牛羊布鲁氏菌疫苗免疫后抗体水平消长规律研究

通过对免疫布鲁氏菌疫苗的牛羊开展抗体检测,掌握布鲁氏菌疫苗免疫抗体变化规律,为制定牛羊布鲁氏菌病合理的免疫监测方案提供技术参考。试验选取布病阴性的牛开展S2和A19疫苗的免疫试验,免疫后第15、30、45天采血,分离血清。选取布病阴性的羊开展S2疫苗免疫,在免疫后第7、15、30、45、135天采血分离血清。应用虎红平板凝集试验(RBPT)方法检测布鲁氏菌病抗体。此外,对使用S2疫苗免疫的6个试点县牛羊开展免疫抗体检测,并应用RBPT方法和c ELISA方法进行比较研究。     

牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区推广应用

为了解牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区牧业村免疫牛的安全性及免疫效果,分别在阿勒泰地区3个县选取6个牧业村,采用皮下注射方式5.0×10¹⁰ CFU免疫牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗,共免疫犊牛300头,在接种疫苗后第7 d,观察并记录免疫牛的健康状况,并采集免疫后15 d、20 d、30 d、90 d和180 d牛血清,按照国家标准规定布病虎红平板凝集和试管凝集试验,完成免疫抗体水平监测,对免疫后180d布病阳性血清,采用布病iELISA鉴别诊断方法,区分标记疫苗免疫抗体与布病自然感染抗体。对免疫后3d、7 d以及15 d牛采集阴道拭子并提取基因组DNA,应用实时荧光PCR(Realtime-PCR)方法,开展布病病原学检测。免疫后7 d犊牛均未出现不良反应,免疫抗体在15d达到最高,阳性率为98.36%,随后逐渐下降,免疫后180 d抗体阳性率为21.67%,阳性血清经iELISA方法检测,结果均为标记疫苗免疫抗体。免疫后3 d、7 d以及15 d牛阴道拭子提取基因组DNA经Realtime-PCR检测均未检出布鲁氏菌阳性。牛...     

探讨血清学检测对羊布鲁氏菌病诊断的有效性

研究以奶山羊为研究对象,采用血清学检测对所采集的438份羊血清进行分析,探究血清学检测对羊布鲁氏菌病诊断的有效性。结果表明:基于虎红平板试验(RBT)初筛出147份阳性,试管凝集(SAT)和竞争性ELISA抗体检测对初筛的147份阳性进行复核,得136份阳性,其中92.5%的样本诊断为阳性。研究表明,血清学检测对于羊布病诊断具有有效性。     

犊牛布病疫苗免疫效果监测及免疫程序的建立

为了探究布鲁氏菌活疫苗A19免疫奶牛后对体液免疫水平及疫苗体外排菌的影响,选取90头3～4月龄布病抗体阴性犊牛,通过颈部皮下免疫布鲁氏菌活疫苗A19,测定免疫后4h、8h、24h、48h、72h和120h的犊牛体温变化,检测免疫30d后转阳性和排菌情况,免疫后90d检测抗体转阴水平。结果表明,犊牛免疫布鲁氏菌活疫苗A19后,体温变化明显,免疫后30d抗体转阳率100%,部分牛只可通过阴道向外界排菌,免疫后90d转阴率达到78.4%。本试验为牧场布病疫苗的使用及建立合理的布病净化程序提供了参考。     

奶牛免疫布鲁氏菌A19疫苗后的抗体变化和排菌情况监测

为探究奶牛免疫布鲁氏菌A19疫苗(以下简称A19疫苗)后的抗体变化规律及向外排菌的风险,使用A19疫苗免疫30头3月龄奶牛,在首免和加强免疫后3个月内,通过虎红平板凝集试验(RBT)和试管凝集试验(SAT)进行抗体检测,采用荧光定量PCR方法,进行血液以及口鼻、阴道拭子的布鲁氏菌核酸检测。结果显示:首免后6 d,奶牛抗体开始出现阳转,60 d后绝大部分奶牛抗体转阴,而加强免疫后3d,又出现抗体阳转;仅在首免后2 d内的阴道拭子和首免后6 d内的血液中检测到布鲁氏菌核酸,而在口鼻拭子中以及其他时间点的血液和阴道拭子中均未检测到布鲁氏菌核酸。结果表明,A19疫苗免疫奶牛抗体阳转快,排菌期短,安全性高。     

