平菇原生质体制备及再生培养研究

平菇菌丝原生质体的释放以菌龄４～６ｄ的幼嫩菌丝,用２％Ｌｙｗａｌｚｙｍｅ采用０．６ＭＫＣｌ为渗稳剂在ｐＨ值为５．５、温度为３５℃、酶解２～２．５ｈ生长较好,可达１０７个／ｍＬ,孢子释放原生质体在１．５％溶壁酶和１．５％纤维素酶混合作用,同样外界条件下原生质体转化率可达１００％。原生质体再生以２号培养基在０．６Ｍ甘露醇的作用下,用载片悬浮滴式再生法,再生率可达１２．３％。     

平菇原生质体再生菌株的ISSR-PCR遗传多样性分析

本研究对平菇(Pleurotus ostreatus)品种‘唐平26’的20个原生质体再生菌株进行了ISSR-PCR遗传多样性分析。结果表明,10条ISSR引物共扩增出117个基因条带,其中107条为多态性条带,多态性指数达91.29%;再生菌株间遗传距离在0.043 0~0.462 4之间,菌株间遗传相似性为0.60~0.96;当遗传相似系数为0.73时,供试菌株可分为3类,第1类为再生菌株R4,第2类为再生菌株R21,第3类为亲本菌株和其他再生菌株。拮抗反应试验表明,再生菌株R4和R21与亲本菌株存在明显的拮抗反应,可能为新的基因型。研究结果表明,利用ISSR-PCR技术可检测平菇原生质体再生菌株中的遗传变异,用于平菇新品种的选育。     

菌核侧耳原生质体制备再生的研究

采用正交试验法,对菌核侧耳原生质体制备再生条件进行优化。结果表明,菌核侧耳原生质体制备最佳条件为:取培养3d的菌丝体,以0.6mol·L-1甘露醇作为渗稳剂,在1.5%溶壁酶的酶液中,30℃酶解1h,其原生质体得率最高,可达1.19×107。最佳再生条件为:取培养9d的菌丝体,利用0.6mol·L-1的蔗糖作为渗稳剂,在1.0%L+2.0%C+1.0%S的酶液中,36℃下酶解4h,其原生质体的再生率最高,可达2.43%。     

响应面法优化平菇单核原生质体的制备及再生技术

为了提高平菇原生质体融合育种效率,本研究通过构建基于原生质体产量及单核原生质体再生率的响应面模型,优化平菇原生质体制备体系。以平菇菌株黑平16-1为试材,分别通过单因素试验考察菌丝菌龄(3～6 d)、酶液浓度(0.5%～2.0%)、酶解温度(28～34℃)和酶解时间(3～6 h)对原生质体制备及再生率的影响,并在单因素试验基础上,设计4因素3水平的响应面试验,建立各因素与响应值(原生质体产量和单核原生质体再生率)之间的数学模型,确定原生质体制备及单核原生质体再生的最佳提取工艺。结果表明,最佳提取工艺为菌龄4 d、酶液浓度1.51%、酶解温度28.3℃、酶解时间3.7 h,在此条件下平菇原生质体产量和单核原生质体再生率分别为(2.25±0.21)×107个·mL~(-1)和(6.80±0.42)%,与模型预测值接近(2.27×107个·mL~(-1)和6.83%),方程拟合度良好,该方法适用于对平菇原生质体的制备及单核原生质体再生条件的参数优化。     

禾谷镰孢原生质体的形成与再生

研究报道了制备禾谷镰孢原生质体的方法琢影响原生质体再生的条件。ＰＤＳ培养液中菌丝和５％绿豆汁中产生的分生孢子，在２８℃下通过蜗牛酶（３％），蜗牛酶＋纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％＋１．５％）酶解，２ｈ开始有原生质体释放，５ｈ左右达释放高峰后趋于稳定，而以纤维素酶（３％）、溶菌酶３％）、蜗牛酶＋纤维素酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶１．５％＋１．５     

