母猪卵巢颗粒细胞的分离培养及鉴定

颗粒细胞是卵巢卵泡重要的结构组分,其形态、功能伴随原始卵泡的生长启动、增殖、分化、闭锁、排卵 以及黄体形成等生理过程发生各种变化。颗粒细胞是研究细胞增殖、分化和细胞相互作用、信号转导通路的理想细 胞模型。利用注射器吸取有腔卵泡卵泡液,成功分离培养了猪有腔卵泡的颗粒细胞,并进行了FSHR 免疫荧光检测 以及原代猪卵巢颗粒细胞生长活力检测,结果表明院该细胞对FSHR 的免疫荧光呈阳性。流式细胞仪检测发现该细 胞的细胞周期为24 h,但在培养4 d时细胞的活力最强。该研究结果为进一步研究母猪卵巢卵泡功能奠定了基础。     

吡喹酮对雌性大鼠卵巢储备功能的影响

目的:通过研究吡喹酮对雌性大鼠卵巢储备功能的影响,探讨其临床用药的安全性。方法:成年雌性SD大鼠60只,随机分为吡喹酮组(150mg/(kg·d))和对照组(生理盐水组),分别于用药后1、4、8周采用股动脉放血处死受试动物,取血清,放射免疫方法测定雌二醇(E2)浓度、卵泡刺激素(FSH)浓度、酶联免疫方法测定抗苗勒管激素(AMH)浓度。结果:吡喹酮组与对照组血清E2、FSH浓度无明显差异,血清AMH浓度有下降的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:吡喹酮对SD雌性大鼠的卵巢储备功能没有影响。     

牛磺酸对雄性大鼠生殖激素分泌水平的影响

通过给Wistar雄性大鼠饮用添加不同水平牛磺酸和B-丙氨酸(牛磺酸转运抑制荆)的自来水,研究了牛磺酸时雄性大鼠促卵泡生成素、促黄体生成素、雌二醇和睾酮4种生殖激素分泌水平的影响.结果表明:牛磺酸可明显促进雄性大鼠促卵泡生成素、促黄体生成素和睾酮的分泌(P＜0.05).而对雌二醇的分泌则没有明显影响(P＞0.05).     

大豆异黄酮对牦牛卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

[背景]大豆异黄酮主要包括染料木素和大豆苷元,发挥类雌激素样作用,能够清除自由基,促进细胞增殖.颗粒细胞是卵泡内重要的细胞群体,其生理状态与卵巢功能直接相关.颗粒细胞凋亡常引起卵泡闭锁.牦牛是青藏高原特有物种之一,但其繁殖率低,其具体机制尚不明确.卵巢颗粒细胞是研究雌性动物生殖调控机制的理想细胞模型.[目的]探讨大豆异...     

FSH对体外培养猪卵巢颗粒细胞生长及增殖的影响

采集成年健康母猪的卵巢,收集卵泡颗粒细胞,在配制好的培养液中培养。颗粒细胞原代培养体系建立成功后,分别将不同质量浓度的FSH(0.1,0.5,1,5,25 ng/mL)作用于细胞,每隔48 h换1次培养液,加入新的FSH,倒置显微镜下检测细胞的生长及增殖状况。结果表明,FSH质量浓度越大,细胞生长状况越好,差异有统计学意义(P<0.05);在固定质量浓度的FSH作用下,细胞每次换液后生长状况都会变好。FSH能促进猪卵泡颗粒细胞增殖,并与作用时间长短有关。     

