹水HI效价为14log2,中和效价为1:8 192,HI试验结果进一步表明11G7只与甲型H1N1流感病毒发生反应,而不与其他H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H9N2亚型流感病毒反应.该MAb的制备将为建立猪甲型H1N1流感病毒与传统亚型SIV的鉴别诊断方法奠定基础.     

甲型H1N1流感病毒致病机理研究进展

本世纪首次暴发的甲型H1N1流感大流行,严重威胁了人和动物的健康,是其继1918年对全球进行疯狂肆虐之后的又一次严重打击.甲型H1N1流感病毒的主要蛋白结构包括血凝素蛋白(HA)、神经氨酸酶蛋白(NA)、聚合酶复合体(PB1、PB2和PA)、核蛋白(NP)、基质蛋白(M1、M2)及非结构蛋白(NS1、NS2)等.目前研...     

A型流感病毒新蛋白PB1 F2的研究进展

A型流感病毒主要引起人、禽、猪等的流感,PB1 F2蛋白是一种新发现的流感病毒蛋白,是由病毒基因片段2编码的非结构蛋白,可促进线粒体途径引起的细胞凋亡,其对A型流感病毒的复制和毒力等有重要影响。     

禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位研究

为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况.采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察NS1在细胞...     

两株H1N1亚型猪流感病毒NS1蛋白抑制Ⅰ型IFN功能比较

本研究分离得到两株猪源H1N1流感病毒,通过进化树分析发现分别是欧亚类禽H1N1猪流感病毒和类鸭源H1N1猪流感病毒,为了研究两株毒株的NS1蛋白对Ⅰ型IFN产生的抑制能力,分别构建了2个毒株的NS1基因的真核表达载体,将NS1真核表达质粒、Ⅰ型IFN报告质粒与干扰素刺激质粒RIG-I共转染293T细胞,利用双荧光素酶...     

禽流感病毒非结构蛋白NS1在感染和免疫中的作用

NS1蛋白(non-structural 1 protein)是目前发现的唯一的禽流感病毒非结构蛋白,它是一种多功能调节蛋白,对病毒的感染、复制和毒力具有重要的作用;该蛋白主要通过颉颃宿主干扰素及肿瘤坏死因子,抑制宿主蛋白的合成及调控感染细胞的凋亡来实现其作用。作者综述了NS1蛋白生物学特性及其在感染和免疫中作用的研究进展,为进一步研究NS1蛋白的特性及临床应用提供了参考。     

A型流感病毒NS1蛋白的结构与功能

A型流感病毒片段8编码的NS1蛋白是病毒复制和传播的重要调节蛋白。它含有3个功能区,即RNA结合区,eIF4GI结合区和效应区。NS1蛋白在A型流感病毒感染细胞中高水平表达,它的主要功能是抑制NF-κB(nuclear factor-κB)活化和IFN(inter-feron)-α/β介导的抗病毒作用,抑制Jun N末端激酶(jun N-terminal kinase,JNK)和AP-1(activating posttranslation)转录因子活化;下调病毒感染细胞凋亡;促进病毒基因表达,抑制宿主mRNA加工和转运。NS1蛋白的深入研究,为今后预防和治疗A型流感病毒寻找突破口。     

两株不同亚型禽流感病毒NS1基区的表达及抗原性检测

为进一步研究禽流感病毒非结构蛋白NS1的功能及其在临床中的应用，本试验分别对H5N1、H9N2两株不同亚型禽流感病毒的NS1基因进行了原核表达及抗原性检测。实验分别用限制性内切酶EcoRI和XhoI消化不同亚型NS1基因的重组质粒pMD-18T-NS1（H9N2）和pMD-18T-NS1（H5N1），获得目的片段NS1．然后将NS1基因克隆到原核表达载体pProEXHTc中。将重组质粒pProc-NS1（H9N2、H5N1）转化DH5α感受态细胞，用1mmol／L IPTG诱导表达，表达产物进行SDS-PAGE检测，目的蛋白分子量大小为30ku．与预期结果相符。Westera-blot检测表明所表达的蛋白能与NS1的多克隆抗血清反应．并且存在交叉反应。     

两株不同亚型禽流感病毒NS1基因的表达及抗原性检测

为进一步研究禽流感病毒非结构蛋白NS1的功能及其在临床中的应用,本试验分别对H5N1、H9N2两株不同亚型禽流感病毒的NS1基因进行了原核表达及抗原性检测。实验分别用限制性内切酶EcoRI和XhoI消化不同亚型NS1基因的重组质粒pMD-18T-NS1(H9N2)和pMD-18T-NS1(H5N1),获得目的片段NS1,然后将NS1基因克隆到原核表达载体pProEXHTc中。将重组质粒pProc-NS1(H9N2、H5N1)转化DH5α感受态细胞,用1mmol/LIPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,目的蛋白分子量大小为30ku,与预期结果相符。West-ern-blot检测表明所表达的蛋白能与NS1的多克隆抗血清反应,并且存在交叉反应。     

禽流感病毒非结构蛋白的研究进展

流感病毒含8个负链单股独立的RNA片段,共编码10种蛋白。每种蛋白具有不同的结构和功能。其中NS基因合成NS1和NS2两种蛋白质,NS1为非结构蛋白,NS2为结构蛋白,这两种蛋白质大量存在于感染的细胞中。NS1蛋白在病毒转录及感染过程中起重要作用,与禽流感病毒的致病性密切相关,其主要功能是以多种方式解除宿主干扰素防御系统。随着分子生物技术的快速发展,关于NS1蛋白在禽流感病毒致病性方面的作用的研究也取得了一定的进展。文章主要对流感病毒NS基因的特点及其编码蛋白质功能进行综述。     

禽流感病毒宿主特异性与致病性的分子基础研究进展

禽流感病毒不断重排和变异导致新型流感病毒不断出现,其中有些毒株已经获得了感染哺乳动物的能力,严重危害人类公共卫生安全。近年来,对于禽流感病毒致宿主特异性和致病性的研究取得了一定进展。病毒蛋白某些氨基酸位点的突变就能够改变病毒的宿主特异性,使病毒能够跨宿主传播。而且,病毒的RNA聚合酶、NS1非结构蛋白和几种新发现的病毒蛋白都与病毒的致病性密切相关。论文阐述了禽流感病毒宿主特异性与致病性的分子基础,为禽流感跨物种传播机制研究及防控工作提供参考。