禾谷镰孢原生质体的形成与再生

研究报道了制备禾谷镰孢（ＦｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍＳｃｈｗ．）原生质体的方法及影响原生质体再生的条件。ＰＤＳ培养液中培养的菌丝和５％绿豆汁中产生的分生孢子，在２８℃下通过蜗牛酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％＋１．５％）酶解，２ｈ开始有原生质体释放，５ｈ左右达释放高峰，后趋于稳定。而以纤维素酶（３％）、溶菌酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）、纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）处理，原生质体形成效果较差。原生质体在ＰＤＡＳ高渗培养基上再生频率较高（２０％～３０％），在ＭＭＳ上再生频率较低，而在ＮＭＳ上原生质体则不能再生。在ＰＤＡＳ中加入ＫＣｌＯ３和ＭＮＮＧ对原生质体再生有一定影响     

紫孢侧耳营养成分研究

作者对紫孢侧耳子实体进行了分析，结果表明，其中含有人体必需的热源物质－碳水化合物，粗脂肪等，尚含有十分丰富的微量元素。     

球孢白僵菌原生质体制备和再生条件

球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]经液体培养后,采用酶解方法制备其菌丝原生质体,并采取单因素实验对再生条件进行了研究。结果表明,经纤维素酶制备球孢白僵菌原生质体后,再生的最佳条件是:用L-broth培养基培养球孢白僵菌78h,KCl 0.8mol/L(再生用蔗糖0.6mol/L),柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为缓冲系统,纤维素酶:蜗牛酶:溶菌酶=5:2.5:2.5(mg/mL),在32℃水浴中酶解3h(pH自然)。     

原生质体诱变技术选育糙皮侧耳秸秆分解菌株

[目的]为了更有效地开发利用可再生资源秸秆。[方法]以糙皮侧耳为出发菌株,采用酶解法制备原生质体,进行紫外线诱变处理,经初筛、复筛选育高效分解秸秆的菌株。[结果]随着照射时间延长,原生质体再生率下降。原生质体半致死照射剂量约为25 s。原生质体紫外诱变处理后,获得菌株08P217,其各种木质素酶酶活和纤维素酶酶活都远远高于出发菌株,木质素降解率与漆酶酶活呈明显的正相关,与木素过氧化物酶酶活和锰过氧化物酶酶活无相关性。菌株08P217的木质素和纤维素的降解率分别为出发菌株的1.75、1.71倍。[结论]菌株08P217的木质素酶酶活和纤维素酶酶活高于出发菌株,木质素和纤维素的降解能力优于出发菌株,可以作为秸秆开发利用的潜在应用菌株。     

香菇与平菇的融合子后代性状分离研究

本项研究对香菇和平菇进行单孢分离,对二者单孢经过三纯化实验,淘汰有锁状联合和出菇的非单孢无性系。将纯化的香菇和平菇单孢系制备成原生质体,用PEG作聚合剂,使香菇和平菇单孢系的原生质体进行异源融合。经过生物技术操作后获得了属间融合子。融合子F_1代出现性状分离。统计融合子F_3代形态性状,有97％为中间性状,出现2％的平菇性状,仅有1％的香菇性状。经过融合子1—3代性状观察,中间性状基本不稳定,而生物效率低于平菇。     

里氏木霉DWC原生质体制备条件的研究

对影响里氏木霉 (Trichodermareesei)DWC原生质体制备和再生的条件 ,包括菌龄、水解酶液的种类及浓度、酶解温度、酶解时间、再生培养基的稳渗剂进行了研究。结果表明 :当菌龄为 1 0h ,采用 2 %纤维素酶和 2 %蜗牛酶混合液 ,酶解温度 30℃ ,酶解时间 90min ,用 0 .6mol·L- 1 蔗糖作再生培养基的稳渗剂 ,原生质体的形成数为60万个·L- 1 ,原生质体再生率为 1 0 .1 %。     

杏鲍菇枝条菌种关键制作工艺研究

为了筛选出适宜的杏鲍菇枝条菌种制作工艺,以枝条含水量、pH值和满袋天数为指标,对其关键制作工艺进行了研究。结果表明,袋式杏鲍菇菌种制作过程中枝条最适浸泡时间为20 h,添加生石灰最适质量浓度为3.0 g/L,最适培养基配方为:木屑40%、棉籽壳40%、麸皮18%、碳酸氢钙1%、生石灰1%。     