LKB1基因对卵巢颗粒细胞类固醇激素生成相关基因的调控作用

【背景】颗粒细胞类固醇激素的合成能力对卵泡发育及成熟具有重要作用,但其关键的调控因子尚不完全清楚。笔者前期的研究表明肝激酶B1（liver kinase B1,LKB1）基因参与细胞的脂类代谢,类固醇激素的合成与脂类代谢密切相关,并且有研究结果亦显示LKB1敲除可引起小鼠卵巢早衰,表明LKB1对维持卵巢的功能很关键,其在颗粒细胞的确切功能需要进一步研究。【目的】探究LKB1在牛卵泡中的表达模式及其对颗粒细胞类固醇激素生成相关基因的调控作用, 为母牛繁殖生理调控研究提供理论依据。【方法】采用免疫组织化学染色对LKB1蛋白在卵泡中进行定位研究;同时分离培养牛原代颗粒细胞,并以促卵泡素受体（follicle stimulating hormone receptor, FSHR）蛋白作为标记基因,细胞免疫荧光染色鉴定颗粒细胞及纯度;然后以原代颗粒细胞为模型,采用siRNA沉默LKB1的技术,利用qRT-PCR方法检测LKB1功能缺失对类固醇激素合成相关基因表达的影响,另一方面采用腺病毒过表达LKB1,qRT-PCR和ELISA技术验证LKB1对类固醇激素合成相关基因表达的调控作用及雌二醇分泌。【结果】 1) LKB1蛋白在卵泡中的细胞均表达,但颗粒细胞的染色信号强于膜细胞,进一步的定量分析显示颗粒细胞的表达量显著高于卵泡膜细胞。2) 分离培养的牛原代卵泡颗粒细胞贴壁生长、细胞形态多呈圆形,能被颗粒细胞标志基因FSHR抗体标记。3) RNAi技术能显著抑制LKB1的表达。与对照相比,siRNA1和siRNA2干扰LKB1的效率分别为48% (P<0.05)和52% (P<0.05);沉默LKB1显著降低颗粒细胞类固醇激素合成基因 STAR (P<0.01)、CYP11A1 (P<0.01)和CYP19A1 (P<0.05)的表达,分别下调了约为对照组的60%、80%和50%。4) LKB1过表达腺病毒及对照组对颗粒细胞均具有高的感染效率,LKB1过表达效率高达10倍（P<0.01）;过表达LKB1显著上调STAR (P<0.01)、CYP11A1 (P<0.01)和CYP19A1 (P<0.05)的表达,进一步研究显示LKB1基因功能获得促进颗粒细胞雌二醇的分泌（P<0.05）。【结论】LKB1在卵泡颗粒细胞中高表达,促进类固醇激素生成基因STAR 、CYP11A1和CYP19A1的表达和雌二醇的分泌。本研究将为LKB1调控牛颗粒细胞类固醇激素合成的功能提供直接的理论依据。     

前列腺素E2对去卵巢2周大鼠骨骼的影响

目的:观察前列腺素E2(PGE2)对去卵巢2周大鼠骨骼的影响.方法:3月龄Sprague-Dawley大鼠24只随机分为3组:(1)假手术组;(2)去卵巢组;(3)前列腺素E2(预防组).预防组用PGE2 0.6mg.kg-1.d-1皮下注射.全部大鼠于实验2周时处死,取胫骨上段不脱钙骨制片后测量.结果:(1)与假手术组比较,去卵巢大鼠2周已出现有统计学意义的骨丢失,减少46%,伴有骨高转化率的改变,即代表骨转化率的参数(Act.F)增加.(2)与去卵巢模型组比较,PGE2组骨量增加,骨形成,骨吸收的参数和代表骨转化率的参数(Act.F)维持在去卵巢的高水平.结论:合成代谢药PGE2能预防去卵巢2周大鼠的骨丢失,表现骨高转化的改变.     

大鼠胆酸负荷对肝脏某些功能影响的研究

ＳＤ大鼠尾静脉给予胆酸，观察胆酸在体内的代谢过程及其对肝脏抗氧化酶活力和肝脏特异的白蛋白的影响，结果表明：血清甘胆酸水平以中胆酸组升高最为显著；血清白蛋白的水平以高胆酸组变动为最为显著。     

芦丁对去卵巢处女大鼠乳腺发育作用的影响

 【目的】通过考察芦丁对去卵巢处女大鼠内分泌激素水平、激素受体表达的影响以及乳腺组织形态学的观察,来研究芦丁促进乳腺发育的类雌激素样作用。【方法】试验选择32只去卵巢处女Wistar大鼠,随机分为四个处理组,假手术Sham组,每日每只灌胃生理盐水(2 mL)一次;卵巢切除Ovx组,每日每只灌胃生理盐水(2 mL)一次;芦丁Ovx＋Rut组,每日每只灌服芦丁(60mg&#8226;kg-1BW)一次;雌二醇Ovx＋Est组,每周每只肌注雌二醇(60µg&#8226;kg-1BW)一次。试验为期两周,试验结束后采集大鼠血液样品、乳腺组织样品等,运用放免技术检测血浆和乳腺组织中雌激素(E2)、催乳素(PRL)、生长激素(GH)的含量,RT-PCR技术检测乳腺组织这些激素受体的表达量,并进行乳腺组织形态学观察。【结果】试验结果显示,大鼠血浆中E2的水平,Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组高于Ovx组(P＜0.05),该两组间差异不显著(P＞0.05),Ovx＋Rut组水平低于Sham组(P＜0.05),Ovx＋Est组与Sham组差异不显著(P＞0.05),乳腺组织中E2含量呈现相同规律;PRL在血浆与乳腺组织中的含量都表现为Ovx组＜Ovx＋Rut组＜Ovx＋Est组＜Sham组(P＜0.05),血浆中GH的含量Ovx组低于Ovx＋Rut组低于Ovx＋Est组低于Sham组(P＜0.05),在乳腺组织GH含量,Ovx组低于Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组(P＜0.05),Ovx＋Rut组低于Sham组(P＜0.05),Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组间差异不显著(P＞0.05),Ovx＋Est组与Sham组差异不显著(P＞0.05);大鼠乳腺组织中雌激素受体ER、催乳素受体PRLR、生长激素受体GHR在Ovx组、Ovx＋Rut组、Ovx＋Est组、Sham组组间数值依次增大(P＜0.05),表现相同变化趋势;乳腺组织形态学观察发现,Ovx＋Rut组、Ovx＋Est组、Sham组乳腺组织的发育显著好与Ovx组(P＜0.05)。【结论】芦丁能够提高去卵巢处女大鼠E2水平,促进PRL、GH分泌,上调乳腺组织中ER、PRLR、GHR的表达量。     

