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ELISA检测饲料中莱克多巴胺的不确定度分析 总被引:2,自引:0,他引:2
为探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果的影响因素,试验分析了ELISA法检测饲料中莱克多巴胺的不确定度。依据JJF 1059-1999《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》规定的测量不确定度的基本方法,分析不确定度来源并进行量化,找出主要影响因素。结果显示,ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量为43.75 ng/kg时,其扩展不确定度为6.77 ng/kg,k=2。影响不确定度的主要因素为样品称量、测量重复性和标准曲线拟合。 相似文献
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为保证实验室测试结果的准确性和可靠性,依照国家计量技术规范JJF1059—199《测量不确定度评定与表示》,对气相色谱-质谱法测定动物组织中莱克多巴胺残留量进行了不确定度的评定。分析和量化了影响测定结果的各不确定度分量,得出了被测量的合成标准不确定度和扩展不确定度。当动物组织中莱克多巴胺残留量为17.72μg/kg时,其合成标准不确定度为0.47μg/kg,扩展不确定度为0.94μg/kg(k=2)。 相似文献
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《畜牧兽医科技信息》2020,(5)
为了验证ELISA方法检测猪尿中莱克多巴胺残留量的可行性,采用ELISA方法对试剂盒的校正曲线、检测限、加标回收率试验等方面进行了验证。结果为试剂盒校正曲线的线性相关系数为0.9913;样品的定性检出限为0.087ng/mL,定量检出限为0.29ng/mL;添加1.1ng/mL、2.2ng/mL、4.4ng/mL、6.6ng/mL和11.0ng/mL的莱克多巴胺标准液时,变异系数分别为3.06%、8.55%、4.41%、9.92%、8.19%;平均回收率分别为93%、113%、103%、96%、91%。结果表明,应用ELISA方法检测猪尿中莱克多巴胺残留量符合要求,适合检测猪尿中莱克多巴胺残留量的初筛。 相似文献
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以莱克多巴胺单克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附(ELISA)法测定猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留。该法对莱克多巴胺的检测限为0.8ng/mL(g),在空白组织中的添加回收率为80.4%~109.5%,变异系数为5.8%~12.6%。 相似文献
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酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪尿中β-受体激动剂类药物(俗称"瘦肉精")时有假阳性出现。为摸清干扰因素,获得准确的检测结果,提高工作效率,选取生猪饲养中常用的替米考星预混剂(100g/kg)、复方磺胺氯哒嗪钠粉、氟苯尼考粉(100g/kg)、蛋氨酸铬、ZnSO4·H2O等3种兽药和2种饲料添加剂饲喂体重50kg~60kg的健康生长育肥猪。3d后采集尿样分别进行克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测。发现上述3种兽药对克伦特罗、莱克多巴胺检测无假阳性结果出现;对检测沙丁胺醇有不同程度的假阳性结果出现。上述2种饲料添加剂对检测克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇均无假阳性结果出现。 相似文献
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利用液质联用检测方法测定饲料中莱克多巴胺,试验采用乙腈提取试样中的莱克多巴胺,用OasisMCX小柱净化,4mmol/l乙酸胺溶液:乙腈(80:20)为流动相,用PDA检测器分离测定。试验结果莱克多巴胺的检测限为1.37μg/kg,平均回收率为84.4%,最后用质谱进行确证。该方法简单,结果准确,可用于测定饲料中莱克多巴胺的含量。 相似文献
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莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定 总被引:8,自引:0,他引:8
用戊二酸酐将盐酸莱克多巴胺活化成莱克多巴胺-戊二酸酐半醛,用混合酸酐法将莱克多巴胺-戊二酸酐半醛与KLH和BSA偶联,合成免疫原和包被抗原,经核磁共振法和紫外吸收法鉴定,偶联成功.用紫外吸收法测定免疫原和包被抗原的偶联比分别为24:1和2.5:1.用免疫原免疫新西兰白兔,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用间接竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价为1:6 000以上、IC50值为10 ng/mL的多克隆抗体,证明合成的人工免疫原具有免疫原性. 相似文献
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为分析不确定度的来源并对其量化,从而提高检测结果的准确性,对酶联免疫吸附(ELISA)法检测家禽活疫苗中禽白血病病毒污染的测量不确定度进行评估。用禽白血病病毒ELISA检测试剂盒,对4批家禽活疫苗进行禽白血病病毒检测,依据《兽医检测实验室ELISA试验测量不确定度评估指南》(CNAS-GL043),分析试验的不确定度来源,并评定各分量的标准不确定度、合成标准不确定度和扩展不确定度。结果显示,每批家禽活疫苗连续3代细胞培养物的禽白血病病毒OD_(650nm)值不确定度范围的上限值均小于0.300,判定为阴性,即所检测4批活疫苗中没有禽白血病病毒污染。ELISA法检测中引入不确定度概念,不仅可以提高检测结果的准确性和可靠性,而且还可以分析不确定度各分量对测量结果的相对贡献,找出影响检测质量的主要因素,从而有利于实验室质量控制和检测质量的提高。 相似文献