姬菇5号与署优1号原生质体电融合条件的研究

对影响姬菇5号与署优1号原生质体电融合的交流电场频率,交流电场强,直流脉冲场强,脉冲宽幅,脉冲次数,电融合液甘露醇浓度和CaC12浓度等条件进行了研究.结果表明:交流电场频率为1 500KHz,交流电场强为300V/cm,直流脉冲场强为2.5KV/cm的,脉冲宽幅为60ps时,脉冲次数为4.5次,电融合液甘露醇浓度10%,CaC12浓度0.4 ma～I/L为姬菇5号与署优1号原生质体电融合的最佳条件,融合率达21%.     

白平菇细胞工程菌株的耐热性研究

将通过原生质体再生技术制备的19株白平菇细胞工程菌株,分别在20、25、30和35 ℃中培养.结果表明,有6株细胞工程菌株表现出了比出发菌株较高的耐热能力,同时,所有的菌株在20、25和30 ℃下均能生长,而在35℃条件下菌丝只能萌发,不能生长.经进一步的耐热性菌株的筛选,选育出了一株较耐热的菌株P484.     

不同秀珍菇栽培菌株比较

[目的]筛选适宜泰安地区栽培的秀珍菇（Pleurotus geesteranus）优良菌株.[方法]对9个不同来源的秀珍菇菌株的菌丝生长速度、生物转化率和子实体形态特征进行比较.[结果]秀珍菇9号菌丝生长速度较快,菌丝浓密,产量高,生物转化率分别为85.09％和82.08％.[结论]秀珍菇9号是适宜泰安地区栽培的优质高产菌株.     

温度对侧耳不同品种产量影响的研究

通过对3个不同的侧耳品种,利用稻草进行生料栽培法,在湛江进行全年栽培试验,研究不同温度(月份)对不同侧耳品种产量的影响。结果经分析表明,月积温、月最高温度、月最低温度与肺形侧耳的产量均呈正相关性,相关系数分别为0 9969,0 9586,0 9391。月积温、月最高温度、月最低温度与酷暑1号和假姬菇10号直线相关关系不明显。在本试验地区,假姬菇10号为典型的低温型品种,其适宜温度为5 5～29 0℃,最适温度为9 9～26 4℃,生物学效率达95%以上。肺形侧耳为高温型品种,其适宜温度为21 5～34 9℃,最适温度为23 6～34 3℃,生物学效率达61%以上。酷暑1号为中温型品种,其适宜温度为5 5～32 0℃,最适温度为12 5～32 2℃,生物学效率达65%以上。1～2月份及12月份,3个品种之中,假姬菇10号为最佳品种;6～9月份,肺形侧耳为最佳品种;酷暑1号适应性较广,可8个月份的适宜栽培期。     

温度对侧耳不同品种产量影响的研究*

 通过对3个不同的侧耳品种,利用稻草进行生料栽培法,在湛江进行全年栽培试验,研究不同温度（月份）对不同侧耳品种产量的影响。结果经分析表明,月积温、月最高温度、月最低温度与肺形侧耳的产量均呈正相关性,相关系数分别为0.996 9,0.958 6,0.939 1。月积温、月最高温度、月最低温度与酷暑1号和假姬菇10号直线相关关系不明显。在本试验地区,假姬菇10号为典型的低温型品种,其适宜温度为5.5～29.0 ℃,最适温度为9.9～26.4 ℃,生物学效率达95%以上。肺形侧耳为高温型品种,其适宜温度为21.5～34.9 ℃,最适温度为23.6～34.3 ℃,生物学效率达61%以上。酷暑1号为中温型品种,其适宜温度为5.5～32.0 ℃,最适温度为12.5～32.2 ℃,生物学效率达65%以上。1～2月份及12月份,3个品种之中,假姬菇10号为最佳品种;6～9月份,肺形侧耳为最佳品种;酷暑1号适应性较广,可8个月份的适宜栽培期。