2018-2023年西昌市某奶牛场布鲁氏菌病血清学监测分析

为掌握西昌市某奶牛场布鲁氏菌病流行情况,做好奶牛布鲁氏菌病的防治工作,2018-2023年连续六年对该奶牛场采集血清样本,累计采集2 201份血样,经西昌市动物疫病预防控制中心兽医实验室采用虎红平板凝集试验（RBT）、间接酶联免疫吸附试验（iELISA）进行初筛;运用试管凝集试验（SAT）、竞争酶联免疫吸附试验（c ELISA）进行复核。结果显示,2018-2023年虎红平板凝集试验初筛阳性数分别为5、6、4、8、7、0,初筛阳性率分别为1.5%、1.89%、1.25%、1.96%、1.98%、0;间接酶联免疫吸附试验初筛阳性数分别为4、4、3、8、5、0,初筛阳性率分别为1.20%、1.26%、0.93%、1.96%、1.41%、0;试管凝集（SAT）试验与竞争酶联免疫吸附试验（c ELISA）的复核结果显示,2018、2019年阳性数分别为2和1,阳性数占总群分别为0.60%和0.32%,2020-2023连续四年均为阴性。针对奶牛布鲁氏菌病流行特点及血清学检测结果,制定符合该牛场布鲁氏菌病净化的相应防控措施,以期预防控制奶牛布鲁氏菌病的发生,能够及时发现并淘汰病畜,为奶牛健康生产...     

奶牛布病试管凝集试验与补体结合实验结果差异分析

布鲁氏菌病(brucellosis,以下简称布病),是由布鲁氏菌属的细菌通过体表皮肤粘膜、消化道、呼吸道侵入机体,引发的传染-变态反应的人兽共患传染病,是二类动物疫病。为了预防、控制和消灭布病,国家规定每年进行2次奶牛布病检疫净化。我站化验室在多年的布病检测中发现,相同的血样采用试管凝集方法与补体结合方法所产生结果存在一定差异,并对该现象进行调查分析。1布病实验室检测方法我县的奶牛布病检测:县兽医站化验室首先采用虎红平板凝集试验(RBPT)初筛,对初筛检测出的阳性奶牛血样进行试管凝集试验(SAT),经试管凝集试验出现阳性的奶牛血…     

德江县山羊布鲁氏菌病和O型口蹄疫血清学调查

为了解德江县山羊布鲁氏菌病感染情况和O型口蹄疫免疫效果,采集21个乡(镇、街道)山羊血清2 498份,采用琥红平板凝集试验法进行布鲁氏菌病检测,阳性血清用试管凝集法复核;采用阻断ELISA法进行O型口蹄疫免疫抗体检测。结果:山羊血清布鲁氏菌病阳性率为3.76%(94/2 498);O型口蹄疫免疫抗体合格率为64.01%(1 307/2 042)。     

几种布鲁氏菌病检测方法比对结果分析

为比较几种常用布鲁氏菌病(简称布病)检测方法特性,在某疫苗免疫的奶牛场随机选取40头奶牛,采集血清和奶样各40份,然后对采集的血清进行虎红平板凝集、试管凝集、胶体金、酶联免疫吸附试验(iELISA和cELISA)和琼脂扩散方法检测,对采集的奶样进行病原学检测(qPCR)和抗体检测(胶体金)。结果显示:4种国标方法(虎红平板凝集、试管凝集、iELISA和cELISA)检出的阳性样品数量有较大差距,分别为16、6、23和33份,其中经试管凝集试验检出的阳性血清,经其他3种国标方法也检测为阳性;通过胶体金法检出阳性血清数(9份)略高于试管凝集试验,且血清及牛奶样品经胶体金检测结果基本一致;琼扩法检出12份阳性血清,且显示抽检奶牛中存在野毒感染;qPCR和胶体金试纸条对采集奶样的检测结果有较大差距,经qPCR检测仅1份样品呈阳性。结果表明:国标方法中,试管凝集试验特异性最高,iELISA和cELISA敏感性较高;病原学检测临床样品检出率较低,琼脂扩散试验敏感性有限,胶体金法敏感性适中,操作简便,适合布病免疫奶牛场自检。本研究为牛场布病不同检测目的方法选择提供了参考。     

畜间布鲁氏菌病的血清学检测方法

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的人畜共患的传染、变态反应性疾病。病原体可以通过体表皮肤黏膜、呼吸道、消化道进入机体。人感染布病主要是与职业、饮食和生活习惯有关。由于布鲁氏菌感染一周后可出现特异性血清抗体,因此,国内外均用血清学试验检测该病。方法主要有虎红平板凝集、试管凝集试验、胶体金免疫层析试验和酶联免疫吸附试验。     