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《上海畜牧兽医通讯》2017,(4)
采用液相色谱-串联质谱法对家畜尿液中莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、西马特罗和妥布特罗6种β-兴奋剂残留的不确定度进行评定,根据《测量不确定度的评定与表示》等相关技术规范要求,通过建立数学模型,对测量重复性、标准曲线、样品量取体积、定容体积、标准溶液、提取回收率等不确定因素进行了评定,对测量结果的各不确定度来源进行分析和量化。得出家畜尿液中莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、西马特罗和妥布特罗6种β-兴奋剂残留的扩展不确定度分别为:0.107、0.062、0.154、0.218、0.063和0.244。 相似文献
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莱克多巴胺属于β-兴奋剂,在动物性产品中残留量过高会危害人类健康。本试验采用酶联免疫法来检测甘肃部分地区猪肉中莱克多巴胺的残留量,根据酶联免疫试剂盒检测出猪肉中莱克多巴胺的检出限为24 μg/kg,以莱克多巴胺的6种标准品测得莱克多巴胺的标准曲线,以此检测甘肃部分地区猪肉中莱克多巴胺的残留量是否超出检出限,并分析不同地方莱克多巴胺残留量存在差异性的原因。 相似文献
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莱克多巴胺多克隆抗体的制备 总被引:3,自引:0,他引:3
采用多元酸酐法活化盐酸莱克多巴胺,用混合酸酐法将活化的莱克多巴胺与载体蛋白(KLH,BSA)偶联,制备了莱克多巴胺免疫原KLH-Rac和包被抗原BSA-Rac。以KLH-Rac免疫新西兰白兔获得了莱克多巴胺多克隆抗体,以BSA-Rac为包被抗原,采用间接ELISA检测抗血清,其效价达到1:6000,间接竞争ELISA测得抗血清的IC50值约为5ng/mL,其与克伦特罗、沙丁胺醇、特布它林的交叉反应性小于0.01%。 相似文献
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用混合酸酐法将莱克多巴胺(Rac)与匙孔蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测得偶联物Rac-KLH浓度为3.6 mg/mL,Rac-BSA浓度为6.2 mg/mL。以偶联物Rac-KLH作为免疫原,免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/O-Ag-14进行融合。以Rac-BSA作为包被抗原,经间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D9、1F3、2C11、5C3、3A10、4A8、6B7、6D5、7C11、7D3。其中单克隆抗体5C3和3A10间接ELISA效价1∶500 000,对莱克多巴胺的半数阻断浓度(IC50)均为3.98 ng/mL,对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的IC50均大于2 000 ng/mL;对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的交叉反应率均小于0.2%。间接竞争ELISA检测莱克多巴胺在0.5~100 ng/mL范围内为线性分布,确定的最低检测限为0.5 ng/mL。 相似文献
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高效液相色谱-串联质谱法研究猪毛发中克仑特罗和莱克多巴胺的残留及代谢规律 总被引:1,自引:1,他引:0
建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时检测猪毛发中克仑特罗和莱克多巴胺残留的方法。猪毛发经1 mol/L氢氧化钠溶液水解、乙酸乙酯萃取、MCX固相萃取柱净化,流动相溶解后用HPLC-MS/MS进行检测。克仑特罗在1.9~463.2 ng/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.999 0);回收率为83.3%~86.6%,相对标准偏差为6.7%~9.2%;检出限为0.3μg/kg,定量限为0.8μg/kg。莱克多巴胺在2.8~562.9 ng/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.999 2);回收率为83.4%~88.4%,相对标准偏差为7.2%~9.6%;检出限为0.4μg/kg,定量限为1.2μg/kg。应用该方法研究了克仑特罗、莱克多巴胺在猪毛发中的代谢规律并进行了猪毛发样品检测。结果喂药7 d至停药21 d猪毛发中均检出克仑特罗、莱克多巴胺残留;检测猪毛发样品25份,1份样品检出克仑特罗,残留量为58.68μg/kg。 相似文献
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直接竞争酶联免疫法检测菜克多巴胺研究 总被引:1,自引:1,他引:0
莱克多巴胺(RAC)是一种β2激动剂,人类食入高残留量莱克多巴胺的食物后会产生严重的毒副作用,研究建立了直接竞争酶联免疫法用于莱克多巴胺的快速检测。用合成的免疫抗原RAC-BSA免疫大白兔,获得了效价为1.6×104的多克隆抗体,用1,4-丁二醚法将RAC与辣根过氧化物酶偶联合成酶标记物,建立了RAC直接竞争酶联免疫吸附法。经质量评价,直接竞争酶联免疫吸附法的检测限为0.1 ng/mL,半数抑制浓度IC50为1.07 ng/mL,批内和批间变异系数均小于11%,抗体与多巴酚丁胺的交叉反应率为8.3%,与RAC的其他类似物几乎不发生交叉反应,猪尿样品中平均添加回收率为104%,表明建立的直接竞争酶联免疫吸附法可用于对莱克多巴胺的残留检测。 相似文献