血根碱对大鼠肠平滑肌细胞收缩的抑制作用

采用酶消化法原代培养大鼠肠平滑肌细胞,用倒置相差显微镜测定血根碱对大鼠肠平滑肌细胞收缩的影响。结果表明:酶消化法原代培养的大鼠肠平滑肌细胞纯度高(α–actin检测阳性率达90%以上),密度大,并呈现平滑肌细胞特有的"峰–谷"样排列;血根碱及阿托品可显著抑制肠平滑肌细胞收缩,抑制率分别为32.22%和34.99%;血根碱和阿托品联用对肠平滑肌细胞收缩的抑制率可达68.8%,与单独使用血根碱或阿托品的抑制率差异显著;血根碱对乙酰胆碱、组胺及KCl诱导的肠平滑肌细胞的收缩具有显著的抑制作用;血根碱主要通过作用于细胞膜上的M受体、H1受体和钙离子通道来实现对大鼠肠平滑肌细胞收缩的抑制作用。     

钙营养对温室毛桃果实品质及 生理生化特性的影响

以春元、春艳为试材,研究了在温室条件下喷钙对果实品质及生理生化特性的影响.结果表明:与对照相比,喷钙处理提高了果实中Ca2+的浓度,增加了果实中可溶性糖的含量,降低了可滴定酸的含量,增加了可溶性蛋白及Vc的含量,同时提高了POD的活性,降低了PPO的活性,进而改善了果实品质及贮藏性能.     

小麦-玉米周年轮作制下的控释肥及控释BB肥肥效试验研究

在驻马店市的新坡村与驻马店农科所农场进行了小麦-玉米轮作制下的控释尿素与普通尿素用量试验,结果表明:小麦田、玉米田均以控释尿素100%处理最好.新坡村与驻马店农科所农场的小麦产量分别为8175 kg/hm2和8272 kg/hm2;比同等用量的普通尿素增产873～860 kg/hm2,增产12.0%～11.6%,增产效果显著;小麦氮素利用率以控释尿素100%处理最高,分别为46.1%和48.6%;氮素用量相同时,小麦田控释尿素氮素利用率高于普通尿素氮素利用率.玉米产量为8715 kg/hm2和8848 kg/hm2,比同等用量的普通尿素增产667～686kg/hm2,增产8.3%～8.4%,增产效果显著;控释尿素用量从70%到100%时,小麦、玉米产量随氮肥用量增加而增加,普通尿素也呈现同样趋势,随尿素用量的增加小麦、玉米产量在增加:70%控释尿素与100%普通尿素处理之间产量差异不大,说明使用控释尿素用量比普通尿素用量减少1/3的纯氮量时,小麦、玉米作物产量并不下降.     

种养结构对区域农田系统土壤氮素承载力的影响——以湘潭县为例

以2011年为例,采用土壤表观养分平衡理论(soil-surface balance),分析湖南湘潭县区域农田系统的种养结构对湘潭县农田系统土壤氮素承载力的影响。结果表明,1990—2008年,湘潭县区域农田系统耕地面积增加了7 180 hm2,农作物播种面积减少了26 530 hm2,复种指数下降了58.06%;农作物产量增长了11.57%,生猪存栏量增长了111.94%。2011年,湘潭县区域农田系统氮素供给能力为540.94 kg/hm2,氮素消纳能力为236.40 kg/hm2,土壤氮素承载力为304.54 kg/hm2,表现为“盈余”状态。较高的氮素盈余主要源自于过量化肥氮的施入。     