保护反刍动物安全，防疫研发须跟上——布鲁氏菌病阳性奶牛群的净化措施（续谈）

目前我国已经分离到羊种布鲁氏菌（B．melitensis）1、2、3型,羊布鲁氏菌同样可以感染牛。由于目前以养牛羊为主,牛羊及各种家畜同牧场放牧十分普遍,所以牧区的各种动物（牛、牦牛、山羊、绵羊、马、骆驼、猪等）均应该普遍接种布鲁氏菌疫苗。而且,要研究各种家畜布病疫苗免疫的有效免疫期,明确其抵抗布鲁氏菌强毒的最低滴度,为布病抗体水平监测提供敏感快速的检测技术。例如,ELISA、胶体金等方法;研究带毒家畜接种布病弱毒疫苗后抗体水平的变化规律,为家畜群体布病的监测提供理论数据。再如,一般带毒动物接种疫苗后抗体水平基本没有变化,或达不到抗病滴度。这是因为野毒在动物体内繁殖,刺激产生感染抗体,这时给该动物接种弱毒疫苗,感染抗体则会抑制疫苗菌的繁殖,使免疫抗体不能产生。如果感染抗体部分抑制疫苗菌的繁殖,可能导致动物免疫抗体产生不足。那么,已感染羊种布鲁氏菌的牛接种s2苗,保护抗体是否可以产生？这是一个有必要探讨的问题。专家指出,农牧交错区奶牛的免疫工作急需强化。因该地区奶牛群靠近牧区布病老窝点,被感染的风险大,加之一些地区农民有同圈饲养牛羊的习惯,更易感染布病,所以农牧交错区的家畜应该普遍接种布鲁氏菌疫苗。要加强疫苗免疫抗体水平监测;加强畜群布病临床检查和病原学诊断;做好阳性家畜的无害化淘汰处理;实行科学养畜,做到牛羊分村、分圈饲养。对牧区布病的监测,首先要加强疫苗免疫抗体水平的监测,一旦发现免疫抗体水平低下的个体要及时淘汰;第二,注意临床观察,发现流产、睾丸肿大,关节炎等具有布病类似症状的病例,要及时采样送检,尽早确诊是否存在布病感染。一旦发现阳性病例,及时淘汰无害化处理之,加?     

新疆乌鲁木齐市双峰驼主要疫病的血清学调查

为了解新疆乌鲁木齐市乳用双峰驼口蹄疫、布鲁氏菌病、结核病的流行情况和发病风险,采用虎红平板凝集、试管凝集、液相阻断ELISA和3ABC-I-ELISA等血清学方法,对乌鲁木齐市乳用双峰驼进行血清学调查。结果显示:骆驼的布鲁氏菌病非免疫抗体阳性率为1.7%;未检出结核病阳性;亚洲Ⅰ型、O型和A型口蹄疫抗体合格率分别为67.6%、65.2%和61.7%,口蹄疫非结构蛋白抗体阳性率为1.33%。调查结果表明:该地骆驼口蹄疫免疫抗体普遍低于农业部要求(免疫合格率≥70%);存在骆驼发生布鲁氏菌病和结核病的风险。建议制定适合当地的口蹄疫免疫程序,适当提高免疫次数和免疫剂量;每年开展布鲁氏菌病、结核病的检疫工作,及时淘汰阳性畜,净化骆驼群。     

对免疫布鲁氏菌A19株疫苗奶牛的检测

通过虎红平板凝集试验（RBPT）和标准试管凝集试验（SAT）,对免疫布鲁氏菌A19株疫苗后的奶牛进行抽检,阳性头数分别为3头和2头。同时,在SAT检测阳性奶牛的奶样中,培养分离到疑似布鲁氏菌,经染色,在显微镜下观察到布鲁氏菌。     

奶牛布鲁氏菌病微量凝集试验诊断方法的建立

为探索操作简便、快速、实用的奶牛布病诊断方法,本研究建立了奶牛布鲁氏菌病(布病)诊断96孔V型板微量凝集方法,并优化了试验条件。结果显示,抗原的最佳稀释浓度为1:20,反应最适温度为37℃,反应时间为24 h;为验证本研究建立的微量凝集方法的准确性,对120份奶牛布病虎红平板凝集试验阳性血清样品进行微量法凝集和试管凝集试验,结果显示,微量法与虎红平板凝集试验的符合率为83.3%,试管法与虎红平板凝集试验符合率为80.0%。提示,微量凝集试验可以作为试管凝集试验的替代方法,应用于规模化奶牛场布病的诊断和检疫。     

2019～2021年江西省规模牛羊场布鲁氏菌病净化监测结果分析

为掌握江西省布鲁氏菌病(以下简称布病)净化效果,2019～2021年采用虎红平板凝集试验(RBT)初筛、试管凝集试验(SAT)复核的方法,对全省8个设区市部分牛羊规模养殖场采集的血清进行布病抗体检测.结果表明,2019～2021年,连续三年规模牛羊场布病流行率保持较低水平,净化工作取得了一定的成效,江西省布病总体防控效...     