秦岭南麓自然保护区内中蜂野化放归初步探究

摘要：中华蜜蜂 （Apis cerana ceraca Fab.简称中蜂） 是东方蜜蜂种中的一个亚种,在我国已经生息繁衍了数千万年,是我国各种被子植物的主要传粉昆虫,有不可替代的生态价值。由于外来蜂种的引入、气候变化、生态环境的破坏以及病虫害的影响,中蜂野外种群锐减。于是探究人工饲养中蜂野化放归的可能性很有意义。保护区内远离人为干扰,无外来蜂种的侵袭,自然环境没有污染,植物资源丰富,很适合开展中蜂野化放归研究。结果表明,人工饲养的中蜂在野外受到胡蜂侵袭最为严重,其次是兽类及鸟类的侵袭,以上原因是影响中蜂野外种群发展的主要原因。     

不同碳源、氮源对刺五加黑斑病菌生长的影响

摘要 本论文主要针对刺五加黑斑病菌在不同碳源和氮源处理条件下的生长情况进行了较系统的研究，掌握了对刺五加黑斑病菌最适合生长的碳源为对照强于甘露醇，强于果糖，强于完全葡萄糖，强于蔗糖，强于麦芽糖，强于乳糖，强于淀粉（完全淀粉），强于糊精。其中对照最适合病原菌菌丝的生长，糊精最不适合病原菌菌丝的生长，而其它种碳源较适合病原菌菌丝的生长。对刺五加黑斑病菌最适合生长的氮源为完全蛋白胨强于对照，强于谷氨酸，强于天门冬酰胺，强于丙氨酸，强于硝酸钾，强于硝酸钠，强于硫酸铵，强于氨水，强于氯化铵。其中，完全蛋白胨最适合病原菌菌丝生长；氯化铵生长缓慢，最不利于刺五加黑斑病菌菌丝的生长发育；其它各氮源较适宜病原菌菌丝的生长。     

寒地水稻氮磷钾营养诊断技术的研究

摘要：采用多点田间生物试验法,在2006-2007年对寒地水稻进行了两年营养诊断技术研究,形成了寒地水稻氮、磷、钾的土壤和植株营养诊断技术与方法。氮素诊断在分蘖期和孕穗期均以叶片叶绿素相对含量作为诊断指标最好;磷素营养诊断在分蘖期土壤全磷和植株全磷均可作为诊断指标,在孕穗期以植株全磷为诊断指标最好;钾素诊断在分蘖期土壤速效钾和植株全钾均可作为这个时期的诊断指标,在孕穗期以土壤速效钾进行钾营养诊断最能反映生产实际。     

留芽数对观赏芍药分株苗生长及光合特性的影响

为探寻不同留芽数对芍药分株苗的生长及光合特性的影响,以国际切花市场流行的芍药品种‘Sarah Bernhardt’一年生分株苗为试验材料,按留芽数将其划分为3个等级：一级(留芽数大于或等于5个)、二级(留芽数3～4个)、三级(留芽数1～2个),对各级分株苗形态指标及光合特性进行比较分析。结果表明：二级分株苗长势最佳,日净光合速率值较高,光饱和点与光补偿点分别为21、1 056 µmol/(m2•s);就叶绿素含量(叶绿素a、b含量分别记作chla、chlb)而言,二级分株苗的chla/chlb值最高,其chla、chlb及chla+chlb值也较高,表明二级分株苗对弱光的利用效率较高。     

多效唑喷施浓度及时期对谷子性状及品质的影响

摘 要：为探明多效唑对谷子优质品种‘晋谷21号’的调控效果,提高‘晋谷21号’的抗逆性能,在3叶期、6叶期、9叶期三个时期,以0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6% 五个浓度作了喷施多效唑试验。结果表明：喷施多效唑后,对‘晋谷21号’谷子下部节间长度（1~9节）有明显的抑制作用,并减少节间数量,使株高明显降低;喷多效唑的最佳时期为谷子出苗后9叶期;喷施多效唑的最佳浓度为0.4%~0.5%;喷施多效唑后不会影响‘晋谷21号’的谷子产量和小米品质。     

湖南桂阳地区烟叶部分中微量元素含量分析

为深入研究近年来湖南桂阳地区烟叶内中微量元素含量的变化状况,分别于2005年、2007年从湖南省桂阳县的和平镇和桥市乡两个地区采集不同部位的烟叶样品,运用ICP测定方法对其部分中微量元素含量进行测定,并将桂阳地区烟叶与津巴布韦烟叶内中微量元素含量的进行对比分析,结果表明:与2005年相比,2007年桂阳地区烟叶中硼、铁、铜的含量明显降低,处于较低水平,锰的含量有所下降,但是仍在适宜范围,个别部位烟叶中镁和钙的含量略有下降,仍处于较低水平.与津巴布韦烟叶相比,桂阳地区烟叶中B,Fe,Cu的含量较低.建议桂阳地区应注意对烟叶的中微量元素的补充.