河南省规模奶牛场布鲁氏菌病流行病学调查报告

笔者对河南省17个省辖市、3个直管县(市)的89个存栏量500头以上的规模奶牛场进行了布鲁氏菌病血清学检测。在被监测奶牛场随机抽检,采用虎红平板凝集试验初筛,阳性样品进行试管凝集试验复核。场群阳性率和个体阳性率分别为48.31%和7.01%。其中,布病免疫场场群阳性率为94.28%,个体阳性率为16.63%;非免疫场场群阳性率为18.52%,个体阳性率为2.54%。笔者按区域统计分析了奶牛布鲁氏菌病的发生现状,针对调查中发现的问题提出了针对性建议,为进一步做好奶牛布鲁氏菌病防控工作提供了参考。     

布鲁氏菌病抗体不同检测方法的比较

布鲁氏菌病(简称布病)是一种危害养殖业的重要疫病。为了筛选出布病净化过程当中适合的检测方法,从而做好动物布病的诊断和净化工作,对GB/T 18646—2002和世界动物卫生组织(OIE)推荐的布鲁氏菌病抗体检测方法进行了比较。结果表明:在检测牛、羊血清布鲁氏菌病抗体的试验中,虎红平板凝集试验与其他方法差异最大,Kappa分析值(K值)在0.122~0.701之间,两种ELISA法一致性最高,K值在0.9以上,ELISA法和试管凝集试验、补体结合试验的K值在0.329~0.566之间,一致性较差,试管凝集试验和补体结合试验的K值在0.483~0.723之间,一致性较好。说明虎红平板凝集试验的敏感性最高,但是易出现假阳性,适合初步筛选,而在确诊时应优先选择间接ELISA试验或竞争ELISA试验,其次是试管凝集试验或补体结合试验。     

羊布鲁氏菌疫苗（S2株）口服免疫试验

为了解羊只布鲁氏菌疫苗(S2株)口服免疫的安全性及免疫效果,在甘肃省平凉市2个乡镇,各选1个行政村,选择散养户饲养的264只羊作为试验羊,进行小范围的布鲁氏菌S2株活疫苗口服免疫试验,其中3月龄以上羊只(包括怀孕母羊)每只口服活菌100×2亿,3月龄以下羊每只口服活菌100亿。分别在免疫后的30、60、180、210 d,采集试验羊血清样品,采用虎红平板凝集(RBT)+试管凝集联合试验(SAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)进行血清抗体检测。结果显示:试验组羊只免疫后均未出现异常反应,口服免疫30 d后,试验羊只2种检测方法检测的免疫抗体阳性率分别为47.3%和53.8%,不同时间2种方法的检测结果基本一致(P 0.05)。结果表明,布鲁氏菌S2株活疫苗按照试验剂量免疫安全有效,适用于所有月龄羊只以及怀孕母羊的整群免疫,可先行试点,逐步推广应用。     

河北省部分地区奶牛口蹄疫免疫抗体监测

为了解河北省奶牛口蹄疫免疫抗体水平,确定现行免疫程序的免疫效果,试验采用口蹄疫抗体液相阻断ELISA方法,对河北省部分地区109个牛场(养殖小区)4 279头6月龄以上的存栏奶牛进行奶牛血清口蹄疫免疫抗体水平检测。结果表明:奶牛口蹄疫抗体ELISA阻断试验平均阳性率为27.13%,口蹄疫O型抗体阻断试验阳性率平均为14.94%,口蹄疫AsiaⅠ型抗体阻断试验阳性率平均为13.22%,口蹄疫A型抗体阻断试验阳性率为5.75%,说明现有的疫苗免疫口蹄疫抗体阳性率不足80%。口蹄疫各型抗体合格率在免疫后第4个月已经下降到较低水平,不能有效防御口蹄疫病毒的感染。由此可知,现有的口蹄疫免疫程序不科学,应调整优化免疫程序。     

应用荧光免疫层析法检测布鲁氏菌病抗体

为了验证荧光免疫层析法检测布鲁氏菌病抗体的可行性,采用荧光免疫层析法分别对阳性血清和临床采集的样品进行检测。结果为荧光免疫层析法能够检出布鲁氏菌阳性血清阳性,而对O型口蹄疫、亚洲Ⅰ型口蹄疫、猪瘟阳性血清检测结果为阴性;能检出布鲁氏菌阳性血清(试管凝集效价1:800)320倍的稀释度;检测1:40稀释倍数的布鲁氏菌阳性血清的变异系数(C.V)为4.66%;检测临床样品60份,结果均为阴性。结果表明,应用荧光免疫层析法检测布鲁氏菌病抗体,特异性强,结果稳定,灵敏度较高,操作简便、试验时间短、不受人为因素干扰,该方法适合布病抗体检测的初筛。